一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法。本发明专利技术提供的保护液包括1‑5份的肝素钙、20‑40份的低分子右旋糖苷、1‑2份的罂粟碱、5‑10份的海藻糖、800‑1000份的水和4‑6份的中药提取物。本发明专利技术提供的宫内膜干细胞保护液不含血清，价格低廉，保存的宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率较高，随着时间的延长，减缓宫内膜干细胞的复苏率的降低速率。

A protective solution for endometrial stem cells and its preparation method

The invention provides an endometrial stem cell protective solution and a preparation method thereof. The protective solution provided by the invention comprises 1_5 heparin calcium, 20_40 low molecular dextran, 1_2 papaverine, 5_10 trehalose, 800_1000 water and 4_6 Chinese medicine extracts. The endometrial stem cell protective solution provided by the invention does not contain serum and has low price. The recovery rate of the preserved endometrial stem cells after cryopreservation and resuscitation is higher, and the reduction rate of the recovery rate of the endometrial stem cells is slowed down with the prolongation of time.

【技术实现步骤摘要】
一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法。
技术介绍
宫内膜干细胞具有高度增殖活性及自我再生能力，在细胞治疗和再生医学中有着重要的临床医学价值，目前已经可以在体外培养扩增宫内膜干细胞，用于科学研究、药物筛选测试、临床应用等，为了方便的取用体外培养扩增的宫内膜干细胞，一般需要对培养出的宫内膜干细胞进行冻存和复苏，目前，一般的宫内膜干细胞冻存时使用的冻存液分为含血清型和无血清型两类，含血清型冻存液成分复杂、价格昂贵且质量难以控制，因而无血清型冻存液的应用越来越多，无血清型冻存液主要含有70％的无血清培养基、20％牛血清白蛋白和10％二甲基亚砜，放置于无血清冻存液中保存的宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率随着时间延长而大幅度降低，严重影响后续的使用。
技术实现思路
为了解决现有技术中宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率较低等问题，本专利技术提供了一种宫内膜干细胞保护液，该保护液不含血清，价格低廉，保存的宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率较高，随着时间的延长，减缓宫内膜干细胞的复苏率的降低速率。本专利技术具体技术方案如下：本专利技术提供了一种宫内膜干细胞保护液，该保护液包括如下重量份的各成分：1-5份的肝素钙、20-40份的低分子右旋糖苷、1-2份的罂粟碱、5-10份的海藻糖、800-1000份的水和4-6份的中药提取物；所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：进一步地，中药提取物由如下重量份的成分制备而成：本专利技术通过在保护液中加入肝素钙、低分子右旋糖苷、罂粟碱、海藻糖、水和中药提取物，为宫内膜干细胞提供充足的养分，减慢其新陈代谢速度，提高宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率。进一步地，中药提取物的提取方法包括如下步骤：1)取配方量的青叶胆洗净、粉碎，放置于50-70℃温水中减压浸提两次，每次浸提1-2h，青叶胆与50-70℃温水的固液比为1:10-12，浸提真空度为0.7-0.9Mpa，合并各次浸提液，得青叶胆浸提液；2)取配方量的香附、蔓荆子和薤白放置于浓度为40-60％的乙醇溶液中超声30-40min，香附、蔓荆子和薤白的总重量与40-60％的乙醇溶液的固液比为1:40-60，超声频率为40-60KHz，得超声提取液；3)将步骤1)获得的青叶胆浸提液与步骤2)获得的超声提取液合并，混合均匀，浓缩干燥至粉末，即得中药提取物。其中，固液比是指某物质的重量g与液体的体积mL的比。本专利技术通过以上方法制备中药提取物，通过各中药中不同的有效成分的配伍，与肝素钙、低分子右旋糖苷、罂粟碱和海藻糖共同作用，协同增效，进一步地提高宫内膜干细胞冻存复苏后的复苏率。进一步地，保护液还包括重量份数为4-10份的维生素B6、2-4份的氯化镁和10-20份的N-乙酰半胱氨酸。本专利技术通过在保护液中加入维生素B6、氯化镁、和N-乙酰半胱氨酸的混合物，能够很好地保持冻存复苏后的宫内膜干细胞的特性。进一步地，保护液还包括重量份数为0.4-0.6份的超氧化物歧化酶、3-7份的LpxC-1和0.8-1.2份的柠檬酸锌。本专利技术通过在保护液中加入超氧化物歧化酶、LpxC-1和柠檬酸锌组成的混合物，能够在宫内膜干细胞的保存期间，维持细胞的增殖活性。进一步地，保护液还包括重量份数为4-8份的磷酸氢二钾、1-5份的妥布霉素和0.2-1份的甘油。本专利技术通过在保护液中加入磷酸氢二钾、妥布霉素和甘油，能够降低冻存复苏后的宫内膜干细胞的染菌率。本专利技术另一方面还提供了保护液的制备方法，该方法包括如下步骤：S1：取1/2配方量的水，将配方量的肝素钙以4-8s/d的速度加入搅拌状态的水中，滴加完毕后继续以400-500r/min的速度搅拌25min，用细菌过滤器过滤，得肝素钙水溶液；S2：将配方量的低分子右旋糖苷、罂粟碱和海藻糖放置于剩余配方量的水中以800-1000r/min的速度搅拌4-6min，用细菌过滤器过滤，获得混合水溶液；S3：将步骤S1获得的肝素钙水溶液和步骤S2获得的混合水溶液混合均匀后加入配方量的中药提取物，再次混合均匀，冰水浴降至0℃，即得。通过以上方法制备的保护液对宫内膜干细胞的保存效果更好，进一步地提高冻存复苏后的宫内膜的复苏率。本专利技术另一方面提供了上述宫内膜干细胞保护液在保存宫内膜干细胞中的应用。进一步地，每mL所述保护液中保存的宫内膜干细胞的数量为7～9×105个。进一步地，保护液的工作温度为-20～-80℃。本专利技术的有益效果如下:本专利技术提供的宫内膜干细胞保护液能够减慢其新陈代谢速度，提高冻存复苏后宫内膜干细胞的复苏率，冻存5天后复苏的宫内膜干细胞的复苏率不低于93.8％，最大程度的延长宫内膜干细胞的活性维持时间。具体实施方式实施例1一种宫内膜干细胞保护液，该保护液由如下重量份的各成分制备而成：1份的肝素钙、20份的低分子右旋糖苷、1份的罂粟碱、5份的海藻糖、800份的水和4份的中药提取物，其中，所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：其中，该宫内膜干细胞保护液的制备方法是将肝素钙、右旋糖苷、罂粟碱、海藻糖、和中药提取物放置于水中混合均匀，即得。实施例2一种宫内膜干细胞保护液，该保护液由如下重量份的各成分制备而成：3份的肝素钙、30份的低分子右旋糖苷、1.5份的罂粟碱、7.5份的海藻糖、900份的水和5份的中药提取物，其中，所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：其中，中药提取物的提取方法包括如下步骤：1)取配方量的青叶胆洗净、粉碎，放置于50℃温水中减压浸提两次，每次浸提1h，青叶胆与50℃温水的固液比为1:10，浸提真空度为0.7Mpa，合并各次浸提液，得青叶胆浸提液；2)取配方量的香附、蔓荆子和薤白放置于浓度为40％的乙醇溶液中超声30min，香附、蔓荆子和薤白的总重量与40％的乙醇溶液的固液比为1:40，超声频率为40KHz，得超声提取液；3)将步骤1)获得的青叶胆浸提液与步骤2)获得的超声提取液合并，混合均匀，浓缩干燥至粉末，即得中药提取物；其中，该宫内膜干细胞保护液的制备方法是将肝素钙、右旋糖苷、罂粟碱、海藻糖、和中药提取物放置于水中混合均匀，即得。实施例3一种宫内膜干细胞保护液，该保护液由如下重量份的各成分制备而成：5份的肝素钙、40份的低分子右旋糖苷、2份的罂粟碱、10份的海藻糖、1000份的水和6份的中药提取物，其中，所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：其中，中药提取物的提取方法包括如下步骤：1)取配方量的青叶胆洗净、粉碎，放置于70℃温水中减压浸提两次，每次浸提2h，青叶胆与70℃温水的固液比为1:12，浸提真空度为0.9Mpa，合并各次浸提液，得青叶胆浸提液；2)取配方量的香附、蔓荆子和薤白放置于浓度为60％的乙醇溶液中超声40min，香附、蔓荆子和薤白的总重量与60％的乙醇溶液的固液比为1:60，超声频率为60KHz，得超声提取液；3)将步骤1)获得的青叶胆浸提液与步骤2)获得的超声提取液合并，混合均匀，浓缩干燥至粉末，即得中药提取物；其中，该宫内膜干细胞保护液的制备方法是将肝素钙、右旋糖苷、罂粟碱、海藻糖、和中药提取物放置于水中混合均匀，即得。实施例4一种宫内膜干细胞保护液，该保护液由如下重量份的各成分制备而成：3份的肝素钙、30份的低分子右旋糖苷、1.5份的罂粟本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种宫内膜干细胞保护液，其特征在于，所述保护液包括如下重量份的各成分：1‑5份的肝素钙、20‑40份的低分子右旋糖苷、1‑2份的罂粟碱、5‑10份的海藻糖、800‑1000份的水和4‑6份的中药提取物；所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：

