FLT3的嵌合受体及其使用方法技术

根据本发明专利技术公开FLT3的抗原结合分子、嵌合受体和经工程改造的免疫细胞。本发明专利技术还涉及载体、组合物和使用所述FLT3抗原结合分子及经工程改造的免疫细胞治疗和/或检测的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】FLT3的嵌合受体及其使用方法
技术介绍
急性髓系白血病(AML)是一种异质性血液学恶性肿瘤，其是成人中诊断的最常见的急性白血病类型。AML占所有白血病的大致三分之一，在2013年仅在美国已报导经估计的14,500例新病例，且总体存活率差。过去三十年里，AML患者的护理标准几乎没有改善。然而，分子及细胞生物的最近进展已经彻底改变我们对正常和患病状态下的人造血作用的理解。已鉴别出涉及疾病发病机制的若干关键参与者，且其可作为可执行(actionable)目标来探查。在大约30％AML中最常突变的一种此类活化“驱动子”基因是FLT3。也称为胎肝激酶2(FLK-2)、人干细胞激酶1(SCK-1)或分化抗原群(CD135)的Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种造血受体酪氨酸激酶，其在20世纪90年代由两个独立的小组克隆。位于人染色体13q12上的FLT3基因编码III类受体酪氨酸激酶蛋白，其与其他III类家族成员共享同源性，所述其他III类家族成员包括干细胞因子受体(c-KIT)、巨噬细胞集落刺激因子受体(FMS)和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)。当与FLT3配体结合时，FLT3受体经历同源二聚化，从而实现近膜域中特异性酪氨酸残基的自磷酸化，及经由PI3K/Akt、MAPK和STAT5途径的下游活化。因此，FLT3在控制正常造血细胞的增殖、存活和分化中起关键作用。人FLT3在CD34+CD38-造血干细胞(HSC)以及树突状前体细胞的亚组中表达。FLT3表达也可在多能祖细胞中检测到，多能祖细胞如CD34+CD38+CD45RA-CD123低共同髓系祖细胞(CMP)、CD34+CD38+CD45RA+CD123低粒细胞单核细胞祖细胞(GMP)和CD34+CD38+CD10+CD19-共同淋巴样祖细胞(CLP)。有趣的是，在CD34+CD38-CD45RA-CD123-巨核细胞红细胞祖细胞(MEP)中几乎不存在FLT3表达。因此，FLT3表达主要限于早期髓系及淋巴样祖细胞，其中一些表达在较成熟的单核细胞谱系细胞中。FLT3的这种有限的表达模式与FLT3配体的表达模式形成鲜明对比，所述FLT3配体在大多数造血组织以及前列腺、肾、肺、结肠和心脏中表达。这些不同的表达模式，使得FLT3表达是确定FLT3信号传送途径的组织特异性的速率限制步骤。AML中最常见的FLT3突变是FLT3内部串联重复(FLT3-ITD)，其见于20％至38％患有细胞遗传学正常AML的患者中。FLT3-ITD当近膜域编码序列的一部分经复制且以头接尾取向插入时形成。在患有慢性淋巴性白血病(CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤和多发性骨髓瘤的患者中尚未鉴别出表明对AML的强烈疾病特异性的FLT3突变。突变体FLT3活化通常跨所有FAB亚型观察到，然而，其在患有FABM5(单核细胞白血病)的AML患者中显著增加，而FAB亚型M2及M6(粒细胞性或红白血病)显著地不太频繁地与FLT3活化相关，符合FLT3的正常表达模式。小百分比的AML患者(5％至7％)在FLT3酪氨酸激酶域(FLT3TKD)中呈现有单个氨基酸突变，最常见在D835处，或在一些情况下在T842或I836处，同时甚至较少患者(约1％)在涉及残基579、590、591和594的FLT3近膜域中具有突变。具有FLT3-ITD突变体AML的患者具有特性在于早期复发及存活差的侵袭性形式的疾病，而总体存活和无事件存活不受FLT3-TKD突变的存在的显著影响。此外，与具有野生型TET2或DNMT3A的FLT3-ITD突变体AML患者相比，并行TET2或DNMT3A突变的具有FLT3-ITD突变的AML患者具有不利的总体风险特征，其强调AML的临床及生物异质性。FLT3-ITD及FLT3TKD突变均诱导FLT3的配体非依赖性活化，其导致Ras/MAPK途径及PI3K/Akt途径的下游活化。然而，与任一突变相关的下游信号传送途径的主要区别在于STAT5由FLT3-ITD优先活化，从而引起增殖潜力增加及DNA修复途径的调节异常。与FLT3突变状态无关，FLT3磷酸化在超过三分之二的AML患者中是明显的，且FLT3在>80％AML母细胞中表达，且在约90％的所有AML患者中表达，使其成为以大样品大小的形式的疾病发病机制相关的有吸引力的治疗靶标。若干小分子抑制剂已呈针对具有FLT3突变的AML患者的有吸引力的治疗选项出现。第一代FLT3酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的特性在于缺乏选择性、效力和不利的药物动力学性质。已开发较新且更具选择性的药剂来应对这种问题；然而，其功效受出现继发性耐药(secondaryresistance)的限制。若干早期FLT3TKI包括米哚妥林(midostaurin)(PKC412)、来他替尼(lestaurtinib)(CEP-701)、舒尼替尼(sunitinib)(SUI1248)和索拉非尼(sorafinib)(BAY43-9006)等。在患有复发性或难治性AML的患者中，在所述多激酶靶向药剂的情况下I期及II期的反应速率是有限，大概归因于其不能在没有剂量限制性毒性的情况下达成有效的FLT3抑制。奎扎替尼(Quizartinib)(AC220)已开发为对FLT3野生型和FLT3-ITD具有高选择性的第二代FLT3TKI，且已经证实特别在较年轻患者群体中的围移植设定(peritransplantsetting)方面的益处。然而，在接受奎扎替尼的复发性患者中鉴别的FLT3的继发性突变强调开发针对AML患者的更好的治疗策略的需要，同时突出FLT3作为治疗靶目标正确性。若干靶向药剂已在患有原发性(denovo)、复发性/难治性或继发性疾病的AML患者中经测试。肿瘤抑制基因的表观遗传沉默在AML疾病发病机制中起重要作用，且DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂(如阿扎胞苷(azacitadine)及地西他滨)已经取得一些临床成功。此外，影响AML患者亚组中的组蛋白翻译后修饰(例如，EZH2及ASXL1突变)或DNA甲基化(例如，DNMT3A、TET2、IDH1/2)的突变的最近鉴别已引起多种治疗选项的发展，治疗选项包括EZH2、DOT1L、IDH1/2抑制剂，连同HDAC与蛋白酶体抑制剂。然而，所述化合物中的许多在AML细胞中的临床前研究表明，这些抑制剂可能改变造血分化的表型及基因表达特性，而非造成AML母细胞的直接细胞毒性。因此，仍然有鉴别出新颖的靶标/模态以应对AML并造成AML母细胞的靶向溶解的强烈的、未满足的医疗需要。