TREM2切割调节剂及其用途制造技术

本发明专利技术提供用于确定治疗药最佳剂量方的材料和方法案。特别地，本发明专利技术涉及能够靶向IL‑2受体的治疗药的、优选地基于白介素2(IL2)的治疗药的剂量方案。本发明专利技术的方法允许确定靶向IL‑2R的新治疗药的一般剂量方案，还特别地允许对正接受靶向IL‑2R的治疗药治疗的个体实现定制剂量方案。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TREM2切割调节剂及其用途本专利技术涉及结合分子，其在髓样细胞2(TREM2)上表达的触发受体(triggeringreceptor)的胞外域内具有结合位点，其中结合分子抑制TREM2切割。所述结合分子特别可用于治疗和/或预防神经障碍，如神经变性障碍。本专利技术还包括用于治疗和/或预防神经障碍的药物组合物，其中该药物组合物包含本专利技术的结合分子。可使用本专利技术的结合分子治疗和/或预防的神经变性障碍包括阿尔茨海默病(AD)、额颞叶变性(FTLD)、FTLD样综合征、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、伴随硬化性脑白质病的多囊性脂膜性骨发育不良(polycysticlipomembranousosteodysplasiawithsclerosingleukoencephalopathy，PLOSL；也称为Nasu-Hakola病)、多发性硬化(MS)、亨廷顿舞蹈病、吉-巴综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、沙-马-图病(Charcot-Marie-Toothdisease)或肌萎缩性侧索硬化症(ALS)。神经变性对应于主要影响神经元的任何病理情况，其代表具有不同临床和病理表达的一大群神经障碍，影响特定功能性解剖系统中特定神经元亚群的功能和存活[1]。脑部驻留免疫细胞(brainresidentimmunecell)的炎症和活化是许多神经障碍的常见标识，并且长久以来已经认识到特定的小胶质细胞增生在神经变性障碍中的关键作用[2,3]。现在通过鉴定在髓样细胞2(TREM2)上表达的触发受体中的序列变体进一步支持小胶质细胞功能在疾病发病机理中的主要作用。纯合TREM2变体引起PLOSL/NasuHakola疾病[4]或FTD样痴呆[5]，而杂合TREM2变体与多种神经和神经变性疾病如阿尔茨海默病(AD)、额颞叶变性(FTLD)、帕金森病、FTLD样综合征和肌萎缩性侧索硬化症(ALS)的风险增加有关[5-11](也参见Ulrich,2016,ACSChem.Neurosci.7:420-427)。在脑中，TREM2仅在小胶质细胞中表达，并且在功能上是必需的，例如细胞碎片的吞噬[12,13]。TREM2是1型膜蛋白，其穿梭于细胞质膜[14]，在那里其可以发挥其生物学功能。TREM2经历调节的膜内蛋白水解(RIP)[15,16](参见例如图1A)。通过金属蛋白酶(包括ADAM10和ADAM17(含有解联蛋白和金属蛋白酶结构域的蛋白质)和可能的MMP(基质金属蛋白酶))使全长TREM2脱落，在细胞表面上启动RIP。脱落导致可溶性TREM2(sTREM2)的分泌，其可在人脑脊液(CSF)中检测到[15，17-19]。随后通过γ-分泌酶的膜内切割清除膜保留的C-末端片段(CTF)(参见例如Kleinberger等人[15]图1A)[16，20]。已经功能性地研究了TREM2的几个突变。Ig样结构域内的突变如p.T66M和p.Y38C导致TREM2的错误折叠和未成熟蛋白在内质网内的保留[15,21]。结果，观察到细胞表面TREM2减少，并且脱落显著减少。与此一致，具有纯合TREM2p.T66M突变的患者在血清和CSF中具有极低或甚至检测不到的sTREM2[15,18]。