【技术特征摘要】
1.一种宫内膜干细胞保护液，其特征在于，所述保护液包括如下重量份的各成分：1-5份的肝素钙、20-40份的低分子右旋糖苷、1-2份的罂粟碱、5-10份的海藻糖、800-1000份的水和4-6份的中药提取物；所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：2.权利要求1所述的宫内膜干细胞保护液，其特征在于，所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成：3.如权利要求1所述的宫内膜干细胞保护液，其特征在于，所述中药提取物的提取方法包括如下步骤:1)取配方量的青叶胆洗净、粉碎，放置于50-70℃温水中减压浸提两次，每次浸提1-2h，青叶胆与50-70℃温水的固液比为1:10-12，浸提真空度为0.7-0.9Mpa，合并各次浸提液，得青叶胆浸提液；2)取配方量的香附、蔓荆子和薤白放置于浓度为40-60％的乙醇溶液中超声30-40min，香附、蔓荆子和薤白的总重量与40-60％的乙醇溶液的固液比为1:40-60，超声频率为40-60KHz，得超声提取液；3)将步骤1)获得的青叶胆浸提液与步骤2)获得的超声提取液合并，混合均匀，浓缩干燥至粉末，即得中药提取物。4.如权利要求1所述的宫内膜干细胞保护液，其特征在于，所述保护液还包括重量份数为4-10份的维生素B6、2-4份的氯化镁和10-20份的N-乙酰半胱氨酸。5.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：董明珠，宋莉莉，潘新，刘世红，卢家堃，
申请(专利权)人：北京世纪劲得生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11