贻贝GST μ亚型基因在检测溴氰菊酯污染的水产品的应用制造技术

本申请公开了贻贝GSTμ亚型基因在检测溴氰菊酯污染的水产品的应用，具体为检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的试剂在检测受溴氰菊酯污染的水产品的应用，所述贻贝GSTμ亚型基因的序列如SEQ ID No.10所示。所述试剂为针对贻贝GSTμ亚型基因的特异性探针或针对贻贝GSTμ亚型基因的特异性引物。本申请为水产品污染，尤其是受溴氰菊酯污染的贻贝，提供了新的灵敏性更高的检测方法，有效地提升了食品安全检测能力。

Application of Mussel GSTmu Subtype Gene in Detecting Deltamethrin Contaminated Aquatic Products

This application discloses the application of the mussel GST Mu subtype gene in detecting deltamethrin-contaminated aquatic products, specifically the application of the reagent for detecting the transcription level of the mussel GST Mu subtype gene in detecting deltamethrin-contaminated aquatic products. The sequence of the mussel GST Mu subtype gene is shown in SEQ ID No.10. The reagent is a specific probe for mussel GST mu gene or a specific primer for mussel GST mu gene. This application provides a new and more sensitive detection method for aquatic product pollution, especially for mussels contaminated by deltamethrin, and effectively improves the ability of food safety detection.

