本发明专利技术提供了一种用于冻存复苏后的细胞保存液及其用途。本发明专利技术提供的保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为40‑55mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为25‑32mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为20‑28mg/mL，为冻存复苏后的细胞提供充足的养分，维持其存活率，降低其污染率，延长其冻存时间。
A Cell Preservation Solution for Cryopreservation and Resuscitation and Its Application
The present invention provides a cell preservation solution for cryopreservation and resuscitation and its use. The preservation solution provided by the invention is mainly composed of ammonium acetate and total ginsenosides dissolved in the aqueous solution of the MEM medium with a concentration of 40 55mg/mL, in which the concentration of ammonium acetate dissolved is 25 32mg/mL, and the concentration of total ginsenosides dissolved is 20 28mg/mL, providing sufficient nutrients for the cells after freezing and resuscitation, maintaining their survival rate, reducing their contamination rate and prolonging their freezing storage time.
【技术实现步骤摘要】
一种用于冻存复苏后的细胞保存液及其用途
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种用于冻存复苏后的细胞保存液及其用途。
技术介绍
细胞治疗是指利用某些具有特定功能的细胞的特性，采用生物工程方法获取和/或通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。细胞治疗的治疗范围包括:慢性疾病，如慢性肾衰竭、伴随胃、胆囊、胰腺功能下降的消化障碍、慢性便秘、慢性肝衰竭、椎间盘受损、脊柱疼痛、关节提前损耗等；退行性疾病，如共济失调、小脑萎缩、帕金森、多发性硬化症等；免疫性疾病，如红斑狼疮、类风湿性关节炎、青少年糖尿病、多种皮肤病等。细胞的种类有很多，如间充质干细胞等，而在临床移植治疗中，不能将新鲜分离的干细胞直接输注于人体内，它需要先存放在可以输注的保存液(如0.9％氯化钠注射液)中一定时间，再输注于体内。有的细胞冻存一段时间后，需要复苏才能进行使用，而冻存复苏后的细胞，细胞膜较为脆弱、细胞的抵抗力较低，此时若使用常规的保存液保存细胞，则细胞的存活率会下降，同时污染率会增加，因此，尚需提供一种用于冻存复苏后的细胞保存液，来保证冻存复苏后的细胞的存活率和活性。
技术实现思路
为了解决现有技术中细胞冻存复苏后在常规保存液中细胞膜脆弱导致细胞存活率低等问题，本专利技术提供了一种用于冻存复苏后的细胞保存液，该保存液延长了冻存复苏后的细胞的活性维持时间，降低其污染率，提高其存活率。本专利技术具体技术方案如下:本专利技术提供了一种用于冻存复苏后的细胞保存液，该保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为40-55mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为25-32mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为20-28mg/mL。进一步的改进，该保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为45mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为30mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为25mg/mL。进一步的改进，MEM培养基为L型MEM培养基。其中，L型MEM培养基包含:200.00mg/L的无水氯化钙、97.67mg/L的硫酸镁、400.00mg/L的氯化钾、6800.00mg/L的氯化钠、115.00mg/L的无水磷酸二氢钠、126.00mg/L的L-盐酸精氨酸、31.00mg/L的L-盐酸胱氨酸、292.00mg/L的L-谷氨酰胺、42.00mg/L的L-盐酸组氨酸、52.00mg/L的L-异亮氨酸、52.00mg/L的L-亮氨酸、73.00mg/L的L-盐酸赖氨酸、15.00mg/L的L-甲硫氨酸、32.00mg/L的L-苯丙氨酸、48.00mg/L的L-苏氨酸、18.00mg/L的L-色氨酸、36.00mg/L的L-酪氨酸、46.00mg/L的L-缬氨酸、1.00mg/L的D-泛酸钙、1.00mg/L的叶酸、2.00mg/L的肌醇、1.00mg/L的烟酰胺、1.00mg/L的氯化胆碱、1.00mg/L的盐酸吡哆辛、0.10mg/L的核黄素、1.00mg/L的盐酸硫胺、1000.00mg/L的葡萄糖和10.00mg/L的酚红。本专利技术通过将醋酸铵、人参总皂苷溶解于MEM培养基中，形成保存液，为细胞提供养分，进而提高细胞的存活率，延长细胞的保存时间。进一步的改进，保存液还包含浓度为20-36mg/mL的金霉素、浓度为15-25mg/mL的头孢吡肟和浓度为10-24mg/mL的柳氮磺吡啶。本专利技术通过在保存液中加入金霉素、头孢吡肟和柳氮磺吡啶组成的混合抗生素，可降低细胞的染菌率，进而保证其质量。进一步的改进，保存液还包含浓度为5-8mg/mL的磷酸氢钙、浓度为20-30mg/mL的白蛋白和浓度为30-45/ml的海藻糖。其中，白蛋白可以是卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白、肌白蛋白、麦白蛋白、豆白蛋白等任何白蛋白。