葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法技术

本发明专利技术的公开的是葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法，通过乙酸乙酯萃取，水相中原花青素高聚体共萃取三次，然后以儿茶素为裂解剂，乙醇为溶剂，在酸性下裂解反应，原花青素高聚体裂解为原花青素低聚体，本发明专利技术裂解反应条件可控，不但使高聚体得到利用，且增加了多酚的利用率，用色谱分离得到原花青素B4的含量，产物纯度高，达到99.1%，原花青素B4收率为4.2～5.0%。

Pyrolysis of Proanthocyanidin Polymer and Extraction of Proanthocyanidin B4 from Grape Seeds

The invention discloses a method for extracting proanthocyanidin polymer and proanthocyanidin B4 from grape seeds by ethyl acetate extraction, water phase proanthocyanidin polymer co-extraction for three times, then using catechin as cracking agent, ethanol as solvent, in acid cracking reaction, proanthocyanidin polymer splitting as proanthocyanidin oligomer, and the conditions of the splitting reaction are controllable, not only can the method be used to extract proanthocyanidin oligomer. The content of proanthocyanidin B4 was obtained by chromatographic separation. The purity of the product was 99.1%, and the yield of proanthocyanidin B4 was 4.2-5.0%.

【技术实现步骤摘要】
葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法
本专利技术涉及葡萄籽中提取有效成份，具体涉及葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法。
技术介绍
葡萄籽提取物（GrapeSeedExtract，GSE）是从葡萄籽中提取的一种人体内不能合成的新型高效天然抗氧化物质，它能有效清除人体内多余的自由基，具有延缓衰老和增强免疫力的作用。GSE中主要活性成分为葡萄籽多酚（GrapeProanthoCyanidins，GPC)，它由原花青素单聚体（儿茶素、表儿茶素、没食子酸酯）、低聚原花青素（OligomericProanthoCyanidins，OPC)、高聚原花青素（PolymersProanthoCyanidins，PPC)组成。三类原花青素聚合体体外抗氧化能力测试结果显示，随聚合度提高抗氧化能力增加。口服吸收实验研究结果显示，原花青素低聚体中二聚体（ProcyanidinsB1、B2、B3、B4）生物利用度最高，单聚体生物利用度较低，原花青素高聚体口服不吸收，葡萄籽原花青素高聚体需要裂解为低聚体才可以被生物吸收利用，因此若将原花青素高聚体裂解为原花青素低聚体中二聚体就提高了葡萄籽的利用率。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法，该提取方法可以将原花青素高聚体裂解为原花青素低聚体，增加了原花青素B4提取率。葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法，其步骤如下：a、将市售葡萄籽提取物10g溶于500ml水，4℃环境中静置分层，分离有机相，水相再用500ml乙酸乙酯萃取，萃取后分离，水相共萃取三次，最后水相减压浓缩至干燥，得黄色的高聚组分。