一种饲养场存储玉米饲料中黄曲霉毒素检测方法技术

一种饲养场存储玉米饲料中黄曲霉毒素检测方法，在玉米饲料使用前进行处理得到粉末样品，再对粉末样品进行连续回流提取，得到玉米饲料提取液，最后，使玉米饲料提取液通过由氧化铝与硅镁吸附剂组成的微柱层析管，利用波长为365nm的紫外光照射，观察硅镁吸附层上是否出现蓝紫色荧光，并以此为依据判断该批玉米饲料能否使用。本发明专利技术以微柱筛选法为基础，通过对存储的玉米饲料样品进行诱导催发，使其中可能含有的黄曲霉菌会大量繁殖，从而产生大量的黄曲霉毒素，这样在采用微柱筛选法检测时能够很容易被检测出来，避免了由于霉变少、黄曲霉毒素含量低导致的微柱筛选法不能检测出黄曲霉毒素的问题，提高了检测精度。

【技术实现步骤摘要】
一种饲养场存储玉米饲料中黄曲霉毒素检测方法
本专利技术涉及到畜产品饲料检测领域，具体的说是一种饲养场存储玉米饲料中黄曲霉毒素检测方法。
技术介绍
玉米是动物饲料的主要原料之一，在动物饲养场或者是动物饲料生产厂往往都存储有大量的玉米作为饲料。在正常情况下，这些玉米饲料在购入时一般都会将样品送至专门的化验部门进行检测，来确定其中黄曲霉毒素是否超标。但是在存放过程中，由于存储时间、存储条件和外部环境变化等原因会导致部分玉米饲料可能会发霉，从而产生黄曲霉毒素。由于玉米饲料的存储周期一般不会太长，发霉的玉米数量很少，发霉的程度也一般都较低，从表面上看很难分辨出玉米饲料中存在发霉现象。即使这种微量的玉米发霉，也会在饲料中产生黄曲霉毒素，将其用于饲养动物时，这些黄曲霉毒素会在动物体内富集，间接危害食品安全，甚至严重时引起动物集体中毒。现有的黄曲霉毒素检测方法主要有以下几种：1）液相色谱法其原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离，再用荧光检测器测定；该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素，检测速度快且定性与定量准确，检测限低，可作为仲裁法使用，但仪器设备价格昂贵，前处理方法相对繁琐，若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加，对操作人员的身体健康仍存在一定的危害；2）酶联免疫法其原理是根据抗体和抗原之间特异性的免疫学反应，最后用测定酶活力的方法来增加测定的灵敏度。该方法检测速度快、对人体危害小、但重复性差、试剂寿命短、需低温保存、假阳性概率较高、需要配置专门的酶标仪，且对一些富含盐和脂肪的试样需进行额外的处理；3）毛细管电泳法该方法与激光减弱荧光检测器连用可很好地提高灵敏度。但该方法的成本较高，操作复杂，不适宜在试样检测中广泛应用；4）荧光光度法该方法的原理是利用各种黄曲霉素的荧光特性差异用荧光光度计测定试样中黄曲霉素的含量。该方法对检测人员身体健康无危害，检测速度迅速，灵敏度高，适用于大量试样检测，且定量准确，但检测费用较高，需要配置专用设备，且不能对单一的毒素进行检测；5）金标试纸法其原理是利用抗体与抗原的特异性结合反应，可一步检测黄曲霉素。该法可在5～10min内完成对试样中黄曲霉素的定性测定，具有简单、快速的特点，且无须其他仪器设备的配合，既可在实验室中进行检测，也可在现场进行实地测定，但是其检测的准确度、精度有待进一步的研究；6）薄层分析法其原理是针对不同的试样，用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来，经柱层析净化后，再在薄板上展开后分离。利用黄曲霉素的荧光特性，根据荧光斑点的强弱与标准比较确定其含量，对于一些组分很复杂的试样要双向展开，才能获得较高的灵敏度。该方法设备简单，检测费用低，但操作繁琐、费时，萃取和净化效果不理想，灵敏度差，对操作人员的身体健康存在较大程度的危害。7）微柱筛选法其原理是样品提取液中的黄曲霉毒素被硅镁型吸附层吸附后在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环，其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系。