具有生物防治作用的勐海产气霉制造技术

本发明专利技术公开了1株对多种植物病原微生物和人体病原微生物具有抑制作用的产气霉属真菌，它是勐海产气霉(Musodormenghaiensis)；它能用于植物病原微生物和人类生活环境病原微生物的生物防治，具有开发利用的价值。

【技术实现步骤摘要】
具有生物防治作用的勐海产气霉
本专利技术属于生物工程
，具体地说是涉及1株产气霉属真菌：勐海产气霉， 它能够抑制植物病原微生物和人体病原微生物，对于植物病原微生物和人类生活环境病原 微生物具有生物防治作用。 专利技术背景 内生真菌（Endophytic fungi)是指那些在其生活史的部分或全部阶段能在健康 植物组织内部定植,且不会对宿主植物造成明显伤害的一类真菌。宿主植物与内生真菌在 长期的协同进化过程中形成了互惠互利的共生关系。植物可为内生真菌提供生存空间、水 分和其他营养成分，保护其不受外界环境的影响而在植物体内生存繁衍；另一方面，内生 真菌也能够产生一些促进植物生长发育、提高植物抗胁迫能力的次生代谢产物，包括激素、 酶、抗生素及其它杀虫抑菌物质。这些发现使得内生真菌在生物活性物质筛选的研究领域 中显示出巨大的应用潜力，逐渐成为国内外研究的热点之一。 目前，对于农业生产中的植物病原菌、建筑材料的霉变和人类生存环境的病原菌 的防治，人们主要依靠人工合成的化学药剂，但是，这些化学成分大多数具有致癌性，且不 易降解，对人类和动物及环境均具有很大的毒性。因此，这一类化学药剂产品将会逐渐被限 制。在这种情况下，新型环保的生物杀菌剂的开发和利用显得尤为迫切。 产气霉属（Muscodor)真菌属于子囊菌纲炭角菌目，该属物种的显著特征是能够 产生一系列挥发性气体化合物 [1]。经实验证明，这些挥发性物质形成的混合气体可以有效 地抑制植物病原菌及人类病原微生物。这一生物学特性使得产气霉属真菌在土传病害等方 面具有很好的应用前景。2002年，美国AgreQuest公司以白色产气霉（M albus)为基础，首 家推出世界上第一种可以替代传统剧毒土壤熏蒸剂溴代甲烷（已被禁用）的真菌熏蒸剂。 这种真菌熏蒸剂也可以有效地防治引发病房综合征的病原霉菌和细菌。目前全世界已 报道8个产气霉属物种Γ 8]。本专利采用组织块分离法，从兰科植物中分离得到一株产气 霉属真菌，综合形态鉴定、分子鉴定和化学分析的结果，这株真菌为产气霉属的新物种，命 名为：動海产气霉（Mmenghaiensis X.M. Tan et S.X. Guo)。培养皿对峙实验证明，该真菌 产生的气体混合物对终极腐霉、金黄色葡萄球菌、新型隐球酵母等多种植物病原微生物和 人体病原微生物具有强烈的抑制和杀灭作用，显示它具有开发为杀菌剂的巨大潜力。
技术实现思路
本专利技术的目的为提供一株产气霉属（Muscodor)真菌：動海产气霉；它可以应用于 多种病原真菌和细菌的生物防治。 本专利技术采取如下技术方案实现： 勐海产气霉（M menghaiensis X. M. Tan et S. X. Guo)于 2012 年 7 月 17 日保藏于 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No. 6378。保藏单位 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。菌株的保藏和存活证 明见附件。 勐海产气霉的培养特性如下： PDA培养基上菌落白色，背面无色，生长缓慢，25°C暗培养2周菌落直径43-48mm， 边缘不规则，呈花瓣状，气生菌丝毛状，较发达，产生特殊的气味；菌丝透明，壁薄，具有横膈 膜，直径1.4-3. 