一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法技术

本发明专利技术涉及核酸检测领域，具体是一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，步骤如下：1)引物稀释；2)扩增反应；3)将反应液混匀后，放入定量PCR仪，设置65℃、30s一个循环，60个循环，循环完成后加溶解曲线分析；4)根据所获得扩增曲线和溶解曲线判定，阴性对照组的检测结果是阴性结果，则本次实验有效，否则本次实验无效。本发明专利技术具有高特异性、高灵敏度以及操作简单的优点；使用一个反应管即可检测出样本是否感染了沙门氏菌，实现了实时监控过程，并且可以针对扩增产物做溶解曲线分析，针对产物进行特异性的分析。

A Rapid Nucleic Acid Detection Method for Salmonella

The invention relates to the field of nucleic acid detection, in particular to a rapid nucleic acid detection method for Salmonella. The steps are as follows: 1) primer dilution; 2) amplification reaction; 3) mixing the reaction solution and putting it into a quantitative PCR instrument, setting a cycle of 65 C and 30 s, 60 cycles, adding dissolution curve analysis after completion of the cycle; 4) judging by the obtained amplification curve and dissolution curve, negative control group. If the test result is negative, the experiment will be effective, otherwise the experiment will be invalid. The invention has the advantages of high specificity, high sensitivity and simple operation; a reaction tube can be used to detect whether a sample is infected with Salmonella, realize the real-time monitoring process, and can analyze the dissolution curve of the amplified product and the specificity of the product.

【技术实现步骤摘要】
一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法
本专利技术涉及核酸检测领域，具体是一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法。
技术介绍
沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌，属肠道细菌科，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。沙门氏菌病属于畜禽常见病，发病率较高，危害大，能使人和各种畜禽致病。主要通过污染食品和水源经口传播，人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，畜禽感染沙门氏菌可引起相应的传染病，例如猪霍乱、鸡白痢等，降低动物的繁殖生产力，甚至导致死亡。沙门氏菌属(Salmonella)是一大群形态、生化性状及抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。1885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌，故定名为沙门氏菌属。已发现的近一千种(或菌株)，菌体大小(0.6～0.9)×(1～3)微米，无芽胞，一般无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，大多有周身鞭毛，需氧或兼性厌氧。沙门氏菌按生化反应和DNA同源性分为2个种(肠道沙门菌、邦戈沙门菌)和4个亚属。亚属Ⅰ是生化反应典型的和最常见的沙门氏菌；亚属Ⅱ和Ⅳ是生化反应不典型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，其特征在于，检测是否感染沙门氏菌的快速扩增引物组，引物组包括引物1和2、引物3和4、引物5和6；引物1：ATGATCTGAGGCAAGTTGCGTTGTGAGCCATTCGTTAATGTC引物2：GCAGAATTTGCGGATCGTTGGCACCTTCATCCATCGTTAC引物3：CCTCAGCTCAATCATAACTCA引物4：ATAACTGGTATTATGGCTGCC引物5：CGTCATTGTTACCGTAATGCG引物6：AGTTCAGTGCAAGCATGCA沙门氏菌检测实验，包含以下实验材料：a)引物组：引物1和2、引物3和4、引物5和6干粉，...

【技术特征摘要】
1.一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，其特征在于，检测是否感染沙门氏菌的快速扩增引物组，引物组包括引物1和2、引物3和4、引物5和6；引物1：ATGATCTGAGGCAAGTTGCGTTGTGAGCCATTCGTTAATGTC引物2：GCAGAATTTGCGGATCGTTGGCACCTTCATCCATCGTTAC引物3：CCTCAGCTCAATCATAACTCA引物4：ATAACTGGTATTATGGCTGCC引物5：CGTCATTGTTACCGTAATGCG引物6：AGTTCAGTGCAAGCATGCA沙门氏菌检测实验，包含以下实验材料：a)引物组：引物1和2、引物3和4、引物5和6干粉，各10D；b)反应浓缩液；c)沙门氏菌菌液：沙门氏菌攻毒实验的鸡肾、肺、肝组织；d)阳性对照为沙门氏菌DNA样本，阴性对照为不含目的基因的反应液；运用本发明核酸检测方法检测沙门氏菌的步骤如下：1)引物稀释：将试剂盒中引物1和2稀释成40uM，引物3和4稀释成5uM，引物5和6稀释成20uM，等体积混匀；2)扩增反应：反应浓缩液15ul、引物组6ul，模板、构建的标准质粒DNA4ul，设置阴性对照时，使用不含目的基因的反应液为模板；3)将反应液混匀后，放入定量PCR仪，设置65℃、30s...

【专利技术属性】
技术研发人员：许绍坤，信爱国，张薇，王耕，常志顺，严红亚，
申请(专利权)人：许绍坤，
类型：发明
国别省市：云南,53