一种新型人肝脏生物支架立体培养系统下乙肝病毒感染模型的建立技术方案

本发明专利技术属于生物研究领域，具体涉及一种新型人肝脏生物支架立体培养系统下乙肝病毒感染模型的建立。本发明专利技术经过广泛而深入的研究发现，建立了一种乙肝病毒感染模型，该模型的主要特点是感染效率高，进行感染时所使用的病毒量远远低于其他模型，但是病毒在细胞内的复制水平高。另外，该模型的感染持续时间长，一般的原代肝细胞体外感染只能持续10天左右，而本发明专利技术的模型感染时间可持续近20天。此外，本发明专利技术模型中肝细胞的表达接近于体内真实状态，可用于抗乙型肝炎药物的筛选。

Establishment of Hepatitis B Virus Infection Model in a New Stereo Culture System of Human Liver Biological Scaffold

The invention belongs to the field of biological research, in particular to the establishment of a model of hepatitis B virus infection under a novel three-dimensional culture system of human liver biological scaffold. After extensive and in-depth research, the invention has found that a model of hepatitis B virus infection has been established. The main characteristics of the model are high infection efficiency, the amount of virus used in infection is far lower than other models, but the level of virus replication in cells is high. In addition, the infection duration of the model is long, and the in vitro infection of primary hepatocytes can only last about 10 days, while the infection duration of the model of the present invention can last nearly 20 days. In addition, the expression of hepatocytes in the model is close to the real state in vivo and can be used for screening anti-hepatitis B drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种新型人肝脏生物支架立体培养系统下乙肝病毒感染模型的建立
本专利技术属于生物研究领域，具体涉及一种新型人肝脏生物支架立体培养系统下乙肝病毒感染模型的建立。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染呈世界范围广泛流行，是危害国民健康和造成国民经济损失最严重的疾病之一。人乙肝病毒具有明显的种属特异性，仅仅对大猩猩，恒河猴等灵长类动物易感，而细胞模型中只有人原代肝细胞能在一定程度上部分还原HBV感染过程，但原代肝细胞来源困难，伦理学要求高；体外培养容易“去分化”从而丧失正常的细胞表型与功能；同时原代肝细胞价格昂贵，因此，原代肝细胞不适合HBV感染常规研究模型。肝肿瘤细胞在组织来源上与肝组织接近，同时具备无限增殖能力，但肝肿瘤细胞无法自然感染HBV，必须借助脂质体等转染试剂将HBV病毒导入细胞内，HBV进入肝肿瘤细胞后存在时间仅为短短数天(7-10天)，随着细胞分裂即不再表达HBV相关蛋白。这类瞬时转染模型可以在一定程度上观察HBV急性感染后宿主的变化，以及一些处理手段在短期内对HBV的作用效果，对于HBV慢性化以及肿瘤发生相关研究并不合适。目前，常用的HBV体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乙肝病毒感染模型的建立方法，包括如下步骤：(a)将肝细胞植入到肝硬化ECM生物支架或正常肝脏ECM生物支架中，获得含有肝细胞的ECM生物支架；(b)将乙型肝炎病毒转染步骤(a)获得的含有肝细胞的ECM生物支架，获得乙肝病毒感染模型。

【技术特征摘要】
1.一种乙肝病毒感染模型的建立方法，包括如下步骤：(a)将肝细胞植入到肝硬化ECM生物支架或正常肝脏ECM生物支架中，获得含有肝细胞的ECM生物支架；(b)将乙型肝炎病毒转染步骤(a)获得的含有肝细胞的ECM生物支架，获得乙肝病毒感染模型。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：(1)所述肝硬化ECM生物支架为人源性肝硬化ECM生物支架；(2)所述正常肝脏ECM生物支架为正常人源性肝脏ECM生物支架；(3)先将肝硬化ECM生物支架或正常肝脏ECM生物支架进行消毒，再将肝细胞植入；(4)所述肝细胞选自所述肝细胞选自原代肝细胞、肝癌细胞、原代肝脏实质细胞或永生化的肝肿瘤细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肝硬化ECM生物支架的制备方法，包括以下步骤：(1)将离体的人硬化肝脏组织，用抗凝剂灌洗，去除脉管中的血细胞及血凝块，清洗，切割后进行低温冷冻；(2)将冷冻后的离体人硬化肝脏组织，进行融化，切割成小块；(3)将小块的人硬化肝脏组织，去除细胞，获得人源性肝硬化ECM生物支架。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：(1)所述步骤(1)中，所述抗凝剂选自肝素、枸橼酸钠或二乙酸二乙胺；(2)所述步骤(1)中，所述低温冷冻中的低温是-60～-100℃；(3)所述步骤(2)中，融化时可将肝脏组织置于冰上、或将肝脏组织置于4℃条件下；(4)所述步骤(2)中，所述小块的大小是(5～7)mm*(5～7)mm*(5～7)mm；(5)所述步骤(2)中，切成小块的人肝硬化组织再次进行低温冷冻，所述低温冷冻中的低温是-60～-100℃。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，去除细胞的方法，包括如下步骤：1)将小块的人硬化肝脏组织置于超纯水或去离子水中，静置；2)继续于超纯水或去离子水中振荡；3)转移至SDS水溶液中，进行振荡；4)转移至曲拉通水溶液中，进行振荡；5)转移至超纯水或去离子水中，进行振荡。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：张祯祯，陈娟，许红梅，符州，黄爱龙，张明满，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：重庆,50