降低的细胞表面TREM2导致吞噬活性降低[15]。尽管最初在TREM2功能缺失对淀粉样斑块块病理学的影响方面报道了矛盾的结果[22,23]，但现在看来很清楚TREM2的缺失导致模糊淀粉样斑块的积累，表明缺乏斑块体(plaquehallow)的吞噬清除或降低的淀粉样斑块生长的预防[24,25]。为了支持减少的吞噬斑块降解，最近已经表明，在没有TREM2的情况下，通过吞噬的淀粉样斑块免疫治疗剂的清除降低[26]。迄今为止功能性地研究的突变位于TREM2的Ig样结构域内(参见例如Kleinberger等人[15]图1A)。该结构域的错误折叠、保留和因此减少的脱落看起来是这种TREM2变体的常见结果。最近的遗传学研究表明，先前描述的编码变体(p.H157Y；[9,27,28])与汉族人群中的AD显著相关[29]。有趣的是，该变体(p.H157Y)位于Ig样结构域之外的茎区内(参见例如Kleinberger等人[15]图1A)。神经障碍，如神经变性障碍，有几个共同的特征，包括非典型蛋白质组装和/或诱导的进行性细胞死亡[30,31]。可以在许多不同水平的神经元环路中发现神经变性，其导致分子和系统缺陷。存在旨在降低神经变性障碍的发作和/或进展的某些治疗方法。然而，不幸的是，神经变性障碍仍然是无法治愈的，导致神经元细胞的进行性变性和/或死亡。因此，本专利技术所要解决的技术问题是提供治疗和/或预防包括神经变性疾病在内的神经疾病的手段和方法。通过提供本文描述的以及如权利要求中表征的实施方案解决该技术问题。因此，本专利技术涉及在TREM2的胞外域内具有结合位点的结合分子，其中该结合分子抑制TREM2切割。如下文和所附实施例中所记载的，令人惊讶地鉴定了发生TREM2脱落(shedding)的精确切割位点。特别地，在本专利技术的背景下，已发现TREM2胞外域的切割发生在TREM2的氨基酸序列的第157位(His157)组氨酸的C-末端，例如，如SEQIDNO:1或4所示。本专利技术的结合分子在该位置阻断TREM2胞外域的切割。因此，本文提供的结合分子稳定或增加表面结合的TREM2的量，从而保留和刺激小胶质细胞的活性。因此，本文提供的结合分子可有效地有助于预防淀粉样斑块的积累和消极作用；因此，提供了治疗和/或预防各种神经障碍的新方法，包括神经变性障碍，如阿尔茨海默病(AD)。已经在TREM2内鉴定的切割位点(即His157)正是AD相关的TREM2变体p.H157Y所在的位点。在现有技术中已经描述了TREM2突变对神经变性疾病发展的作用。然而，p.H157Y导致AD或其他神经变性障碍的机制尚不清楚。所附实施例令人惊讶地证明突变变体p.H157Y导致更高的TREM2脱落，该发现与针对在Ig样结构域内的突变(如p.T66M和p.Y38C)所观察到的减少的脱落相反[15]。如所附实施例所证明的，TREM2p.H157Y的增强脱落导致细胞表面全长TREM2减少和吞噬活性降低。因此，出乎意料地，位于Ig样结构域或茎区内的突变通过完全不同的细胞机制影响TREM2依赖性吞噬活性。因此，现有技术中对TREM2突变(如p.H157Y变体)的存在的描述决不表明TREM2切割恰好发生在该位置。在现有技术中已知几种特异性结合TREM2的分子，如抗TREM2抗体。然而，没有公开的数据显示能够抑制TREM2胞外域脱落(即切割)的结合分子。所附实施例令人惊讶地证明TREM2胞外域脱落(即TREM2切割)发生在TREM2的His157处。因此，切割酶(例如ADAM10、ADAM17或基质金属蛋白酶)必须接近该氨基酸以切割TREM2。因此，所附实施例表明阻断His157的结合分子可成功抑制TREM2的切割。可以通过直接结合His157来阻断切割酶对His157的接近。