一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法，属鹅血副产物深加工技术领域。本发明专利技术以鹅血为原料，分离鹅血血红蛋白，然后利用碱性蛋白酶，通过工艺优化降解大分子蛋白质，富集具有抗氧化活性的多肽以及氨基酸，同时通过逐级分离得到小于1KD的小分子活性物质，然后利用磷脂、胆固醇和吐温80包埋小分子活性物质制得到纳米脂质体。该脂质体可以有效地防止外界环境对鹅血抗氧化小分子酶解物的破坏，提高其稳定性，同时提高了鹅血蛋白的消化吸收率，并使其活性成分在胃肠环境分步缓慢释放，充分发挥其生理功能。本发明专利技术降低了鹅血直接排放对环境产生的污染问题，使鹅血得到高附加值利用，并可进行工业化生产。

Preparation of nanoliposomes of goose blood antioxidant small molecule enzymatic hydrolysate

The invention relates to a preparation method of goose blood antioxidant small molecule enzymatic hydrolysate nanoliposomes, belonging to the technical field of goose blood by-product deep processing. The invention takes goose blood as raw material, separates goose blood hemoglobin, then uses alkaline protease to degrade macromolecule proteins, enriches polypeptides and amino acids with antioxidant activity, and separates small molecule active substances less than 1KD step by step, and then uses phospholipids, cholesterol and Tween 80 to encapsulate small molecule active substances to prepare nanoliposomes. The liposome can effectively prevent the destruction of antioxidant small molecule enzymatic hydrolysates of goose blood in the external environment and improve its stability. At the same time, it can improve the digestibility and absorption of goose blood protein, and make its active ingredients release slowly in the gastrointestinal environment step by step, giving full play to its physiological functions. The invention reduces the pollution problem caused by the direct discharge of goose blood to the environment, makes goose blood get high added value utilization, and can be industrialized production.

【技术实现步骤摘要】
一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法
本专利技术涉及一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法，属鹅血副产物深加工

