本发明专利技术提供一种长链非编码RNA以及检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的引物及试剂盒，所述长链非编码RNA包括ENST00000447277和NR_024564。本发明专利技术利用数字PCR技术鉴定多环芳烃暴露人群血浆样本中特定的一组lncRNA表达量的差异变化，及早准确评估多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的风险，公开检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的生物标记物lncRNA组合的试剂盒，试剂盒中包含的lncRNA的引物和相关试剂。本发明专利技术提供的分子标记可以快速检测出与多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的风险的相关lncRNA，结果准确可靠，及早发现人群在多环芳烃暴露的情况下对心血管系统的不良影响，及时采取相关措施提供科学依据。
【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNA以及检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的引物及试剂盒
本专利技术涉及生物医学领域，具体是一种长链非编码RNA以及检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的引物及试剂盒。
技术介绍
多环芳烃是分子中含有两个以上苯环的碳氢化合物，主要来自于煤，石油，木材等有机物的热解和不完全燃烧，是生活和生产环境中很普遍的空气污染物，与人们的工作和生活息息相关。除了我们所熟知的致癌和致突变功能，长期接触多环芳烃会导致心血管疾病发病率和死亡率的增加。心率变异性(HRV)是指逐次心跳周期差异的变化情况，包括连续24h内正常RR间期标准差(SDNN)、相邻正常RR间期标准差(RMSSD)、低功频率(LF)、高功频率(HF)、总功率(TP)等，反映自主神经系统交感神经活性与迷走神经活性及其平衡协调的关系，心率变异性的降低可增加冠心病的发病和死亡风险，常作为心血管早期损害的标志。长期接触多环芳烃的暴露人群会出现HRV的降低，因此对早期心血管损害进行快速、准确的诊断具有重要的临床意义。人类基因组中仅有约2％的可编码基因，其参与mRNA的转录，并最终合成蛋白质发挥生物学功能，而余下的98％的基因为非编码RNA(non-codingRNA，ncRNA),根据长度其可以分为(1)小非编码RNA(<200核苷酸)(2)长非编码RNA(lncRNAs)，它们具有介于0.2到2kb的长度。LncRNA分布广泛，在动物、植物乃至病毒中均发现了LncRNA的存在。起初人们认为LncRNA没有编码蛋白质的功能，不参与体内生物学作用而被当做是基因组转录的“噪声”，但目前大量研究已经表明LncRNA其实在表观遗传学、转录水平及转录后水平等多个方面参与了基因表达的调控，并且与生物体内的剂量补偿效应、基因组印记、细胞发育分化等重要生物学过程息息相关，几乎参与了生物体内所有的生理和病理过程。许多研究已经证实多种特异性LncRNA参与了心血管细胞发育与分化、冠状动脉粥样硬化、心梗、心力衰竭等多个心血管生理、病理过程。同时，LncRNA通常会形成较为稳定的二级结构，为在体液中比如血液和尿液中检测LncRNA提供了可能性，通过检测外周血循环系统中异常表达的LncRNA有望成为某些疾病的早期诊断依据，具有潜在的临床价值。综上所述，目前有必要探寻新的有效的非编码RNA作为多环芳烃暴露人群心血管早期损伤检测的标记物，为诊断多环芳烃暴露人群心血管早期损伤提供依据。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供一种一种长链非编码RNA以及检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的引物及试剂盒，可以快速检测出与多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的风险的相关lncRNA，结果准确可靠。本专利技术提供的技术方案：一种长链非编码RNA，包括ENST00000447277和NR_024564，所述ENST00000447277的核酸序列如SEQIDNO:1所示；NR_024564的核酸序列如SEQIDNO:2所示。所述的长链非编码RNA在检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的分子标志物中的用途。一种引物对，用于检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的所述的长链非编码RNA表达水平，ENST00000447277的上游引物核苷酸序列为：5'-CAATGGGAAAGGCTCTGGG-3'，下游引物核苷酸序列为：5'-GTGCCCTCCTTCCGTGGTA-3'，NR_024564的上游引物序列为：5'-CTGAGAGGTGCCTGTAACTGAGC-3'，下游引物序列为：5'-AGACCCTTTATGTGCCATCTGC-3'。一种检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的试剂盒，包含上面所述的引物对。