一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法，属于微生物技术领域。本发明专利技术利用新型等压室温等离子体（ARTP）育种系统诱变春雷霉素产生菌株，主要包括以下步骤：（1）小金色链霉菌斜面培养和斜面孢子计数；（2）孢子悬液制备；（3）小金色链霉菌常压室温等离子体（ARTP）诱变处理；（4）春雷霉素高产菌株筛选。该方法筛选的小金色链霉菌摇瓶发酵最高效价可达5091μg/mL，相比原始出发菌株效价提高了130%，应用到工业生产中，具有重要的经济价值。

【技术实现步骤摘要】
一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法
本专利技术属于属于微生物
，具体涉及一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法。
技术介绍
春雷霉素（kasugamycin）是一种由小金色链霉菌（Streptomyceskasugaensis）产生的次级代谢产物，属于氨基糖苷类抗生素。春雷霉素广泛应用于农业，对水稻稻瘟病，大白菜黑腐病，黄瓜枯萎病等有显著的防治效果。获得抗生素高产菌株是企业始终追求的目标。传统的春雷霉素生产菌株产量的提高策略主要有发酵培养基的优化、紫外线照射和自然分离等育种方法。如中国专利申请201610817957.4提供一种利用小金色链霉菌BJX007发酵生产春雷霉素的方法，其是向发酵培养基中添加适量表面活性剂，以小金色链霉菌(Streptomycesmicroaureus)BJX007(保藏编号CGMCCNo.11622)为发酵菌株，进行春雷霉素的发酵生产。此专利技术提供的小金色链霉菌BJX007，其发酵生产春雷霉素的能力高，产量可达25000μg/mL发酵液，且菌株BJX007连续传代5次后其生产春雷霉素的能力仍保持原有水平，表明其遗传稳定性好，可用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）小金色链霉菌斜面培养和斜面孢子计数；（2）孢子悬液制备；（3）小金色链霉菌常压室温等离子体（ARTP）诱变处理；（4）春雷霉素高产菌株筛选。

【技术特征摘要】
1.一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）小金色链霉菌斜面培养和斜面孢子计数；（2）孢子悬液制备；（3）小金色链霉菌常压室温等离子体（ARTP）诱变处理；（4）春雷霉素高产菌株筛选。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤具体如下：（1）小金色链霉菌斜面培养和斜面孢子计数用接种铲将出发菌株接种到斜面培养基，25-30℃培养7-10d，获得孢子斜面，再刮下斜面全部孢子，用灭菌生理盐水稀释，涂布在含相同培养基的平皿上培养至长出单菌落，计数，依据稀释比例计算斜面孢子总数；（2）孢子悬液制备用接种铲从小金色链霉菌斜面上铲取孢子，加入含生理盐水的试管，震荡，用脱脂棉过滤去除菌丝片段，制成孢子悬液，孢子浓度为103-106个/mL；（3）小金色链霉菌常压室温等离子体（ARTP）诱变处理孢子悬液中加甘油保湿，混合均匀，涂于无菌载片上，置于ARTP小室，进行孢子悬液诱变处理；（4）春雷霉素高产菌株筛选a)琼脂块法筛选诱变后菌株制备双层平板，将灭菌后的下层培养基倒入平板中，自然冷凝；上层培养基中加入10%的指示菌枯草杆菌，轻摇混匀，迅速铺于已制备好的下层培养基上，继续冷却至室温；用接种针挑取诱变后的单菌落，轻置于培养基上培养，通过考察抑菌圈大小以筛选出产春雷霉素的能力强的单菌落；b)摇瓶发酵法筛选诱变菌株初筛：从步骤a)中挑选抑菌圈大的单菌落接种至斜面培养基上培养，获得孢子斜面，用接种铲从斜面将孢子接种到种子培养基中进行培养，之后再转接至发酵培养基中继续发酵培养，采用高效液相色谱分析方法测定发酵液中春雷霉素含量，并选取含量高于对照10%的菌株进行复筛。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的复筛指重复初筛操作，对初筛的春雷霉素高产菌株进行筛选。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中斜面培养基组分：葡萄糖0.50-2.00%，麦芽糖0.20-1.00%，蛋白胨0.10-1.00%，氯化钠0.10-0.50%，豆饼粉0.50-5.00%，碳酸钙0.10-0.50%，琼脂0.50-2.00%，其余为水，pH自然。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（...

【专利技术属性】
技术研发人员：高嫚妮，吴亮亮，李昶志，郑鹏飞，杨宏勃，潘忠成，李蒲民，
申请(专利权)人：陕西麦可罗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61