技术介绍
鹅血是一种高蛋白质资源，蛋白质含量高达19%，其中血红蛋白含量约为12.99g/100mL占全血蛋白的2/3。而血红蛋白含有高活性SOD，以及水禽所特有的重量缺失型免疫球蛋白IgY(△Fc)，这些物质能清除体内自由基、增强机体免疫功能。以鹅血制备抗氧化水解物，既可合理利用鹅血蛋白质资源，又降低了直接排放对环境的污染。利用鹅血作为原料制备抗氧化多肽，可有效提高鹅血水解物中抗氧化物的含量，增加抗氧化效果。但由于鹅血抗氧化小分子酶解物本身性质不稳定，见光、氧气容易分解，而且酶解产生抗氧化肽的同时也产生了疏水性多肽，有着令人难以忍受的苦味。抗氧化肽直接口服还要面临着在消化道最初阶段被分解的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：提供一种可有效提高鹅加工副产物的利用价值以及附加值；解决现有鹅血利用率低和环境污染的问题，进而提高了鹅血蛋白的附加值、消化吸收率以及功能特性的鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法。本专利技术的技术方案是：一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：1）鹅血血红蛋白的分离：将新鲜鹅血进行离心分离（3500r/min，15min），并用5倍体积的生理盐水（0.9%）洗涤下层分离物并收集，在收集的下层分离物中加入蒸馏水，定容至原鹅血体积。将分离处理液进行超声细胞破碎，以释放出细胞内的蛋白质，超声功率为250w，时间为12min。离心过滤。将超声破碎后的混合液进行离心分离（3500r/min，10min）然后过滤得到鹅血红蛋白。2）酶解处理：将前处理得到的鹅血红蛋白用蒸馏水调整浓度至6%，pH值为10.0，然后在50℃下预热5min，然后添加6000U/g的碱性蛋白酶，在50℃条件下避光酶解5.0h（转速90r/min），之后100℃灭酶10分钟，离心（3000r/min，10min）取上清液即为鹅血酶解液。3）超滤分离：将鹅血酶解液依次通过10KD,3KD，1KD的超滤离心分离，离心条件为5000g/30min，收集最终组分得到鹅血抗氧化小分子酶解物备用，同时分析其抗氧化能力。4）纳米脂质体的制备：取磷脂1g，胆固醇0.125g，加乙醚30ml溶解，得到有机相。鹅血抗氧化小分子酶解物1.5mL加8.5mLPBS水得到内水相。将内水相与有机相混合均匀，超声冰浴处理5min，功率为400w。将超声处理后的混合液快速倒入旋转蒸发仪样品室进行蒸发浓缩，水浴温度为35℃，真空度为0.005MPa,待旋转蒸发仪壁上形成一层膜后，将吐温800.5g与外水相20ml混合加到旋转蒸发仪样品室，将真空度提高到0.01MPa旋转溶解，待旋转蒸发仪样品室壁上的膜都溶于PBS时收集溶液。均质处理。将收集到的溶液均质处理2次，均质压力为30MPa，时间10s。得到的即为鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体。为表明本申请的先进性和优点，申请人对制备工艺进行了优化，对纳米脂质体的特性、产品的活性成分以及胃肠消化性能进行了检测分析实验，结果如下：A、准备实验材料，按上述配方准备材料。新鲜鹅血：当地鹅市场定点采集。碱性蛋白酶、大豆卵磷脂、胆固醇、吐温80、无水乙醚、磷酸缓冲溶液。实验用水为蒸馏水。B、准备实验试剂三氯乙酸、三氯化铁、没食子酸、铁氰化钾、无水乙醚等，均为分析纯；大豆卵磷脂、胆固醇、氯化钙（分析纯）、DPPH自由基。C、准备实验设备表一D、鹅血抗氧化小分子酶解物脂质体的加工流程原料→分离血红蛋白→酶解→超滤分级→脂质体制备→均质鹅血血红蛋白的分离：将新鲜鹅血进行离心分离（3500r/min，15min），并用5倍体积的生理盐水（0.9%）洗涤下层分离物并收集，在收集的下层分离物中加入蒸馏水，定容至原鹅血体积。将分离处理液进行超声细胞破碎，释放出细胞内的蛋白质，超声功率为250w，时间为12min。离心过滤。将超声破碎后的混合液进行离心分离（3500r/min，10min）然后过滤得到鹅血红蛋白。酶解将前处理得到的鹅血红蛋白用蒸馏水调整浓度至6%，pH值为10.0，然后在50℃下预热5min，然后添加6000U/g的碱性蛋白酶，在50℃条件下避光酶解5.0h（转速90r/min），之后100℃灭酶10分钟，离心（3000r/min，10min）取上清液即为鹅血酶解液。超滤分离：将鹅血酶解液依次通过10KD,3KD，1KD的超滤离心分离，离心条件为5000g/30min，收集最终组分得到鹅血抗氧化小分子酶解物备用，同时分析其抗氧化能力。纳米脂质体的制备：取磷脂1g，胆固醇0.125g，加乙醚30ml溶解，得到有机相。鹅血抗氧化小分子酶解物1.5mL加8.5mLPBS水得到内水相。将内水相与有机相混合均匀，超声冰浴处理5min，功率为400w。将超声处理后的混合液快速倒入旋转蒸发仪样品室进行蒸发浓缩，水浴温度为35℃，真空度为0.005MPa,待旋转蒸发仪壁上形成一层膜后，将吐温800.5g与外水相20ml混合加到旋转蒸发仪样品室，将真空度提高到0.01MPa旋转溶解，待旋转蒸发仪样品室壁上的膜都溶于PBS时收集溶液。均质处理。将收集到的溶液均质处理2次，均质压力为30MPa，时间10s。得到的即为鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体。纳米脂质体工艺的研究磷脂与胆固醇对脂质体基本特性的影响取磷脂，胆固醇（比例为10:1、8:1、6:1、4:1、2:1），加乙醚30ml溶解，得到有机相。鹅血抗氧化小分子酶解物1.5mL加8.5mLPBS水得到内水相。将内水相与有机相混合均匀，超声冰浴处理5min，功率为400w。将超声处理后的混合液快速倒入旋转蒸发仪样品室进行蒸发浓缩，水浴温度为35℃，真空度为0.005MPa,待旋转蒸发仪壁上形成一层膜后，将吐温800.5g与外水相20ml混合加到旋转蒸发仪样品室，将真空度提高到0.01MPa旋转溶解，待旋转蒸发仪样品室壁上的膜都溶于PBS时收集溶液。将收集到的溶液均质处理2次，均质压力为30MPa，时间10s。得到的即为鹅血抗氧化小分子酶解物脂质体。水化温度的对脂质体基本特性的影响取磷脂，胆固醇，加乙醚30ml溶解，得到有机相。鹅血抗氧化小分子酶解物1.5mL加8.5mLPBS水得到内水相。将内水相与有机相混合均匀，超声冰浴处理5min，功率为400w。将超声处理后的混合液快速倒入旋转蒸发仪样品室，（25℃、35℃、45℃、55℃）真空度0.005MPa,待旋转蒸发仪壁上形成一层膜后，将吐温800.5g与外水相20ml混合加到旋转蒸发仪样品室，将真空度提高到0.01MPa旋转溶解，待旋转蒸发仪样品室壁上的膜都溶于PBS时收集溶液。将收集到的溶液均质处理2次，均质压力为30MPa，时间10s。得到的即为鹅血抗氧化小分子酶解物脂质体。超声时间对脂质体基本特性的影响取磷脂，胆固醇，加乙醚30ml溶解，得到有机相。鹅血抗氧化小分子酶解物1.5mL加8.5mLPBS水得到内水相。将内水相与有机相混合均匀，超声冰浴处理（时间为1、3、5、7、9min），功率为400w。将超声处理后的混合液快速倒入旋转蒸发仪样品室，35本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法；其特征在于：它包括如下步骤：1）鹅血血红蛋白分离：

【技术特征摘要】
1.一种鹅血抗氧化小分子酶解物纳米脂质体的制备方法；其特征在于：它包括如下步骤：1）鹅血血红蛋白分离：将新鲜鹅血进行离心分离，并用5倍体积的生理盐水洗涤下层分离物并收集，在收集的下层分离物中加入蒸馏水，定容至原鹅血体积；将分离处理液进行超声细胞破碎，释放出细胞内的蛋白质，超声功率为250w，时间为12min；离心过滤：将超声破碎后的混合液进行离心分离然后过滤得到鹅血红蛋白；2）酶解处理：将前处理得到的鹅血血红蛋白用蒸馏水调整浓度至6%，pH值为10.0，然后在50℃下预热5min，然后添加6000U/g的碱性蛋白酶，在50℃条件下避光酶解5.0h，转速90r/min），之后100℃灭酶10分钟，离心取上清液即为鹅血酶解液；3）超滤分离：将鹅血酶解液依次通过10KD,3KD，1KD的超滤离心分离，离...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙卫青，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42