一种高产黄酮的高山火绒草愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法技术

本发明专利技术公开了一种高产黄酮的高山火绒草愈伤组织诱导和反应器悬浮培养方法。本发明专利技术主要针对现有技术的技术缺陷，提供一种可稳定获得高山火绒草高产黄酮的愈伤组织并进行反应器规模化培养的方法，解决当前尚无高黄酮含量的高山火绒草细胞系的问题。本发明专利技术通过对培养基中基础元素和激素进行大量筛选比较和其它实验条件摸索，建立了一种高山火绒草愈伤诱导方法，以无菌苗的茎、叶片等诱导愈伤组织，并建立了可培养高产黄酮类化合物的高山火绒草细胞系的组织培养方案，并能使用一次性生物反应器逐级放大，量产高产黄酮的高山火绒草细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种高产黄酮的高山火绒草愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法
本专利技术属于植物组织培养
，涉及一种高产黄酮的高山火绒草愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法。
技术介绍
高山火绒草（Leontopodiumalpinum）是菊科火绒草属植物，又称“雪绒花”，一种多年生草本植物，多生于海拔1000到3400米的石灰岩土壤、石砾地等，是欧洲的固有植物，更被瑞士誉为国花。高山火绒草植物中含有多种化学成分，迄今分离获得的有萜类、苯丙素类（酚酸、黄酮类、香豆素类、木脂素类）、脂肪酸类和聚乙炔类等。高山火绒草在心血管及神经系统方面有较好的药理活性，同时还具有抗炎、抗菌、抗氧化、利尿及化学防治功效。所以高山火绒草被广泛应用于食品、药品及化妆品等领域。但由于过度采挖，高山火绒草数量急剧减少，并被国际自然保护联盟列为濒危物种，许多国家如奥地利、德国、意大利和列支郭士登等都曾出台法律保护野生高山火绒草。高山火绒草在生长早期几乎没有黄酮类等物质合成，开花之后直至盛花期各种代谢物开始积累，野生高山火绒草开花时间不同（贯穿火绒草的生长季节），为了便于种植者与收购者采集，被驯化后的人工栽培品种可在同一时间段开花。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高产黄酮的高山火绒草愈伤组织诱导和反应器悬浮培养方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）高山火绒草种子消毒：将高山火绒草种子用自来水洗去尘土后，75%乙醇消毒30‑60 s，4%次氯酸钠溶液消毒8‑10 min，无菌水洗涤4次，置于基础培养基BM上，20‑25℃培养，光照强度500‑1000 lux；7‑21天即可萌发；所述的基础培养基BM指的是：1/2MS或MS+ 30 g/L蔗糖，琼脂0.7‑1.0%，pH 5.8‑6.0；（2）高山火绒草愈伤组织诱导：取无菌苗的叶片（或茎）分割为边长0.5‑1 cm方片或茎段，置于愈伤诱导培养基CIM，20‑25 ℃培养，光照强度＜1000 lu...

【技术特征摘要】
1.一种高产黄酮的高山火绒草愈伤组织诱导和反应器悬浮培养方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）高山火绒草种子消毒：将高山火绒草种子用自来水洗去尘土后，75%乙醇消毒30-60s，4%次氯酸钠溶液消毒8-10min，无菌水洗涤4次，置于基础培养基BM上，20-25℃培养，光照强度500-1000lux；7-21天即可萌发；所述的基础培养基BM指的是：1/2MS或MS+30g/L蔗糖，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；（2）高山火绒草愈伤组织诱导：取无菌苗的叶片（或茎）分割为边长0.5-1cm方片或茎段，置于愈伤诱导培养基CIM，20-25℃培养，光照强度＜1000lux，14-21d即在切口边缘形成黄色疏松的愈伤组织，将愈伤组织分成约0.5cm小块，置于愈伤继代培养基CM1，20-25℃培养，光照强度＜1000lux，每10-15d继代一次；所述的愈伤诱导培养基CIM指的是：B5+2-4mg/L2,4-D+30g/L蔗糖+0.1mg/LL-谷氨酰胺+0.2mg/L水解乳蛋白或B5+2-4mg/L2,4-D+0.1-0.5mg/L6-BA+30g/L蔗糖+0.1mg/LL-谷氨酰胺+0.2mg/L水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；所述的愈伤继代培养基CM1指的是：B5+1-2.5mg/L2,4-D+30g/L蔗糖+0.1mg/LL-谷氨酰胺+0.2mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鹏，刘水燕，张萌，何俊雄，张卫，谭光伟，
申请(专利权)人：天津艾赛博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12