一种丹参及其提取物的质量控制方法技术

本发明专利技术涉及一种丹参及其提取物的质量控制方法。所述质量控制所检测的有效成分至少包括丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参酮2A、丹参素，其中，以丹酚酸B作为内标物。上述方法通过利用丹酚酸B作为内标物，用内标物与其他成分的校正因子进行多组分定量分析，以确定其他有效成分的含量。通过验证，该方法稳定，RSD均小于5％。本发明专利技术所提供的质量控制方法具有良好的精确度，稳定性和可靠性，可以很好为丹参药材的多组分含量测定提供方法。此外，本方法能够同时测定水溶性及脂溶性成分，解决对照品货源紧缺和检测成本昂贵的问题。因此，为了确保药物疗效和临床安全用药，本发明专利技术所提供的质量控制方法将成为的多组分中药及其制剂的质量控制的趋势。

【技术实现步骤摘要】
一种丹参及其提取物的质量控制方法
本专利技术涉及中药成分分析领域，具体涉及一种丹参及其提取物的质量控制方法。
技术介绍
中药具有多成分、多功效的作用特点，中药的质量难以通过单一成分表达，同步的多成分质量控制模式出现，迅速扩大到广泛应用阶段，在现实中，对照品供应与需求存在矛盾，在实际生产、科研、监督中，多指标质量控制模式的应用又受到检测成本高昂的限制，所以，既能实现多成分的质量控制，又能克服对照品紧缺和检测成本高的困难的一测多评的方法目前仍是空白。丹参中有较多成分，单一的成分测定不能反应丹参质量，药典规定对丹参中丹酚酸B，丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA等多指标进行控制，也有一些研究对丹参中更多的成分进行了一测多评分析，然而，这些研究都是将水溶性成分(丹参素、丹酚酸等)与脂溶性成分(丹参酮)分开进行测定，没有完全实现丹参的“一测多评”。2015年版《中国药典》以丹酚酸B为其水溶性成分的检测指标，虽然丹酚酸B的含量较高，可是却不一定能完全反映和控制丹参的质量，根据传统中医的整体观，现行标准要求对中药材进行指标性的多药效的成分的综合控制。另外，由于对照品价格高昂和货源不足等现象，如何在对照品提供不上来的情况下，能够对中药丹参脂溶性和水溶性成分的进行整体测定，是目前多成分中药，特别是丹参，质量控制亟待解决的技术困扰和关键难题。因此，本研究以丹酚酸类中价格相对低廉，且含量最高的丹酚酸B作为内标，选取丹参药材或丹参制剂中常见指标性成分如：丹酚酸B、隐丹参酮、丹参素、丹参酮ⅡA等，进行一测多评的研究。
技术实现思路
本专利技术提供一种丹参及其提取物的质量控制方法，其中，质量控制所检测的有效成分至少包括丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参酮2A、丹参素，其中，以丹酚酸B作为内标物。进一步地，所述有效成分包括丹酚酸A、丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮、丹参酮、丹参酮2A、隐丹参酮。所述质量控制方法的步骤包括：1)对照品的制备：所述对照品为含有所述有效成分的甲醇-水溶液；2)高效液相色谱分析条件：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸；或，流动相A为甲醇，流动相B为水；或，流动相A为乙腈，流动相B为乙腈-水溶液；或，流动相A为甲醇，流动相B为0.2％甲酸-水溶液；梯度洗脱的程序及流动相A、B的体积百分比如下：梯度1：0-20min，流动相A：B＝10％-28％；梯度2：20-25min，流动相A：B＝28％-48％；梯度3：25-40min，流动相A：B＝48％-60％；梯度4：40-45min，流动相A：B＝60％-10％；检测波长为270nm；进样量为3-5μL；流速为0.5-0.8ml/min；3)绘制标准校正曲线：取不同体积的所述对照品连续进样，以所述高效液相色谱测定色谱图并绘制所述内标物丹酚酸B的浓度-峰面积标准校正曲线y＝ax+b，其中y为丹酚酸B峰面积，x为丹酚酸B浓度；4)试供品的制备：取0.1-0.15g丹参粉末置于50ml甲醇-水混合溶液，称定重量，经提取后，再称定重量，并以所述甲醇-水混合溶液补足重量，再以所述甲醇-水混合溶液稀释一倍后，过滤取滤液即得试供品；或，取0.01-0.03g丹参提取物充分溶解于50ml甲醇-水混合溶液，过滤取滤液即得试供品；5)试供品中成分的测定：将所述试供品按照步骤3)相同的条件注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，以步骤3)所得标准校正曲线计算试供品中内标物丹酚酸B的浓度，再结合校正因子带入公式以计算其他有效成分的浓度；所述公式中fs/i为化合物i的校正因子，As为丹酚酸B的峰面积，Cs为丹酚酸B的浓度，Ai为试供品中化合物i的峰面积，Ci为试供品中化合物i的浓度，其中化合物i为其他有效成分。上述方法通过利用丹酚酸B作为内标物，用内标物与其他成分的相对校正因子进行多组分定量分析(QAMS)，以确定其他8个成分的含量。通过一定变化的条件下的适应性试验，该方法稳定，RSD均小于5％。通过方法学验证，本专利技术所提供的一测多评的方法具有良好的精确度，稳定性和可靠性，可以很好为丹参药材的多组分含量测定提供方法。此外，一测多评的方法能够同时测定水溶性及脂溶性成分，对《中国药典》的含量测定方法将是一个很好的补充，解决对照品货源紧缺和检测成本昂贵的问题。因此，为了确保药物疗效和临床安全用药，一测多评的质量控制方法将成为的多组分中药及其制剂的质量控制的趋势，格外适合工业化生产，适宜推广利用。为进一步优化所述方法，以获得更为准确的检测结果，本专利技术还提出了如下改进：关于步骤1)，对照品的制备，所述对照品为含有丹酚酸B0.10-0.15mg/mL、丹参素0.04-0.06mg/mL、原儿茶醛0.04-0.06mg/mL、迷迭香酸0.04-0.06mg/mL、丹酚酸A0.04-0.06mg/mL、二氢丹参酮0.01-0.02mg/mL、丹参酮0.01-0.02mg/mL、丹参酮2A0.01-0.02mg/mL、隐丹参酮0.01-0.02mg/mL的甲醇-水溶液；选择上述对照品，能够使9个对照品溶解完全，且对照品的浓度大小范围够宽，以尽可能地获得准确的标准曲线和校正因子。优选为含有丹酚酸B0.1mg/mL、丹参素0.05mg/mL、原儿茶醛0.05mg/mL、迷迭香酸0.05mg/mL、丹酚酸A0.05mg/mL、二氢丹参酮0.02mg/mL、丹参酮0.02mg/mL、丹参酮2A0.02mg/mL、隐丹参酮0.02mg/mL的甲醇-水溶液；优选地，所述甲醇-水溶液为70-80％甲醇的水溶液，更优选为70％甲醇-水溶液。关于步骤2)，高效液相色谱分析条件，采用以下流动相体系：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸-水溶液时能够具有良好的峰形和分离度；流速控制在0.6ml/min为最佳。关于步骤3)，取不同体积的所述对照品连续进样，其中对照品的体积分别优选为1μL，2μL，5μL，10μL，15μL，20μL；优选对每个体积测定分析多个数据(以3-5个为优)，将多个数据的平均值以标准校正曲线的形式建立回归方程y＝ax+b，其中y为峰面积，x为浓度。关于步骤4)，试供品的制备，所述试供品的配制过程采取精密配制，本领域技术人员应当理解其配制方法，不做特殊限定。在此以取0.15g丹参粉末为例，阐述其基本操作：精密称定0.15g丹参粉末加入甲醇-水混合溶液50ml，密塞，称定重量，经提取处理后，放冷，再称定重量，用甲醇-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，移至10ml量瓶中，加甲醇-水混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得试供品。所述提取为超声或回流提取方法，优选为超声提取。进一步地，所述超声提取为在功率14W，频率42kHz下超声0.5-2h，以1h为最佳。所述甲醇-水混合溶液为50-80％甲醇的水溶液，优选为70％甲醇的水溶液。专利技术人经研究发现，以70％甲醇-水作为提取溶剂，同时配合超声提取，能够较为完全地提取丹参的有效成分，对丹参的脂溶性成分和水溶性成分都能够很好的提取较完全，从而使检测方法更为准确。最优选，采用70％甲醇的水溶液，在功率14W，频率42kHz下超声1h丹参药材的提取最为完全。所述丹参粉末优选过80目筛(250μm)。作为本专利技术的优选技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种丹参及其提取物的质量控制方法，其特征在于，质量控制所检测的有效成分至少包括丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参酮2A、丹参素，其中，以丹酚酸B作为内标物。