针对AML的其他治疗候选者包括Aurora激酶抑制剂(包括AMG900)及在细胞周期进程中起重要作用的polo样激酶的抑制剂。当可行时，针对AML患者的护理标准仍然是化学疗法与干细胞移植。然而，大多数经治疗的患者中复发性/难治性病例的出现准许另外的治疗模态。若干白血病特异性抗原的鉴别及描述、连同免疫介导的移植物抗白血病效应的更明确的理解已为开发用于应对血液学恶性肿瘤的免疫调节策略做好准备，其综述于若干文章中。经工程改造的免疫细胞已显示在治疗性治疗中(特别是在肿瘤学中)具有所要的质量。两种主要类型的经工程改造的免疫细胞是含有嵌合抗原受体(称为“CAR”或“CAR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体，其包含特异性结合至FLT3的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：a)可变重链CDR1，其包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或b)可变重链CDR2，其包含与SEQ ID NO:18或‑SEQ ID NO:26的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或c)可变重链CDR3，其包含与SEQ ID NO SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:27的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或d)可变轻链CDR1，其包含与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或e)可变轻链CDR2，其包含与SEQ ID NO:23或31的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或f)可变轻链CDR3，其包含与SEQ ID:24或SEQ ID NO:32的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或g)可变重链CDR1，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链CDR1序列的氨基酸序列；或h)可变重链CDR2，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链CDR2序列的氨基酸序列；或i)可变重链CDR3，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链CDR3序列的氨基酸序列；或j)可变轻链CDR1，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链CDR1序列的氨基酸序列；或k)可变轻链CDR2，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链CDR2序列的氨基酸序列；或l)可变轻链CDR3，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链CDR3序列的氨基酸序列；或m)可变重链序列，其与克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个残基；或n)可变轻链序列，其与克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个残基。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.01 US 62/3172191.一种嵌合抗原受体，其包含特异性结合至FLT3的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：a)可变重链CDR1，其包含与SEQIDNO:17的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或b)可变重链CDR2，其包含与SEQIDNO:18或-SEQIDNO:26的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或c)可变重链CDR3，其包含与SEQIDNOSEQIDNO:19或SEQIDNO:27的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或d)可变轻链CDR1，其包含与SEQIDNO:22或SEQIDNO:30的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或e)可变轻链CDR2，其包含与SEQIDNO:23或31的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或f)可变轻链CDR3，其包含与SEQID:24或SEQIDNO:32的氨基酸序列相差不多于3、2、1或0个氨基酸残基的氨基酸序列；或g)可变重链CDR1，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链CDR1序列的氨基酸序列；或h)可变重链CDR2，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链CDR2序列的氨基酸序列；或i)可变重链CDR3，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链CDR3序列的氨基酸序列；或j)可变轻链CDR1，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链CDR1序列的氨基酸序列；或k)可变轻链CDR2，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链CDR2序列的氨基酸序列；或l)可变轻链CDR3，其包含克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链CDR3序列的氨基酸序列；或m)可变重链序列，其与克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变重链序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个残基；或n)可变轻链序列，其与克隆10E3、克隆2E7、克隆8B5、克隆4E9或克隆11F11的可变轻链序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个残基。2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其还包含至少一个共刺激域。3.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其还包含至少一个活化域。4.