若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg)。该方法检测成本低，但同样存在着操作繁琐、费时，萃取和净化效果不理想，灵敏度差的问题，特别是不确定玉米饲料中是否存在发霉状况，或者微量发霉的情况下，很难检测出黄曲霉毒素，这就会导致微量的黄曲霉毒素在动物体内富集，从而危害人体。由于在饲养场或者动物饲料厂（尤其是动物饲养场），其存储的大量玉米饲料每天都要大量使用，如果每次在使用前都进行检测的话，不仅检测成本高（需要购买专业的设备以及培养专业的检测人员），而且更主要的是，由于需要频繁使用，检测的频率很高，现有的检测方法十分繁琐、对微量的发霉很难检测出来，导致微量的黄曲霉毒素在动物体内富集，进而影响食品和人身安全。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种成本低、检测精度高的黄曲霉毒素检测方法，适用于饲养场或者饲料厂等大量存储玉米饲料的场合，本方法是以微柱筛选法为基础，通过对存储的玉米饲料样品进行诱导催发，使其中可能存在的黄曲霉等霉菌大量繁殖，产生大量的黄曲霉毒素并被检测出来，从而避免了低含量黄曲霉毒素在动物体内的富集，而且一次检测可以预测出在常规存储条件下，七天甚至更多时间后的发霉状况，降低了检测频率。本专利技术为实现上述技术目的所采用的技术方案为：一种饲养场存储玉米饲料中黄曲霉毒素检测方法，包括以下步骤：首先，在玉米饲料使用前24-36h，从仓库待使用的玉米饲料中随机抽取玉米饲料样品，对其进行处理后得到粉末样品；其次，利用有机溶剂对粉末样品进行连续回流提取，从而得到玉米饲料提取液；所述有机溶剂为甲醇和丙酮以1:2的体积比混合得到；最后，使玉米饲料提取液通过由氧化铝与硅镁吸附剂组成的微柱层析管，而后利用波长为365nm的紫外光照射，观察硅镁吸附层上是否出现蓝紫色荧光，并以此为依据判断该批玉米饲料能否使用；所述对玉米饲料样品进行处理是指，对玉米饲料样品进行催发和磨粉，从而得到粉末样品，具体操作如下：1）将玉米饲料样品粉碎至粒径小于1mm的细颗粒，而后向其中加入其总质量10-20%的培养液拌合均匀，并在环境湿度为75-85%、温度为28-35℃的遮光无菌环境中发酵培养18-24h；所述培养液的制备方法为，称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂，而后用多层纱布过滤，得到马铃薯泥，再向马铃薯泥中加入20g琼脂，将两者加热搅拌，待琼脂溶解完后，加入20g葡萄糖，搅拌均匀，冷却后补足蒸馏水至1000毫升，灭菌20分钟即得到培养液；2）将步骤1）中发酵培养后的细颗粒加水浸泡20-30min后过滤，再向滤渣中加入其质量20-40%的石油醚，而后进行研磨粉碎从而得到粒径小于0.2mm的混合物；3）将步骤2）中的混合物采用清水冲洗，之后过滤并在70-80℃条件下烘干得到粉末样品。本专利技术中，所述步骤2）中的混合物，先将混合物利用液氮处理，使其在30s内温度急速降低至-70℃，而后将其移入到60℃的密闭环境中加热2min，之后再依次采用石油醚和清水冲洗。本专利技术中，所述步骤1）的培养液在配制时，向其中加入0.5-1g的促发剂，所述促发剂从绿豆中提取获得，其提取方法如下：1）将脱壳后的绿豆研磨粉碎至粒径小于0.5mm的粉末，而后向其中加入水制成粉末质量百分比为50-80%的糊状物，并使用草酸调节其pH值为5-6，备用；2）向步骤1）制备的糊状物中加入纤维素酶和L-半胱氨酸酶解36-48h，其中，每100g的糊状物中加入6000-7000FPU单位的纤维素酶和0.5-2g的L-半胱氨酸酶；3）酶解结束后，向糊状物中加入质量浓度为30-35%的氢氧化钠溶液并加热至50-60℃，保持20-30min；氢氧化钠溶液的加入量为糊状物质量的2-3倍，且在加热过程中，每隔3min向其施加频率为600-900MHz的微波30s；4）将加热完毕后的糊状物过滤后，用清水冲洗至pH值为中性，之后再利用石油醚作为有机溶剂进行回流提取，提取液蒸干即得到促发剂。