另外或可替代地，可以通过与位于与His157非常接近(例如具有至多10个氨基酸的距离)的氨基酸结合而在空间上阻断切割酶对His157的接近。例如，与位于与His157非常接近的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.结合分子，其在髓样细胞2(TREM2)上表达的触发受体的胞外域内具有结合位点，其中结合分子抑制TREM2切割。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.22 EP 16180844.91.结合分子，其在髓样细胞2(TREM2)上表达的触发受体的胞外域内具有结合位点，其中结合分子抑制TREM2切割。2.如权利要求1所述的结合分子，其中结合位点包含选自以下的至少一个人膜结合TREM2的位置:第157位的组氨酸(His157)；第148位的谷氨酸(Glu148)；第149位的丝氨酸(Ser149)；第150位的苯丙氨酸(Phe150)；第151位的谷氨酸(Glu151)；第152位的天冬氨酸(Asp152)；第153位的丙氨酸(Ala153)；第154位的组氨酸(His154)；第155位的缬氨酸(Val155)；第156位的谷氨酸(Glu156)；第158位的丝氨酸(Ser158)；第159位的异亮氨酸(Ile159)；第160位的丝氨酸(Ser160)；第161位的精氨酸(Arg161)；第162位的丝氨酸(Ser162)；第163位的亮氨酸(Leu163)；第164位的亮氨酸(Leu164)；第165位的谷氨酸(Glu165)；和第166位的甘氨酸(Gly166)。3.如权利要求1或2所述的结合分子，其中结合位点包含具有SEQIDNO:7-15、21和22中任一所示氨基酸序列的任一种多肽，或与具有SEQIDNO:7-15、21和22中任一所示氨基酸序列的任一种多肽重叠。4.如权利要求1-3中任一项所述的结合分子，其中结合分子通过抑制切割酶接近TREM2来抑制TREM2切割，其中切割酶是ADAM10、ADAM17或基质金属蛋白酶(MMP)。5.如权利要求1-4中任一项所述的结合分子，其中结合分子保留和/或刺激小胶质细胞的活性，和/或保留和/或刺激其他TREM2表达细胞的活性。6.如权利要求5所述的结合分子，其中小胶质细胞和/或其他TREM2表达细胞的活性是吞噬活性、移动、钙信号传导、Syk活化、增殖、炎性细胞因子产生和/或存活的调节。7.如权利要求1-6中任一项所述的结合分子，其中所述结合分子是:(i)抗体；其中抗体是单克隆抗体；和/或选自人源化抗体、全人抗体、小鼠抗体、大鼠抗体、兔抗体、仓鼠抗体、山羊抗体、豚鼠抗体、白鼬抗体、鸡抗体、绵羊抗体或猴抗体的抗体；嵌合抗体和双特异性抗体；(ii)抗体片段，其中抗体片段是纳米抗体、Fab片段、Fab’片段、Fab’-SH片段、F(ab’)2片段、Fd片段、Fv片段、scFv片段或分离的互补决定区(CDR)；和/或选自人源化抗体片段、全人抗体片段、小鼠抗体片段、大鼠抗体片段、兔抗体片段、仓鼠抗体片段、山羊抗体片段、豚鼠抗体片段、白鼬抗体片段、鸡抗体片段、绵羊抗体片段和猴抗体片段的抗体片段；或者(iii)小分子。8.如权利要求7所述的结合分子，其中所述抗体是以下抗体中的任一种:(1)抗体，其中重链可变区包含SEQIDNO:32的序列，轻链可变区包含SEQIDNO:42的序列；其中抗体抑制TREM2切割；(2)抗体，其中重链可变区包含与SEQIDNO:32具有至少85％同一性的序列，轻链可变区包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·哈斯，G·克莱因伯格，K·施勒佩科沃，
申请(专利权)人：德国神经退行性疾病研究中心，慕尼黑路德维希马克西米利安斯大学，
类型：发明
国别省市：德国,DE