进一步的，所述试剂盒还包括内参基因β-actine的引物和探针序列、ENST00000447277的探针序列和NR_024564的探针序列；内参基因β-actine上游引物序列：5’-CATCCTCACCCTGAAGTA-3’，内参基因β-actine下游引物序列：5’-AGGTCTCAAACATGATCTG-3’，内参基因β-actine的探针序列：5’-ACGGCATCGTCACCAACTGG-3’，HEX荧光基团，BHQ淬灭基团，ENST00000447277的探针序列：5'-ATTATGCAGGCGTGAAGACCCCACA-3'，FAM荧光基团，BHQ淬灭基团；NR_024564的探针序列：5'-AGGCCAATCAAAGCAGAGCTCCCA-3'，FAM荧光基团，BHQ淬灭基团。进一步的，所述试剂盒还包括反转录所需试剂：反转录缓冲液、dNTP混合液、RNA酶蛋白质抑制剂、反转录酶和无核酸酶纯水。进一步的，所述试剂盒还包括数字PCR所需的下列试剂：数字PCR预混液，无核酸酶纯水，微滴分析专用油，微滴发生专用油。进一步的，所述试剂盒的检测方法包括RT-PCR、数字PCR、原位杂交、基因芯片检测。一种用于检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的数字PCR反应试剂盒，至少包括针对LncRNA(ENST00000447277和NR_024564)以及内参基因β-actine的正向引物，反向引物与探针。ENST00000447277的正向引物5'CAATGGGAAAGGCTCTGGG3'，反向引物5'-GTGCCCTCCTTCCGTGGTA-3'和探针序列5'-ATTATGCAGGCGTGAAGACCCCACA-3'(FAM荧光基团，BHQ淬灭基团)。LncRNANR_024564正向引物5'-CTGAGAGGTGCCTGTAACTGAGC-3'，反向引物5'-AGACCCTTTATGTGCCATCTGC-3'和探针序列5'-AGGCCAATCAAAGCAGAGCTCCCA-3'(FAM荧光基团，BHQ淬灭基团)。内参β-actine正向引物5’-CATCCTCACCCTGAAGTA-3’，反向引物5’-AGGTCTCAAACATGATCTG-3’和探针序列5’-ACGGCATCGTCACCAACTGG-3’(HEX荧光基团，BHQ淬灭基团)。所述试剂盒能够通过检测血浆中LncRNA(ENST00000447277和NR_024564)表达水平来诊断多环芳烃暴露人群是否有心血管早期损伤。本专利技术具有如下优点：(1)本专利技术提供的分子标记可以快速检测出与多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的风险的相关lncRNA，及早发现人群在多环芳烃暴露的情况下对心血管系统的不良影响。(2)本方法使用数字PCR检测中相关lncRNA的方法，可以检测血浆中极低量的RNA，结果准确可靠。(3)多环芳烃暴露人群相关lncRNA的检出，发现在多环芳烃暴露的情况下对人群心血管系统的早期损害，为及时采取相关措施提供科学依据。附图说明图1：差异LncRNA筛选。图2-A为血浆LncRNAENST00000447277表达筛选，图2-B为血浆LncRNANR_024564表达筛选，12对多环芳烃暴露人群与对照人群，匹配年龄性别和吸烟状态。图3-A为尿总多环芳烃与血浆LncRNAENST00000447277散点与平均数和标准差，图3-B为尿总多环芳烃与血浆LncRNANR_024564散点与平均数和标准差，在403位多环芳烃工作者本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种长链非编码RNA，其特征在于：包括ENST00000447277和NR_024564，所述ENST00000447277的核酸序列如SEQ ID NO:1所示；NR_024564的核酸序列如SEQ ID NO:2所示。
【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNA，其特征在于：包括ENST00000447277和NR_024564，所述ENST00000447277的核酸序列如SEQIDNO:1所示；NR_024564的核酸序列如SEQIDNO:2所示。2.如权利要求1所述的长链非编码RNA在检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的分子标志物中的用途。3.一种引物对，其特征在于，用于检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的如权利要求1所述的长链非编码RNA表达水平，ENST00000447277的上游引物核苷酸序列为：5'-CAATGGGAAAGGCTCTGGG-3'，下游引物核苷酸序列为：5'-GTGCCCTCCTTCCGTGGTA-3'，NR_024564的上游引物序列为：5'-CTGAGAGGTGCCTGTAACTGAGC-3'，下游引物序列为：5'-AGACCCTTTATGTGCCATCTGC-3'。4.一种检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的试剂盒，其特征在于：包含权利要求2所述的引物对。5.根据权利要求4所述的检测多环芳烃暴露人群心血管早期损伤的试剂盒，其特征在于：还包括内参基因β-actine的引物和探针序列、ENST00000447277的探针序列和NR_024564的探针序列；内参基因β-actine上游引物序列：5’-CATCCTCACCCTGAAGTA-3’，内参基因β-actin...
【专利技术属性】
技术研发人员：方秦，张晓敏，朱锐，刘苗，郭文婷，张喆，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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