本专利技术中，所述步骤2）中，先向滤渣中加入其质量20-40%的石油醚，而后再加入其质量20-30%的乙腈，之后进行研磨粉碎从而得到粒径小于0.2mm的混合物。本专利技术中，所述观察硅镁吸附层上是否出现蓝紫色荧光，并以此为依据判断该批玉米饲料能否使用的具体操作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种饲养场存储玉米饲料中黄曲霉毒素检测方法，包括以下步骤：首先，在玉米饲料使用前24‑36h，从仓库待使用的玉米饲料中随机抽取玉米饲料样品，对其进行处理后得到粉末样品；其次，利用有机溶剂对粉末样品进行连续回流提取，从而得到玉米饲料提取液；所述有机溶剂为甲醇和丙酮以1:2的体积比混合得到；最后，使玉米饲料提取液通过由氧化铝与硅镁吸附剂组成的微柱层析管，而后利用波长为365nm的紫外光照射，观察硅镁吸附层上是否出现蓝紫色荧光，并以此为依据判断该批玉米饲料能否使用；其特征在于，所述对玉米饲料样品进行处理是指，对玉米饲料样品进行催发和磨粉，从而得到粉末样品，具体操作如下：1）将玉米饲料样品粉碎至粒径小于1mm的细颗粒，而后向其中加入其总质量10‑20%的培养液拌合均匀，并在环境湿度为75‑85%、温度为28‑35℃的遮光无菌环境中发酵培养18‑24h；所述培养液的制备方法为，称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂，而后用多层纱布过滤，得到马铃薯泥，再向马铃薯泥中加入20g琼脂，将两者加热搅拌，待琼脂溶解完后，加入20g葡萄糖，搅拌均匀，冷却后补足蒸馏水至1000毫升，灭菌20分钟即得到培养液；2）将步骤1）中发酵培养后的细颗粒加水浸泡20‑30min后过滤，再向滤渣中加入其质量20‑40%的石油醚，而后进行研磨粉碎从而得到粒径小于0.2mm的混合物；3）将步骤2）中的混合物采用清水冲洗，之后过滤并在70‑80℃条件下烘干得到粉末样品。...

【技术特征摘要】
1.一种饲养场存储玉米饲料中黄曲霉毒素检测方法，包括以下步骤：首先，在玉米饲料使用前24-36h，从仓库待使用的玉米饲料中随机抽取玉米饲料样品，对其进行处理后得到粉末样品；其次，利用有机溶剂对粉末样品进行连续回流提取，从而得到玉米饲料提取液；所述有机溶剂为甲醇和丙酮以1:2的体积比混合得到；最后，使玉米饲料提取液通过由氧化铝与硅镁吸附剂组成的微柱层析管，而后利用波长为365nm的紫外光照射，观察硅镁吸附层上是否出现蓝紫色荧光，并以此为依据判断该批玉米饲料能否使用；其特征在于，所述对玉米饲料样品进行处理是指，对玉米饲料样品进行催发和磨粉，从而得到粉末样品，具体操作如下：1）将玉米饲料样品粉碎至粒径小于1mm的细颗粒，而后向其中加入其总质量10-20%的培养液拌合均匀，并在环境湿度为75-85%、温度为28-35℃的遮光无菌环境中发酵培养18-24h；所述培养液的制备方法为，称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂，而后用多层纱布过滤，得到马铃薯泥，再向马铃薯泥中加入20g琼脂，将两者加热搅拌，待琼脂溶解完后，加入20g葡萄糖，搅拌均匀，冷却后补足蒸馏水至1000毫升，灭菌20分钟即得到培养液；2）将步骤1）中发酵培养后的细颗粒加水浸泡20-30min后过滤，再向滤渣中加入其质量20-40%的石油醚，而后进行研磨粉碎从而得到粒径小于0.2mm的混合物；3）将步骤2）中的混合物采用清水冲洗，之后过滤并在70-80℃条件下烘干得到粉末样品。2.根据权利要求1所述的一种检测饲养场存储玉...

【专利技术属性】
技术研发人员：仝崇，徐向阳，刘任晖，李华松，王雷，王娟娟，宋晓红，秦锐峰，叶红艳，李敏，张爱朝，付琳琳，
申请(专利权)人：平顶山市畜产品质量安全监测中心，
类型：发明
国别省市：河南,41