有机相中为低聚组分，即多酚和原花青素低聚体，可以抗氧化物质利用；b、将上述高聚组分溶于乙醇中，加儿茶素和滴加盐酸进行反应，盐酸终浓度为0.02～0.1M，反应温度控制在30～50℃，反应时间为10～30分钟，得反应液，所述高聚组分与所述乙醇的质量体积比为0.1g：5ml，所述高聚组分与所述儿茶素的质量比为0.1g：0.1～0.3g；c、将上述反应液，用0.22μm滤膜过滤，液相色谱分离，色谱柱为WelchXB-C18，其规格为21.2mm×250mm、10μm，柱温25℃，流动相：乙腈和质量百分浓度0.2%的乙酸水，等度洗脱，0～25min洗脱时，流动相中乙腈体积占20%，25～40min洗脱时，流动相中乙腈体积占45%，每次上样液50ml，检测波长280nm，接收30～32min洗脱组分；d、将上述洗脱组分，减压浓缩至干燥，与300～400目硅胶按重量比1:1混匀，过200～300目硅胶柱，乙酸乙酯洗脱，减压浓缩乙酸乙酯洗脱液至干燥，得到无色晶体原花青素B4。本专利技术的优点在于葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法，通过乙酸乙酯萃取，水相中原花青素高聚体共萃取三次，然后以儿茶素为裂解剂，乙醇为溶剂，在酸性下裂解反应，原花青素高聚体裂解为原花青素低聚体，本专利技术裂解反应条件可控，不但使高聚体得到利用，且增加了多酚的利用率，用色谱分离得到原花青素B4的含量，产物纯度高，达到99.1%，原花青素B4收率为4.2～5.0%。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术作进一步详细描述。实施例1市售葡萄籽提取物10g溶于500ml水，4℃环境中静置分层，水相用500ml乙酸乙酯萃取，萃取后分离，水相共萃取三次，水相萃取液浓缩至干燥，得黄色的高聚组分。有机相中为低聚组分，即多酚和原花青素低聚体，可以抗氧化物质利用；将高聚合度组分溶于乙醇中，加儿茶素和滴加盐酸，高聚组分与乙醇的质量体积比为0.1g：5ml，高聚组分与儿茶素的质量比为0.1g：0.2g，盐酸终浓度为0.04M，反应温度控制在35℃，反应时间22分钟，控制反应液过0.22μm滤膜过滤，滤液用色谱分离，色谱柱为WelchXB-C18，其规格为21.2mm×250mm、10μm，柱温25℃，流动相：乙腈与0.2%乙酸水的混合液，等度洗脱，0～25min洗脱时，流动相中乙腈体积占20%，25～40min洗脱时，流动相中乙腈体积占45%，检测波长280nm，每次上样液50ml，收集30～32min洗脱组分，合并洗脱组分，减压浓缩至干燥，与300～400目硅胶按重量比1:1混匀，过200～300目硅胶柱，乙酸乙酯洗脱，减压浓缩乙酸乙酯相至干燥，得到0.31g无色晶体原花青素B4。实施例2与实施例1基本相同，所不同的只是高聚组分与儿茶素的质量比为0.1g：0.1g，盐酸终浓度为0.1M，反应温度控制在30℃，反应时间为30分钟。实施例3与实施例1基本相同，所不同的只是高聚组分与儿茶素的质量比为0.1g：0.3g，盐酸终浓度为0.02M，反应温度控制在50℃，反应时间为10分钟。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法，其特征在于步骤如下：a、将市售葡萄籽提取物10g溶于500ml水，4℃环境中静置分层，分离有机相，水相再用500ml乙酸乙酯萃取，萃取后分离，水相共萃取三次，最后水相减压浓缩至干燥，得黄色的高聚组分；b、将上述高聚组分溶于乙醇中，加儿茶素和滴加盐酸进行反应，盐酸终浓度为0.02～0.1M，反应温度控制在30～50℃，反应时间为10～30分钟，得反应液，所述高聚组分与所述乙醇的质量体积比为0.1g：5ml，所述高聚组分与所述儿茶素的质量比为0.1g：0.1～0.3g；c、将上述反应液，用0.22μm滤膜过滤，液相色谱分离，色谱柱为Welch XB‑C18，其规格为21.2mm×250mm、10μm，柱温25℃，流动相：乙腈和质量百分浓度0.2%的乙酸水，等度洗脱，0～25 min洗脱时，流动相中乙腈体积占20%，25～40 min洗脱时，流动相中乙腈体积占45%，每次上样液50ml，检测波长280 nm，接收30～32min洗脱组分；d、将上述洗脱组分，减压浓缩至干燥，与300～400目硅胶按重量比1:1混匀，过200～300目硅胶柱，乙酸乙酯洗脱，减压浓缩乙酸乙酯洗脱液至干燥，得到无色晶体原花青素B4。...

【技术特征摘要】
1.葡萄籽中原花青素高聚体裂解与原花青素B4的提取方法，其特征在于步骤如下：a、将市售葡萄籽提取物10g溶于500ml水，4℃环境中静置分层，分离有机相，水相再用500ml乙酸乙酯萃取，萃取后分离，水相共萃取三次，最后水相减压浓缩至干燥，得黄色的高聚组分；b、将上述高聚组分溶于乙醇中，加儿茶素和滴加盐酸进行反应，盐酸终浓度为0.02～0.1M，反应温度控制在30～50℃，反应时间为10～30分钟，得反应液，所述高聚组分与所述乙醇的质量体积比为0.1g：5ml，所述高聚组分与所述儿茶素的质量比为0.1g：0.1～0.3g；c、将...

【专利技术属性】
技术研发人员：王强，汪晶，文魁山，钱金金，
申请(专利权)人：宁波天鼎生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33