【技术特征摘要】
1.一种丹参及其提取物的质量控制方法，其特征在于，质量控制所检测的有效成分至少包括丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参酮2A、丹参素，其中，以丹酚酸B作为内标物。2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制所检测的有效成分包括丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸A、二氢丹参酮、丹参酮、丹参酮2A、隐丹参酮。3.根据权利要求1或2所述的质量控制方法，其特征在于，步骤包括：1)对照品的制备：所述对照品为含有所述有效成分的甲醇-水溶液；2)高效液相色谱分析条件：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸；或，流动相A为甲醇，流动相B为水；或，流动相A为乙腈，流动相B为乙腈-水溶液；或，流动相A为甲醇，流动相B为0.2％甲酸-水溶液；梯度洗脱的程序及流动相A、B的体积百分比如下：梯度1：0-20min，流动相A：B＝10％-28％；梯度2：20-25min，流动相A：B＝28％-48％；梯度3：25-40min，流动相A：B＝48％-60％；梯度4：40-45min，流动相A：B＝60％-10％；检测波长为270nm；进样量为3-5μL；流速为0.5-0.8ml/min；3)绘制标准校正曲线：取不同体积的所述对照品连续进样，以所述高效液相色谱测定色谱图并绘制所述内标物丹酚酸B的浓度-峰面积标准校正曲线y＝ax+b，其中y为峰面积，x为浓度；4)试供品的制备：取0.1-0.15g丹参粉末置于50ml甲醇-水混合溶液，称定重量，经提取后，再称定重量，并以所述甲醇-水混合溶液补足重量，再以所述甲醇-水混合溶液稀释一倍后，过滤取滤液即得试供品；或取0.01-0.03g丹参提取物充分溶解于50ml甲醇-水混合溶液，过滤取滤液即得试供品；5)试供品中成分的测定：将所述试供品按照步骤3)相同的条件注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，以步骤3)所得标准校正曲线计算试供品中内标物丹酚酸B的浓度，再分别结合校正因子带入公式以计算其他有效成分的浓度；所述公式中fs/i为化合物i的校正因子，As为丹酚酸B的峰面积，Cs为丹酚酸B的浓度，Ai为试供品中化合物i的峰面积，Ci为试供品中化合物i的浓度，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘振杰，唐红珍，银胜高，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西,45