本专利技术通过在保存液中加入磷酸氢钙、白蛋白和海藻糖，可增强保存液的稳定性。保存液还包含浓度为10-25mg/mL的虾青素、浓度为5-15mg/mL的毛地黄黄酮和浓度为20-30mg/mL的维生素E。本专利技术通过在保存液中加入虾青素、毛地黄黄酮和维生素E，可提高冻存复苏后的细胞的扩增倍数。本专利技术还提供了一种用于冻存复苏后的细胞保存液的制备方法，该方法包括如下步骤:S1:配制浓度为40-55mg/mL的MEM培养基水溶液；S2:将醋酸铵和人参总皂苷放置于S1获得的MEM培养基水溶液中搅拌至均匀，其中，醋酸铵溶解后的浓度为25-32mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为20-28mg/mL，得混合液；S3:将S2获得的混合液用细菌过滤器过滤，于冰水浴中降温至0℃，即得。进一步的改进，S2的搅拌速度为500r/min。本专利技术提供一种用于冻存复苏后的细胞保存液，该保存液可用于保存冻存复苏后的细胞，延长其活性维持时间。本专利技术的有益效果如下:本专利技术提供的用于冻存复苏后的细胞保存液可降低冻存复苏后的细胞的染菌率，使其在9个月内保持稳定，最大程度的延长细胞的活性维持时间。具体实施方式实施例1一种用于冻存复苏后的细胞保存液，该保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为40mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为25mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为20mg/mL。实施例2一种用于冻存复苏后的细胞保存液，该保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为45mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为30mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为25mg/mL。实施例3一种用于冻存复苏后的细胞保存液，该保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为55mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为32mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为28mg/mL。实施例4一种用于冻存复苏后的细胞保存液，该保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为45mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为30mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为25mg/mL；该冻存复苏后的细胞保存液的制备方法包括如下步骤:S1:配制浓度为45mg/mL的MEM培养基水溶液；S2:将醋酸铵和人参总皂苷放置于S1获得的MEM培养基水溶液中搅拌至均匀，其中醋酸铵溶解后的浓度为30mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为25mg/mL，得混合液；S3:将S2获得的混合液用细菌过滤器过滤，于冰水浴中降温至0℃，即得。实施例5一种用于冻存复苏后的细胞保存液，与实施例2的不同之处在于，保存液还包含浓度为20mg/mL的金霉素、浓度为15mg/mL的头孢吡肟和浓度为10mg/mL的柳氮磺吡啶。实施例6一种用于冻存复苏后的细胞保存液，与实施例2的不同之处在于，保存液还包含浓度为28mg/mL的金霉素、浓度为20mg/mL的头孢吡肟和浓度为18mg/mL的柳氮磺吡啶。实施例7一种用于冻存复苏后的细胞保存液，与实施例2的不同之处在于，保存液还包含浓度为36mg/mL的金霉素、浓度为25mg/mL的头孢吡肟和浓度为24mg/mL的柳氮磺吡啶。实施例8一种用于冻存复苏后的细胞保存液，与实施例2的不同之处在于，保存液还包含浓度为5mg/mL的磷酸氢钙、浓度为20m本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于冻存复苏后的细胞保存液，其特征在于，所述保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为40‑55mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为25‑32mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为20‑28mg/mL。
【技术特征摘要】
1.一种用于冻存复苏后的细胞保存液，其特征在于，所述保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为40-55mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为25-32mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为20-28mg/mL。2.如权利要求1所述的用于冻存复苏后的细胞保存液，其特征在于，所述保存液主要是由醋酸铵和人参总皂苷用浓度为45mg/mL的MEM培养基水溶液溶解而成，其中醋酸铵溶解后的浓度为30mg/mL，人参总皂苷溶解后的浓度为25mg/mL。3.如权利要求1所述的用于冻存复苏后的细胞保存液，其特征在于，所述MEM培养基为L型MEM培养基。4.如权利要求1所述的用于冻存复苏后的细胞保存液，其特征在于，所述保存液还包含浓度为20-36mg/mL的金霉素、浓度为15-25mg/mL的头孢吡肟和浓度为10-24mg/mL的柳氮磺吡啶。5.如权利要求1所述的用于冻存复苏后的细胞保存液，其特征在于，所述保存液还包含浓度为5-8mg/mL的磷酸氢钙、浓度为...
【专利技术属性】
技术研发人员：董明珠，李霞云，潘新，刘世红，卢家堃，
申请(专利权)人：北京世纪劲得生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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