如权利要求2所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激域是以下项的信号传送区：CD28、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-1(PD-1)、可诱导型T细胞共刺激因子(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDlla/CD18)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP-10、Fcγ受体、MHCI类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白蛋白质、细胞因子受体、整联蛋白、信号淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDlld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDlla、LFA-1、ITGAM、CDllb、ITGAX、CDllc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、与CD83特异性结合的配体或其任何组合。5.如权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激域包含CD28。6.如权利要求5所述的嵌合抗原受体，其中所述CD28共刺激域包含与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6或SEQIDNO:8的序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个氨基酸残基的序列。7.如权利要求3所述的嵌合抗原受体，其中所述CD8共刺激域包含与SEQIDNO:14的序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个氨基酸残基的序列。8.如权利要求3所述的嵌合抗原受体，其中所述活化域包含CD3。9.如权利要求7所述的嵌合抗原受体，其中所述CD3包含CD3ζ。10.如权利要求8所述的嵌合抗原受体，其中所述CD3ζ包含与SEQIDNO:10的序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个氨基酸残基的序列。11.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激域包含与SEQIDNO:2的序列相差不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个氨基酸残基的序列，且所述活化域包含与SEQIDNO:10的序列相差不多于10、9、10、8、7、6、5、4、3、2、1或0个氨基酸残基的序列。12.一种多核苷酸，其编码如权利要求1所述的嵌合抗原受体。13.一种载体，其包含如权利要求12所述的多核苷酸。14.如权利要求13所述的载体，其是逆转录病毒载体、DNA载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。15.一种免疫细胞，其包含如权利要求13所述的载体。16.如权利要求15所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞是T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、NK细胞、TCR表达细胞、树突状细胞或NK-T细胞。17.如权利要求16所述的免疫细胞，其中所述细胞是自体T细胞。18.如权利要求16所述的免疫细胞，其中所述细胞是同种异体T细胞。19.如权利要求15所述的免疫细胞，其中所述载体被引入到从患者身体分离或从取自患者身体的样品生长的细胞中。20.如权利要求15所述的免疫细胞，其中所述载体被引入到从供体身体分离或从取自患者身体的样品生长的细胞中。21.一种药物组合物，其包含如权利要求15所述的免疫细胞。22.一种嵌合抗原受体，其包含：(a)克隆10E3的VH区和克隆10E3的VL区；(b)克隆2E7的VH区和克隆2E7的VL区；(c)克隆8B5的VH区和克隆8B5的VL区；(d)克隆4E9的VH区和克隆4E9的VL区；或(e)克隆11F11的VH区和克隆11F11的VL区，其中所述VH和VL区由至少一个连接子连接。23.如权利要求22所述的嵌合抗原受体，其中所述连接子包含scFvG4S连接子或scFvWhitlow连接子。24.如权利要求22所述的嵌合抗原受体，其还包含共刺激域。25.如权利要求22所述的嵌合抗原受体，其还包含活化域。26.如权利要求24所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激域是以下项的信号传送区：CD28、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-1(PD-1)、可诱导型T细胞共刺激因子(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDlla/CD18)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP-10、Fcγ受体、MHCI类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白蛋白质、细胞因子受体、整联蛋白、信号淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDlld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDlla、LFA-1、ITGAM、CDllb、ITGAX、CDllc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、与CD83特异性结合的配体或其任何组合。27.一种免疫细胞，其包含如权利要求22所述的嵌合抗原受体。28.如权利要求27所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞是T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、NK细胞、TCR表达细胞、树突状细胞或NK-T细胞。29.如权利要求28所述的T细胞，其是自体T细胞。30.如权利要求29所述的T细胞，其是同种异体T细胞。31.一种药物组合物，其包含如权利要求27所述的细胞。32.一种经分离的多核苷酸，其包含编码如权利要求22所述的嵌合抗原受体的序列。33.一种载体，其包含如权利要求32所述的多核苷酸。34.一种免疫细胞，其包含如权利要求33所述的载体。35.如权利要求34所述的免疫细胞，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：A巴克，L胡，T阿特法森，JJ维尔茨耶斯，RA罗德里格斯，
申请(专利权)人：美国安进公司，凯德药业公司，
类型：发明
国别省市：美国,US