【技术实现步骤摘要】
贻贝GSTμ亚型基因在检测溴氰菊酯污染的水产品的应用
本专利技术涉及检测领域，具体涉及贻贝GSTμ亚型基因在检测受溴氰菊酯污染的水产品中的应用。
技术介绍
水产品是海洋和淡水渔业生产的动植物的统称，如鱼类、虾类、蟹类等。我国既是水产品生产大国，同时也是消费大国。水产品的质量安全不仅关系着我国人民的生活健康，也影响着水产品行业的发展，因此对水产品的质量安全检测具有重要意义。随着农、兽药的滥用及环境污染的日益加剧，生物体持续暴露在多种污染物交叉的环境中，造成了其同时遭受多种污染的现象。目前，对水产品中有毒有害物质的常规检测是各种化学手段，但其只能针对部分有毒有害物质进行检测，并且对被生物体吸收代谢转化成的次级代谢产物无法检测，同时还可能由于漏检某种有毒有害物质而产生严重后果。与生物体内富集的有毒有害物质的化学测定相比，生物标记在关于有毒污染物对生物体健康的影响方面可以给出更完全的信息，具有更高的灵敏度和可靠性。谷胱甘肽硫转移酶(glutathioneS.transferase,GST)是目前广泛研究的生物标记物，GSTs是生物体内一组多功能同工酶，其主要作用是催化某些内源性或外来有害物质的亲电基团与还原性谷胱甘肽反应，增加其疏水性使其更容易通过细胞膜而排出体外，因此它在生物体受到杀虫剂、农药、重金属、化学致癌剂等危害时起解毒和抗氧化的功能从而保护生物体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种贻贝(Mytilusgalloprovincialis)GSTμ亚型基因在检测受溴氰菊酯污染的水产品中的应用，即在受污染的水中，污染物溴氰菊酯存在的条件下，贻贝GSTμ亚型基因表达相对更敏感。为达到以上目的，本专利技术采取的技术方案是：检测贻贝(Mytilusgalloprovincialis)GSTμ亚型基因转录水平的试剂在检测受溴氰菊酯污染的水产品中的应用，所述贻贝(Mytilusgalloprovincialis)GSTμ亚型基因的序列如SEQIDNo.10所示；优选的，所述水产品为贻贝(Mytilusgalloprovincialis)。在上述应用中，所述检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的试剂为针对贻贝GSTμ亚型基因的特异性探针或针对贻贝GSTμ亚型基因的特异性引物。优选地，所述特异性引物的序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示。本专利技术还提供一种用于检测受溴氰菊酯污染的水产品的荧光定量PCR试剂盒，所述试剂盒包含检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的引物对，所述引物对的序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示。优选地，所述试剂盒还包括检测内参基因转录水平的引物对。优选地，所述检测内参基因转录水平的引物对的序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示。本专利技术还提供一种检测受溴氰菊酯污染的贻贝的方法，包括如下步骤：1)收集待检测的贻贝；2)获取步骤1)中贻贝的cDNA；所述贻贝的cDNA优选为贻贝肝脏组织的cDNA；3)以步骤2)获得的cDNA为模板，以贻贝GSTμ亚型基因特异性片段为靶基因，使用荧光定量PCR检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平表达量；4)通过贻贝GSTμ亚型基因转录水平表达量的变化，反映待检测的贻贝是否受到溴氰菊酯的污染；所述贻贝GSTμ亚型基因的序列如SEQIDNo.10所示。优选地，检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的引物对的序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示。优选地，所述荧光定量PCR检测使用的内参基因为贻贝β-actin基因。优选地，检测内参基因转录水平的引物对的序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示。本专利技术所述方法具有如下有益效果：本专利技术通过试验证明，贻贝GSTalpha(α)亚型基因、mu(μ)亚型基因和sigma3(σ3)亚型基因中，贻贝GSTmu亚型基因在转录水平上的表达对溴氰菊酯的污染最灵敏。本专利技术为水产品污染，尤其是受溴氰菊酯污染的贻贝，提供了新的灵敏性更高的检测方法，有效地提升了食品安全检测能力。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本申请专利技术人研究发现，贻贝(Mytilusgalloprovincialis)GST不同亚型基因转录水平表达量的变化随不同污染物的变化表现出的敏感性明显不同。实施例1、引物设计及荧光定量PCR的建立1、引物设计靶基因A：通过NCBI获得贻贝(Mytilusgalloprovincialis)的GSTalpha(α)亚型基因序列(GenBank号：JX485635.1，如SEQIDNo.9所示)，利用序列分析软件将其与贻贝其它GST基因序列进行比较，在特异性最高的区域设计PCR扩增靶基因特异性片段用引物，并利用PrimerPremier5.0软件中的引物分析功能对所设计的引物进行各项参数分析，确定最佳引物，上游引物RA1序列为5’-ttggccggagtagggttaga-3’(SEQIDNO.1)，下游引物RA2序列为5’-ttgaaccatacatgttgtat-3’(SEQIDNO.2),扩增产物大小为187bp。靶基因B：通过NCBI获得贻贝(Mytilusgalloprovincialis)的GSTmu(μ)亚型基因序列(GenBank号：KY365433.1，如SEQIDNo.10所示)，利用分析软件将其与贻贝其它GST亚型基因序列进行比较，在特异性最高的区域设计PCR扩增靶基因特异性片段用引物，并利用PrimerPremier5.0软件中的引物分析功能对所设计的引物进行各项参数分析，确定最佳引物，上游引物RB1序列为5’-tggagaagactttgaagatgtcca-3’(SEQIDNO.3)，下游引物RB2序列为5’-tcccaacaagtcatgtttcttggg-3’(SEQIDNO.4),扩增产物大小为193bp。靶基因CK：通过NCBI获得贻贝(Mytilusgalloprovincialis)的GSTsigma3(σ3)亚型基因序列(GenBank号：JX485638.1)，利用分析软件将其与贻贝其它GST亚型基因序列进行比较，在特异性最高的区域设计PCR扩增靶基因特异性片段用引物，并利用PrimerPremier5.0软件中的引物分析功能对所设计的引物进行各项参数分析，确定最佳引物，上游引物RC1序列为5’-tagctggggaggaatggcta-3’(SEQIDNO.5)所示，下游引物RC2序列为5’-aataacatcacatctggtat-3’(SEQIDNO.6),扩增产物大小为173bp。内参基因：贻贝β-actin基因(GenBank号:AF157491.1)，上游引物LG1序列为5’-cagaaggaaatcacagcacttg-3’(SEQIDNO.7)，下游引物LG2序列为5’-gtccatgttaccaagcacga-3’(SEQIDNO.8),扩增产物大小为270bp。2、贻贝(Mytilusgalloprovincialis)肝脏组织RNA提取，反转录合成cDNA，放置于-80℃冰箱保存。3、荧光定量PCR方法的建立1)利用SYBRGreenPCRMas本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的试剂在检测受溴氰菊酯污染的水产品中的应用，其特征在于，所述贻贝GSTμ亚型基因的序列如SEQ ID No.10所示；优选的，所述水产品为贻贝。

【技术特征摘要】
1.检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的试剂在检测受溴氰菊酯污染的水产品中的应用，其特征在于，所述贻贝GSTμ亚型基因的序列如SEQIDNo.10所示；优选的，所述水产品为贻贝。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的试剂为针对贻贝GSTμ亚型基因的特异性探针或针对贻贝GSTμ亚型基因的特异性引物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述特异性引物的序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示。4.一种用于检测受溴氰菊酯污染的水产品的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含检测贻贝GSTμ亚型基因转录水平的引物对，所述引物对的序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测内参基因转录水平的引物对。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测内参基因转录水平的引物对的序列如...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓梅，张鸿伟，何京澄，崔淑华，梁成珠，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：山东,37