6 μ m，常呈90°分枝，缠结在一起形成绳索链(rope_like strands)及网 状结构，有些菌丝形成菌丝圈结构，菌丝圈直径20-40 μ m，部分菌丝中间膨大形成不规则块 状的菌丝细胞；菌丝体不育，未见无性或有性孢子，及产孢结构。 勐海产气霉的核糖体脱氧核糖核酸内转录间隔区（ITS-rDNA)序列（6378-1)、核 糖核酸聚合酶Π 亚基（RPB2)序列（6378-2)、β -微管蛋白（β -tublin)序列（6378-3)和 核糖体脱氧核糖核酸大亚基（28S)序列￠378-4)如序列表所示。 ①勐海产气霉与产气霉属菌株M25 (Genbank accession HM595539)和M yucatanensis(Genbank accession FJ917287)相似性分别为 99%和 98%。以 Agaricus bisporus为外类群，基于产气霉属和炭角菌科其他相关属真菌的ITS序列构建NJ系统进化 发育树。在这个树形图中，产气霉属真菌被分为5个分支，勐海产气霉与菌株M25聚类在分 支C中，支持强度88% ;M yucatanensis聚类在分支D中。 ②勐海产气霉与产气霉属菌株M25 (Genbank accession HM595623)的RPB2序列 相似性为86%，与白色产气霉菌株S13-1-2 (Genbank accession GQ241929)的RPB2序列 相似性为99%。以Agaricus bisporus为外类群，基于产气霉属和炭角菌科其他相关属真 菌的RPB2序列构建NJ系统进化发育树。在这个树形图中，产气霉属真菌被分为3个分支， 勐海产气霉、勐养产气霉菌株CGMCC No. 3672与白色产气霉菌株S13-1-2和B-23 (Genbank accession FJ480345)聚类在分支C中，支持强度100% ;菌株M25聚类在分支B中。 ③勐海产气霉与产气霉属菌株S18-3-1 (Genbank accession HM034846)和白色产 气霉菌株9_6(Genbank accession HM034844)的β-tublin基因序列相似性分别为90% 和82%。以Sordariafimicola为外类群，基于产气霉属和炭角菌科其他相关属真菌的 β -tublin序列构建NJ系统进化发育树。在这个树形图中，产气霉属真菌被分为3个分支， 勐海产气霉、麻栗坡产气霉菌株CGMCC No. 3671和菌株S18-3-1聚类在分支A中，支持强度 79% ;白色产气霉菌株9-6聚类在分支B中。 ④勐海产气霉与白色产气霉菌株9-6 (Genbank accession HM034865)的28S序列 存在3个碱基的差异，相似性99%。以Taphrina deformans和Taphrina sp.为外类群，基 于产气霉属和炭角菌科其他相关属真菌的28S序列构建NJ系统进化发育树。在这个树形 图中，产气霉属真菌被分为3个分支，勐海产气霉、麻栗坡产气霉菌株CGMCC No. 3671和白 色产气霉菌株9-6聚类在分支A中，支持强度99 %。 在形态学上，勐海产气霉部分菌丝中间膨大形成不规则块状的菌丝细胞，己报道 的产气霉属其他物种都不具有这一特点[Η]。分析勐海产气霉释放的挥发性气体的化学 成分，其中主要含有 3-Cyclohexene-l-carboxaldehyde，4_ (4-methyl_3-pentenyl)-和 Methoxyacetic acid，3-tridecyl ester，不能检测到萘及其衍生物。 综合形态鉴定、分子鉴定和化学分析的结果，勐海产气霉是产气霉属的一个新物 种，命名为 M menghaiensis X.M.Tan et S.X.Guo,模式菌株为 CGMCC No.6本文档来自技高网...

