一种丝绸文物的高灵敏度检测方法技术

本发明专利技术涉及文物检测领域，公开了一种丝绸文物的高灵敏度检测方法，本发明专利技术方法先制备纯净的丝素蛋白粉末，同时提取文物样中的丝素蛋白；在NHS/EDC溶液的作用下利用层层自组装的方法在清理干净的玻碳电极表面依次修饰金纳米颗粒，中空结构的聚丙烯酸‑多巴胺复合物，聚甲基丙烯酸甲酯‑马来酸酐/1‑十八碳烯交替共聚物球形纳米珠，鼠抗丝素蛋白单克隆抗体；利用修饰后的电极分别对丝素蛋白溶液和文物样溶液进行检测。本发明专利技术公开的方法，灵敏度高，检测下限低，重现性好，可对丝绸文物进行高灵敏度检测。

【技术实现步骤摘要】
一种丝绸文物的高灵敏度检测方法
本专利技术涉及文物检测领域，尤其涉及一种丝绸文物的高灵敏度检测方法。
技术介绍
蚕丝是一种天然高分子蛋白质纤维，其起源问题一直笼罩在迷雾中。蚕丝的常规检测方法主要有傅里叶红外光谱、拉曼光谱、X-射线衍射等，但蚕丝长期处于墓葬或遗址环境中会受到多种因素影响，从而出现蛋白质降解及大分子链断裂等问题，采用传统的一些方法很难检测到丝素蛋白的存在。因此如何采用自然科学的先进手段，建立丝织品微痕检测技术体系，从印痕，残留物，土壤中提取古代丝绸的信息，对研究丝绸的起源至关重要。当前蛋白质检测的先进技术是基于抗体-抗原的WesternBlotting或ELISA法，但是这些方法对一些丝素蛋白含量极低的文物样仍然难以进行检测。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种丝绸文物的高灵敏度检测方法，本专利技术方法检测下限低，灵敏度高，重现性好，能检测出文物泥化样中含量极低的丝素蛋白。本专利技术的具体技术方案为：一种丝绸文物的高灵敏度检测方法，包括以下步骤：A）取蚕茧并取出内部的蚕蛹，去除最内层的蛹衬；将所得蚕茧壳加入Na2CO3脱胶液中搅拌，并重复该操作多次以充本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种丝绸文物的高灵敏度检测方法，其特征在于包括以下步骤：A）取蚕茧并取出内部的蚕蛹，去除最内层的蛹衬；将所得蚕茧壳加入Na2CO3脱胶液中搅拌，并重复该操作多次以充分除去丝胶；将不溶的丝素用去离子水洗多次，烘干，备用；B）将烘干的丝素加入蛋白提取液中搅拌溶解；将溶有丝素的蛋白提取液在常温下冷却过滤后，用截留分子量为10000的纤维素透析袋在去离子水中透析以去除钙离子和氯离子，得到纯化的丝素蛋白溶液；将丝素蛋白溶液真空冷冻干燥，得到丝素蛋白，研磨成粉末后密封瓶备用；C）取一根玻碳电极，将去除污渍的玻碳电极在麂皮上依次用1.0μm、0.3μm、0.05 μm的氧化铝悬浮液中进行8字形打磨；接下...

【技术特征摘要】
1.一种丝绸文物的高灵敏度检测方法，其特征在于包括以下步骤：A）取蚕茧并取出内部的蚕蛹，去除最内层的蛹衬；将所得蚕茧壳加入Na2CO3脱胶液中搅拌，并重复该操作多次以充分除去丝胶；将不溶的丝素用去离子水洗多次，烘干，备用；B）将烘干的丝素加入蛋白提取液中搅拌溶解；将溶有丝素的蛋白提取液在常温下冷却过滤后，用截留分子量为10000的纤维素透析袋在去离子水中透析以去除钙离子和氯离子，得到纯化的丝素蛋白溶液；将丝素蛋白溶液真空冷冻干燥，得到丝素蛋白，研磨成粉末后密封瓶备用；C）取一根玻碳电极，将去除污渍的玻碳电极在麂皮上依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm的氧化铝悬浮液中进行8字形打磨；接下来依次在无水乙醇和蒸馏水中超声洗涤；D）将洗净的玻碳电极浸泡在0.4-0.6M的稀硫酸溶液中，在电化学工作站上利用循环伏安法循环活化35-45周，循环伏安法的扫描范围为-0.4V-1.6V,扫描速率为0.08-0.12V/s；E）配制得到PBS7.4溶液，称取K3[Fe(CN)6]、K4[Fe(CN)6]、KCl，加入PBS7.4溶液，得到[Fe(CN)6]3-/4-浓度为4.5-5.5mM的铁氰化钾溶液；F）分别配制十六烷基三甲基溴化铵溶液、HAuCl4溶液和NaBH4溶液；将十六烷基三甲基溴化铵溶液添加于离心管中，在震荡作用下向其中加入HAuCl4溶液；再在震荡作用下，快速加入NaBH4溶液，剧烈震荡，静置，得到金纳米颗粒溶液；G）按体积比50-70:80-100:8-12将0.15-0.25mg/mL的聚丙烯酸溶液、1.5-2.5mol/L的氨水和水混合，超声震荡，然后加入异丙醇，搅拌均匀，静置后1-5℃保存；H）按体积比5-7：8-12：8-12将步骤G）所得溶液、水，和异丙醇混合，随后加入多巴胺溶液，静置，得到中空结构的聚丙烯酸-多巴胺复合物溶液；I）称取质量比为110-130：70-90的聚甲基丙烯酸甲酯和马来酸酐/1-十八碳烯交替共聚物，加入三氯甲烷和十二烷基磺酸钠溶液，所得混合液超声震荡，离心，除去上清液，剩余产物用水洗涤多次，得到球形纳米珠，最后加入三氯甲烷中制得溶液，备用；J）取步骤D）处理后的玻碳电极，滴加35-45μL步骤F）中所得金纳米颗粒溶液于玻碳电极表面，室温干燥后，将电极浸泡0.2-0.3M的巯基丙酸中5-7h，然后彻底洗涤，将玻碳电极在NHS/EDC溶液浸泡中0.5-1.5h；然后将玻碳电极洗涤后在其表面滴加25-35μL步骤H）所得溶液，室温干燥后洗涤，将玻碳电极在NHS/EDC溶液中浸泡20-40min；彻底洗涤后在玻碳电极表面继续滴加25-35μL步骤I）所得溶液，室温干燥，在NHS/EDC溶液中浸泡20-40min；最后在玻碳电极表面滴加8-12μL鼠抗丝素蛋白单克隆抗体，35-39℃孵育0.5-1.5h；...

【专利技术属性】
技术研发人员：李津，王秉，欧阳毅，刘林帅，胡智文，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33