一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法技术

本发明专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，包括软骨预处理、碱液浸提、生产非变性II型胶原蛋白和生产硫酸软骨素盐等步骤。本发明专利技术实现了非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素盐两种高附加值产品的联合生产，提高了原料利用率和产品的附加值；在生产过程中采用低温碱液浸提工艺，避免因温度过高造成非变性Ⅱ型胶原蛋白的变性；同时提高了软骨中的硫酸软骨素回收程度，避免了常规硫酸软骨素回收工艺中高温耗能和步骤繁琐等弊端。本发明专利技术具有潜在的市场价值。

【技术实现步骤摘要】
一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法
本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法。
技术介绍
现有胶原蛋白与硫酸软骨素联产的技术基本都是变性的胶原蛋白，即水解获得的小分子肽，很少有非变性胶原蛋白和硫酸软骨素联产的技术，而以软骨为原料生产非变性Ⅱ型胶原蛋白的技术，基本上只提取非变性Ⅱ型胶原蛋白，软骨中的硫酸软骨素未能利用，均作为废弃物排掉，造成了很大资源浪费同时，又增加了企业有机废水处理成本以及后续可能的环境污染风险。另外，现有的非变性Ⅱ型胶原蛋白的提取工艺，由于工艺的限制，多会对胶原蛋白的结构产生破坏，进而破坏胶原蛋白活性；同时生产硫酸软骨素工艺多数为将软骨进行高温蒸煮，冷却后再进行酶解、超滤、树脂吸附、树脂转型等，存在耗能高，提取率低，步骤繁琐的弊端。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是如何克服现有技术存在的不足，提供一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法。本专利技术的技术解决方案是：一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)软骨预处理：动物软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡6～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M碱液中于12-30℃下浸泡6～24h浸提，通过离心机或过滤分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用步骤(2)碱液阳离子对应的氯化物洗脱得到含硫酸软骨素盐的洗脱液，洗脱液用无水乙醇沉淀，脱水，过滤收集沉淀，烘干可得到硫酸软骨素盐。进一步的，步骤(1)脱脂时间为24～72h，步骤(2)中的碱液为氢氧化钙，步骤(4)中的氯化物为氯化钙，硫酸软骨素盐为硫酸软骨素钙盐。进一步的，步骤(2)中的碱液为氢氧化钾，步骤(4)中的氯化物为氯化钾，硫酸软骨素盐为硫酸软骨素钾盐。进一步的，离心机的操作条件为5000rpm，4℃，10分钟以上。进一步的，动物软骨为猪、牛、鸡、鸭的关节软骨或胸部软骨。本专利技术主要以动物软骨为原料，采用低温碱液浸提工艺，同时生产非变性Ⅱ型胶原蛋白和硫酸软骨素盐，取得了以下的技术效果：(1)首次实现非变性Ⅱ型胶原蛋白和硫酸软骨素盐两种高附加值产品的联合生产，提高了原料利用率和产品的附加值。(2)使用低温碱液浸提工艺，避免了常规工艺因温度过高造成非变性Ⅱ型胶原蛋白的变性。(3)使用低温碱液浸提工艺，避免了硫酸软骨素生产常规工艺中高温耗能和生产步骤繁琐等弊端，软骨素几乎全部进入浸提液中，提取率较高。(4)现有硫酸软骨素产品主要以钠盐为主，使用者使用量大时有潜在的引发高血压的风险，本专利技术硫酸软骨素钾盐或者钙盐的快速、低耗能制备工艺，弥补了现有硫酸软骨素钾盐和钙盐的市场稀缺，拓宽了产品应用开发范围。附图说明图1为实施例1产品中的非变性Ⅱ型胶原蛋白扫描电镜图。具体实施方式以下结合实施例，详细说明本专利技术一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法。实施例1一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，包括以下步骤：(1)软骨预处理：将鸡软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡24～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M氢氧化钙中于12℃下浸泡6～24h浸提，通过离心机分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用氯化钙洗脱得到含硫酸软骨素钙盐的洗脱液，洗脱液用无水乙醇沉淀，脱水，过滤收集沉淀，烘干可得到硫酸软骨素钙盐。离心机的操作条件为5000rpm，4℃，10分钟以上。实施例2一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，包括以下步骤：(1)软骨预处理：将鸡软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡24～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M氢氧化钙中于20℃下浸泡6～24h浸提，通过离心机分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用氯化钙洗脱得到含硫酸软骨素钙盐的洗脱液，洗脱液用无水乙醇沉淀，脱水，过滤收集沉淀，烘干可得到硫酸软骨素钙盐。离心机的操作条件为5000rpm，4℃，10分钟以上。实施例3一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，包括以下步骤：(1)软骨预处理：将鸡软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡24～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M氢氧化钙中于30℃下浸泡6～24h浸提，通过离心机分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用氯化钙洗脱得到含硫酸软骨素钙盐的洗脱液，洗脱液用无水乙醇沉淀，脱水，过滤收集沉淀，烘干可得到硫酸软骨素钙盐。离心机的操作条件为5000rpm，4℃，10分钟以上。实施例4一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，包括以下步骤：(1)软骨预处理：将猪软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡6～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M氢氧化钾中于12℃下浸泡6～24h浸提，通过过滤分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用氯化钾洗脱得到含硫酸软骨素钾盐的洗脱液，洗脱液用无水乙醇沉淀，脱水，过滤收集沉淀，烘干可得到硫酸软骨素钾盐。实施例5一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，包括以下步骤：(1)软骨预处理：将猪软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡6～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M氢氧化钾中于20℃下浸泡6～24h浸提，通过过滤分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用氯化钾洗脱得到含硫酸软骨素钾盐的洗脱液，洗脱液用无本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)软骨预处理：动物软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡6～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M碱液中于12‑30℃下浸泡6～24h浸提，通过离心机或过滤分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用步骤(2)碱液阳离子对应的氯化物洗脱得到含硫酸软骨素盐的洗脱液，洗脱液用无水乙醇沉淀，脱水，过滤收集沉淀，烘干可得到硫酸软骨素盐。

【技术特征摘要】
1.一种非变性II型胶原蛋白和硫酸软骨素的联合制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)软骨预处理：动物软骨清洗剔肉后，以1～5倍体积无水乙醚或丙酮浸泡6～72h脱脂，脱脂后的软骨用1～10倍体积1～6M盐酸胍去除杂蛋白，用质量浓度0.1～10％过氧化氢浸泡18～24h消毒，用捣碎机将处理后的软骨捣碎；(2)碱液浸提：将捣碎后的软骨在0.1～4M碱液中于12-30℃下浸泡6～24h浸提，通过离心机或过滤分离得到沉淀和清液；(3)生产产品一：将沉淀用粉碎机粉碎，冻干得到非变性Ⅱ型胶原蛋白；(4)生产产品二：将清液过阴离子树脂或大孔吸附树脂后，树脂用步骤(2)碱液阳离子对应的氯化物洗脱得到含硫酸软骨素盐的洗脱液，洗脱液用无水乙醇沉淀，脱水，过滤收集沉淀，烘干可得到硫酸软骨素...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亮，王静，张雷，
申请(专利权)人：美泰科技青岛股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37