本发明专利技术涉及一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY‑1、制备方法及其应用，分离得到的拟态弧菌噬菌体命名为拟态弧菌噬菌体OY‑1（保藏号CCTCC NO：M 2017588），对拟态弧菌、副溶血性弧菌及溶藻弧菌具有高效的跨种裂解活性，噬菌体培养物及其制剂能够作为生物抑菌剂控制致病性弧菌的繁殖及生物被膜形成，降低水产食品及其养殖加工环境中致病性弧菌污染的风险。
【技术实现步骤摘要】
一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1、制备方法及其应用
本专利技术涉及一种具有跨种裂解特征的拟态弧菌噬菌体，及其作为生物抑菌剂、水体净化剂及饲料添加剂在水产品养殖、储运和加工环境中的抑菌应用，减少致病性弧菌引起的污染，保证食品安全卫生，属于生物工程领域。
技术介绍
弧菌是一类世界范围内广泛分布的革兰氏阴性杆菌，是水产养殖中最为常见、流行性最广、危害最为严重的细菌性病原之一，随着水产养殖业的发展，弧菌病的爆发越来越频繁，传播速度越来越快，给全世界水产养殖业带来了巨大的经济损失。在目前发现的弧菌种属中，副溶血弧菌（Vibrioparahemolyticus）、溶藻弧菌（Vibrioalginolyicus）和拟态弧菌（Vibriomimicus）是与人类肠内、肠外感染有关的重要人兽共患病原菌。主要通过污染水产品而危害人类健康，可引起食物中毒、肠道传染病、伤口感染、其它组织炎症和败血症等。近年来流行病学调查结果显示这三种致病性弧菌是沿海沿江区域腹泻病的主要病原菌。弧菌在适应自然环境生长过程中，极易在食品、加工器具的表面形成生物被膜，被膜内的细菌对常规保鲜剂、抑菌剂的抵抗能力可以提高数百倍，很难被清除，从而导致持续性污染，给水产食品安全带来严重危害。目前水产养殖业主要应用抗生素等来抑制致病性弧菌的生长，然而滥用抗生素导致的细菌耐药性和超级细菌已成为全球最紧迫的公共卫生问题之一。因此，亟需开发天然无害的生物抑菌剂替代抗生素及常规化学抑菌剂应用于养殖水体净化及水产食品安全控制。噬菌体是一类细菌依赖性的病毒，又称细菌病毒。裂解性噬菌体感染细菌后，可在宿主菌内快速增殖，并使之裂解，故又称烈性噬菌体。噬菌体广泛存在于自然界中，并且对宿主菌具有专一性，制备成本低廉，安全性好。在水产品的安全控制中，应用噬菌体作为生物抑菌剂来控制致病性弧菌生物被膜形成及生长代谢，具有潜在的开发价值。通常噬菌体的只能针对特定种属的细菌产生抑制作用，对多种弧菌的混合污染作用有限，因此亟需筛选具有广谱裂解特性的噬菌体用于构建抑菌剂。
技术实现思路
针对以上问题，本专利技术要解决的技术问题是提供一种对3种致病性弧菌均具有强裂解作用的噬菌体，该制剂可以单独或复配使用，能够有效控制生物被膜形成、抑制水产品在养殖或储运加工过程中致病性弧菌的繁殖与代谢，为水产品的生物防治提供一种安全、高效、廉价的噬菌体产品。本专利技术所述的具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏地址：中国.武汉.武汉大学；保藏编号：CCTCCNO：M2017588；保藏日期：2017年10月17日，分类命名为BacteriophageofVibriomimicusOY-1（即最小弧菌噬菌体OY-1、VibriomimicusphageOY-1），其中拟态弧菌又称为最小弧菌。本专利技术进一步公开了拟态弧菌噬菌体（Vibriomimicusphage）OY-1在制备抑菌剂中的应用以及作为抑菌剂的有效成分的用途。本专利技术还公开了拟态弧菌噬菌体（Vibriomimicusphage）OY-1在养殖水产品弧菌病防治中的应用。即，拟态弧菌噬菌体OY-1在制备水体净化剂或饲料添加剂中的应用，拟态弧菌噬菌体OY-1抑制拟态弧菌、副溶血弧菌及溶藻弧菌的生长，用于防治水产养殖中由拟态弧菌、副溶血弧菌及溶藻弧菌等引起的弧菌病。同时，还公开了拟态弧菌噬菌体（Vibriomimicusphage）OY-1作为水体净化剂或饲料添加剂有效成分的用途。本专利技术还公开了拟态弧菌噬菌体（Vibriomimicusphage）OY-1用于水产品储运、加工环境中的抑菌用途。即，拟态弧菌噬菌体（Vibriomimicusphage）OY-1在制备水产品养殖、储运、加工中所需的抑菌或除菌试剂中的应用。本专利技术还提供了具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1的分离物或培养物。本专利技术还提供了一种致病性弧菌抑菌剂，是以所述的拟态弧菌噬菌体OY-1的分离物或培养物作为抑菌成分。本专利技术从农贸市场采集的污水样品中分离出一株拟态弧菌噬菌体（Vibriomimicusphage）OY-1，保藏在中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC），保藏地址：中国.