【技术实现步骤摘要】
一种基于双极性脉冲电场诱导细胞融合的方法
本专利技术涉及一种细胞融合
，特别是涉及一种基于双极性脉冲电场诱导细胞融合的方法。
技术介绍
细胞融合能够实现远源杂交，其意义在于打破了仅仅依赖有限杂交重组基因创造新种的界限，有可能形成有性杂交方式无法获得的新型的杂交动物或植物细胞，扩大了遗传物质的重组范围。细胞融合是生物制备的基本途径。细胞能否有效融合是决定生物制备是否可行的关键，甚至成为制约生物制备技术发展的瓶颈。因此，如何发展和改进现有的细胞融合方法、提升细胞融合的效果和效率，已成为国内外生物制备领域的一个研究热点。根据电融合的基本原理，细胞膜上出现足够数量和尺寸的孔洞(即细胞电穿孔)，是细胞融合的先决条件。而细胞要发生电穿孔，细胞的跨膜电压必须大于其细胞膜穿孔所需的电压阈值。细胞融合的基本步骤是：首先，细胞在电融合之前，两个待融合的细胞必须先有紧密的接触。然后通过对电极槽施加高频率(1-2MHz)的正弦交流电压，使细胞在介电泳力的牵引下，依次排列成串。介电泳的基本原理是基于细胞中的离子的极化，在高频率交流电场内，会受到电场互相吸引，形成串珠状态。待细胞排列成...
【技术保护点】
1.一种基于双极性脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将不同或者相同尺寸的细胞和融合液置于细胞培养槽内；S2，将正弦交流电压施加于细胞培养槽的两极，细胞将排队且彼此紧贴；将正弦交流电压施加于细胞培养槽的两极的方法为：控制器分别同时向场效应管K1～K9以及场效应管S1～Sn发送导通和截止命令，其中控制器向场效应管K8和场效应管K9发送导通命令，向其余场效应管发送截止命令；此时脉冲第二产生电路向负载电阻R2输出高频高压正弦交流电压；S3，通过脉冲切换开关，将培养槽两极上所施加的正弦交流电压切换为双极性脉冲电压，槽内细胞发生微小电穿孔；正弦交流电压切换为双...
【技术特征摘要】
1.一种基于双极性脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将不同或者相同尺寸的细胞和融合液置于细胞培养槽内；S2，将正弦交流电压施加于细胞培养槽的两极，细胞将排队且彼此紧贴；将正弦交流电压施加于细胞培养槽的两极的方法为：控制器分别同时向场效应管K1～K9以及场效应管S1～Sn发送导通和截止命令，其中控制器向场效应管K8和场效应管K9发送导通命令，向其余场效应管发送截止命令；此时脉冲第二产生电路向负载电阻R2输出高频高压正弦交流电压；S3，通过脉冲切换开关，将培养槽两极上所施加的正弦交流电压切换为双极性脉冲电压，槽内细胞发生微小电穿孔；正弦交流电压切换为双极性脉冲电压的方法包括以下步骤：S31，控制器分别同时向场效应管K1～K9以及场效应管S1～Sn发送导通和截止命令，其中，控制器向场效应管S1发送导通信号，向其余场效应管发送截止命令；电源S分别给电容C1～Cn充电；S32，控制器分别同时向场效应管K1～K9以及场效应管S1～Sn发送导通和截止命令，其中控制器向场效应管S1～Sn、场效应管K2以及场效应管K5～K7发送导通命令，向其余场效应管发送截止命令；此时电容C1～Cn上的电荷通过负载电阻R2释放，在负载电阻R2上输出正极性的脉冲方波；S33，控制器分别同时向场效应管K1～K9以及场效应管S1～Sn发送导通和截止命令，其中控制器向场效应管S1～Sn、场效应管K3～K4以及场效应管K6～K7发送导通命令，向其余场效应管发送截止命令；此时电容C1～Cn上的电荷通过负载电阻R2释放，在负载电阻R2上输出负极性的脉冲方波；S4，继续通过脉冲切换开关，将双极性脉冲电压切换为正弦电压，作用于已经处于穿孔状态的槽内细胞，己处于开孔状态的细胞上的孔进一步增大，彼此紧贴的两个细胞的外膜彼此连接，两细胞内遗传物质互相融合，最终形成一个完整的融合细胞；双极性脉冲电压切换为正弦电压的方法为：控制器分别同时向场效应管K1～K9以及场效应管S1～Sn发送导通和截止命令，其中控制器向场效应管K8和场效应管K9发送导通命令，向其余场效应管发送截止命令；此时脉冲第二产生电路向负载电阻R2输出高频高压正弦交流电压；S5，当脉冲施加完毕后，控制器分别同时向场效应管K1～K9以及场效应管S1～Sn发送导通和截止命令，其中控制器向场效应管S1～Sn以及场效应管K1发送导通命令，向其余场效应管发送截止命令，电容C1～Cn上残余的电荷通过放电电阻R1进行释放。2.根据权利要求1所述的基于双极性脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于，步骤S1中的细胞包括大细胞或/和小细胞，所述大细胞的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李成祥，柯强，姚成，杜建，姚陈果，米彦，吴梦，葛良鹏，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50
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