【技术保护点】
能够抑制植物病原微生物和人体病原微生物的一株真菌，它是保藏编号为CGMCC No.6378的勐海产气霉(Muscodor menghaiensis X.M.Tan et S.X.Guo)；它能够用于对植物病原微生物和人类生活环境病原微生物的生物防治。

【技术特征摘要】
1. 能够抑制植物病原微生物和人体病原微生物的一株真菌，它是保藏编号为CGMCC 1'1〇.6378 的動海产气霉（]\1118(30(1〇1'11161^1131611818乂.]\113116七3.乂.6110);它能够用于对植 物病原微生物和人类生活环境病原微生物的生物防治。2. 权利要求1所述的一株真菌，其形态特征为： PDA培养基上菌落白色，背面无色，生长缓慢，25°C暗培养2周菌落直径43-48mm，边缘 不规则，呈花瓣状，气生菌丝毛状，较发达，产生特殊的气味；菌丝透明，壁薄，具有横膈膜， 直径1.4-3. 6 iim，常呈90°分枝，缠结在一起形成绳索链（rope-like strands)及网状 结构，有些菌丝形成菌丝圈结构，菌丝圈直径20-40 y m，部分菌丝中间膨大形成不规则块状 的菌丝细胞；菌丝体不育，未见无性或有性孢子，及产孢结构。3. 权利要求1所述的一株真菌，其核糖体脱氧核糖核酸内转录间隔区（ITS-rDNA)、核 糖核酸聚合酶II亚基（RPB2)、￠-微管蛋白（卩-tublin)和核糖体脱氧核糖核酸大亚基 (28S)的序列分别为： (1) ITS-rDNA 序列 GAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACAGA 60 GTTTTCTAAACTCCCAACCCTATGTGAACTTACCTTTGTTGCTTCGGCGGCGGAGGCTAC 120 CCTGCGGGGGAATACCACCCAGTGGTTACCCTGTAGTCCCAGGTACAGCAGTACCCGGTA 180 GTCATCCCCGCCGGCGGCCAACTAAACTCTGTTTTCTTTGGAATTCTGAATCATAAACTT 240 AATAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGMGAACGCAGCG 300 AAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACA 360 TTGCGCCCATTAGCATTCTAGTGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCACCACTTAAGCC 420 CTGTTGCTTAGCGTTGGGAGCCTACGGCACGGCCCGTAGCTCCTTAAAGTGATTGGCGGA 480 GTTGGTTCTCACTCTAAGCGTAGTAACTATATCTCGCTTCTGTAGTGGTTCCGGCCCCTG 540 CCGTAAAACTCCTTATACAAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCo (2) RPB2 序列 CTCTTCCGCAACATTGTCCGACGCATGACGCAAGAGGTTCTGTCTCACCTGAAGAGAAGC 60 ATCGAACAGGGCAAGCAGTTCAACATTGCTCTGGCGGTGAAGTCCAACATCATTACAGCC 120 GGGCTCAAGTACTCGCTCGCCACAGGCAACTGGGGCGATCAGAAGAAAGCCATGTCCTCG 180 ACCGCAGGTGTGTCCCAGGTGTTGAATAGGTACACTTTTGCGTCCACGCTCTCGCATCTG 240 AGAAGAACAAACACTCCCGTGGGCCGAGATGGTAAACTTGCCAAGCCCCGCCAGCTTCAC 300 AACACACATTGGGGTCTGGTCTGCCCTGCGGAAACGCCCGAGGGCCAGGCTTGTGGCCTG 360 GTGAAGAACTTGTCCCTCATGTGCTCTGTCAGTGTCGGTACTTCGACAGAACCCATCATC 420 GACTACATGGCCTCCCGAAATATGGAGATTTTGGAAGAATACGAGCCCACACGATATCCC 480 AACGCTACCAAGATCTTTCTCAACGGCTCATGGATCGGTGTACACCATGATCCCAAATAT 540 CTGGTGAGAGATGTTCAGGAGCTGCGTCGCATGGGCCAGGTTCCTGTTGAAGTGTCTTTG 600 GTTCGTGACATTCGTGATCGTGAATTCAAGATCTTTTCGGATGCTGGGCGAGTTATGCGA 660 CCCTTGTTTGTCGTGGAACAAGAGGATTTCCGAGATCGTGTCAAAGGACAATTGGCCCTT 720 ACTAAAAAAATGGTCGACAAACTCAACGCCGACCAACAGCCTGAAAAACGTAAAGCTGAC 780 TGGAAATATTATGGCTGGCGTGGTTTGATCGAGGACGGTGCGATCGAGTATCTAGACGCA 840 GAGGAAGAAGAGACGGCCATGATCTGCATGTCGCCCGAAGATCTCGAAAATTACCGTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭顺星，谭小明，陈晓梅，王春兰，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11