武汉.武汉大学；保藏编号：CCTCCNO：M2017588；保藏日期：2017年10月17日。本专利技术中的拟态弧菌噬菌体OY-1具有以下生物学特征：（1）形态学特征：通过透射电镜观察，头部对称，直径约为55nm，尾长约为8nm，无伸缩性尾鞘，属于短尾噬菌体科。（2）噬菌体核酸类型：噬菌体为dsDNA。（3）噬菌体基因组特征：最小弧菌噬菌体OY-1基因组全长为43479bp，其中编码基因总长度分别为38403bp，平均长度分别为936.66bp，占总长的88.33%，GC含量为49.26%，有41个开放阅读框(ORFs)。41个ORFs编码蛋白中都可以在数据库中搜到同源性基因序列，其中24个ORFs编码的蛋白为假设蛋白，有17个蛋白序列功能明确，基因组数据显示最小弧菌噬菌体OY-1为一种新的噬菌体。（4）具有强烈的拟态弧菌、副溶血性弧菌及溶藻弧菌跨种裂解性能。（5）能够抑制拟态弧菌、副溶血性弧菌及溶藻弧菌的生物被膜形成。本专利技术将上述的拟态弧菌噬菌体OY-1制备成一种致病性弧菌噬菌体抑菌剂，用作水产品养殖、储运、生产加工等环境中的抑菌剂，制备方法为：分别取100μL拟态弧菌噬菌体OY-1噬菌体液与相应对数期生长期的拟态弧菌液100μL混合，室温放置10min，然后加到10mLLBS液体培养基中，25℃，150rpm恒温振荡过夜培养；将试管中的培养物转至灭菌离心管中，经8000×g，10min离心后收集上清液，通过0.22µm微孔滤膜过滤除菌，得到噬菌体增殖液。加0.93gPEG8000，0.58gNaCl，摇匀至溶解，4℃过夜；10000×g4℃离心20min，去上清液；加0.5mLSM(1L：NaCl5.8g，MgSO4.7H2O2.0g，1MTris-HCl(pH7.4)50mL)溶液，室温作用1h；通过加入等体积的氯仿抽提30s；3000×g4℃离心15min回收含有噬菌体颗粒的亲水相。将获得的纯化的拟态弧菌噬菌体OY-1噬菌体颗粒(其为保藏的CCTCCNO：M2017588)与SM缓冲液按1：10比例混合形成噬菌体抑菌剂母液。由本专利技术拟态弧菌噬菌体制成的抑菌剂的应用是指：将前述纯化的拟态弧菌噬菌体OY-1噬菌体颗粒用水稀释并制成喷洒液或淋洗液，用于对水产品贮藏、加工环境、生产器具的喷洒或洗涤，减少水产品加工过程中造成的拟态弧菌、副溶血性弧菌及溶藻弧菌等致病性弧菌的污染；或者将纯化的拟态弧菌噬菌体经过扩培后作为海产品暂养水体的净化剂，用于防治水产品暂养过程中由拟态弧菌、副溶血性弧菌及溶藻弧菌等致病性弧菌引起的弧菌病。本专利技术中所述的水产品是指：海洋、河流、湖泊等水体中可供食用或使用的产品，包括鱼、虾、贝、海藻等水生动物。由于本专利技术采用拟态弧菌噬菌体OY-1裂解拟态弧菌、副溶血性弧菌及溶藻弧菌，可以有效抑制拟态弧菌等多种致病弧菌的代谢和繁殖，减少拟态弧菌等致病弧菌引起的食品污染，保持水产品及其环境的卫生安全，降低食源性疾病的发生；由于本专利技术涉及的噬本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY‑1，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2017588；保藏日期：2017年10月17日，分类命名为Bacteriophage of Vibrio mimicus OY‑1。
【技术特征摘要】
1.一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2017588；保藏日期：2017年10月17日，分类命名为BacteriophageofVibriomimicusOY-1。2.权利要求1所述的一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1在制备抑菌剂中的应用。3.权利要求1所述的一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1作为抑菌剂的有效成分的用途。4.权利要求1所述的一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1在制备水体净化剂或饲料添加剂中的应用，其特征在于，拟态弧菌噬菌体OY-1用于抑制拟态弧菌、副溶血弧菌及溶藻弧菌的生长。5.权利要求1所述的一种具有跨种裂解特性的拟态弧菌噬菌体OY-1作为水体净化...
【专利技术属性】
技术研发人员：高璐，杨振泉，欧阳敏，李熠，胡钦，饶胜其，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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