一种植物内生真菌Aspergillus sp.MBL1612提取物及其用途制造技术

一种植物内生真菌Aspergillus sp.MBL1612提取物及其用途，涉及生物化学技术领域。植物内生真菌的分类学命名为曲霉菌Aspergillus sp.MBL1612，该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2018798，保藏日期为2018年11月16日，保藏单位地址为：中国，武汉，武汉大学。对该菌株进行培养、提取了获得具有高效抑制病原真菌立枯丝核菌的提取物。该提取物活性产物由于来源于天然产物，在自然界易于代谢，对环境影响小，可被用来开发成为绿色、环保的天然生物农药。当药液浓度为1mg/mL时，对立枯丝核菌的抑制率高达100％，达到了完全抑制的效果。

Extract of Aspergillus sp.MBL1612, an Endophytic Fungus of Plants and Its Application

A plant endophytic fungus Aspergillus sp. MBL1612 extract and its use, which relates to the field of biochemical technology. The taxonomic name of endophytic fungi in plants is Aspergillus sp. MBL1612. The strain has been preserved in a typical culture preservation center in China. The preservation number is CCTCC NO: M 2018798. The date of preservation is November 16, 2018. The address of the preservation unit is: China, Wuhan, Wuhan University. The strain was cultured and extracted to obtain the extract of Rhizoctonia solani, which can effectively inhibit the pathogenic fungus Rhizoctonia solani. The active product of the extract is easy to be metabolized in nature and has little impact on the environment. It can be used to develop green and environmentally friendly natural biological pesticides. When the concentration of the solution was 1 mg/mL, the inhibition rate of Rhizoctonia solani was up to 100%, and the effect of complete inhibition was achieved.

【技术实现步骤摘要】
一种植物内生真菌Aspergillussp.MBL1612提取物及其用途
本专利技术涉及生物化学
，具体是涉及一种植物内生真菌Aspergillussp.MBL1612提取物及其用途，该用途主要是利用制备的植物内生真菌Aspergillussp.MBL1612提取物用于抑制病原真菌立枯丝核菌。
技术介绍
植物病原真菌对植物会产生致病作用，是引起植物病害的一种重要来源。当前，随着化学农药的广泛使用，农田生态系统中病原真菌等病原体对农药的耐药性日益增强。同时，化学农药具有污染大气、水体和土壤的特性，可以残留在动、植物体内，通过食物链进入人体，危害人类健康。为此，寻找绿色、环境友好型的生物防治技术对植物病害进行防治已成为趋势。目前，有研究指出植物内生真菌能够产生具有抗植物病原真菌的代谢产物，这使得植物内生真菌在植物病害防治中具有极高的可研究性。
技术实现思路
为了克服现有技术中存在的不足，本专利技术筛选得到了一种曲霉菌，通过对该菌株进行培养、提取获得了具有抑制病原真菌立枯丝核菌的提取物。同时，本专利技术旨在将植物内生真菌Aspergillussp.MBL1612提取物应用于绿色、环境友好型的生物防治农药中，为避免继续使用化学农药而对环境产生的危害。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案提供了一种植物内生真菌，其分类学命名为曲霉菌Aspergillussp.MBL1612，该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2018798，保藏日期为2018年11月16日，保藏单位地址为：中国，武汉，武汉大学。本专利技术所述的曲霉菌Aspergillussp.MBL1612的ITS区碱基序列为：TATAGCGGAGGACTCTGGGTCCACCTCCCACCCGTGTCTATCGTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTTTCGACGGCCGCCGGGGAGGCCTCGCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCAACATGAACGCTGTTCTGAAAGTATGCAGTCTGAGTTGATTATCATAATCAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCCCCCGTCCCCTCTCCCGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCCAGCCGACACCCAACTTTATTTCTAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCATAAACCGGGAGGAGAAATCATTACCGAGTGAGGGCCCTCTGGGGTCCAACCCTCCCCCGTGTTCTATCGTACTTGTTGCTTCAGCGGGCCGCCGTTTCGACGGCCGCCGGGGAGGCCTCGCGCCCCGGGCCCGCGCCGCCGAAGACCCACATGAACGCTGTTCTGAAGTATGCATCTGAGTTGATTATCATAATCAGTTAAACTTTCACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAAACGCAGCGAATGCGATAAGTATGTGGAATTGCAGAATTCATGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCGGGTATTCCGGGGGCATGCCTGTCCGACGTCGTGCTGCCTACGTGGTTGGTCTCTCGCCAGACACCAAAAGAAAGAGCACGATTCGTTTTTAATGAAGGAGTTTTATCCT。本专利技术所述的曲霉菌Aspergillussp.MBL1612的分离方法步骤为：步骤①、将新鲜的凤丹取其根皮，洗净表面的泥土，晾干，置于洁净工作台中；步骤②、表面消毒过程：首先用75％医用酒精浸泡2.5min，再用3.5％的NaClO溶液浸泡2min，随后再用75％医用酒精漂洗30s，最后用无菌水反复浸洗4-6次，吸取浸洗的最后一次无菌水用无菌涂布棒均匀涂布于PDA固体培养基表面，此过程是为验证表面消毒是否完全；若2-3d后PDA固体培养基表面长出菌落，说明表面消毒不完全，反之，则表面消毒完全；步骤③、将已经表面消毒了的凤丹根皮切成小块，宽度为0.2cm×0.2cm，再将其接至PDA固体培养基表面，放于生化培养箱中恒温培养5-7d，温度设置为28℃；若观察到凤丹组织块与培养基交接处有菌丝或孢子生长出，利用尖端挑取法，用牙签将菌丝或孢子挑出接至新的PDA固体培养基中；待其长满整个培养皿，沿菌落边缘打孔，再用无菌镊子取出接至新的PDA固体培养基中，此过程目的是纯化所得的内生真菌；步骤④、待纯化后的内生真菌长满整个培养皿后，放置于生化培养箱中，备用。分离方法步骤中，所述PDA固体培养基的制备方法为：每1L体积的PDA固体培养基，取200g新鲜马铃薯，切块，用超纯水煮沸30min，用多层纱布过滤，然后加入葡萄糖20g，琼脂15g，再加水补至1L；将配好的固体培养基在121℃下灭菌20min后，备用。本专利技术所述的曲霉菌Aspergillussp.MBL1612，其固体培养特征为：在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上的菌落形态为：28℃培养4-6天菌落直径为30mm-50mm，培养至7-10天能铺满整个平板，菌落生长3-4天时颜色为白色，菌落中心初显致密，外围分散疏松，绒毛状；7-10天时生长至整个平板，外围气生菌丝疏松，中心致密；菌落干燥不透明，边缘不平整，背面呈浅黄色。本专利技术还提供了一种利用植物内生真菌制备Aspergillussp.MBL1612提取物的方法，具体包括以下步骤：步骤①、对菌株Aspergillussp.MBL1612进行液体培养：将菌株接种到装有液体培养基的锥形瓶中，置于恒温震荡培养箱中以180r/min，28℃培养7d，抽滤，得到培养后的内生真菌菌丝体以及培养液，备用；步骤②、菌丝体加95％乙醇超声提取30min，提取液减压浓缩至无醇味后倒入培养液中与之混合，混合液再用乙酸乙酯萃取3次，所得的萃取液减压浓缩至干，即为植物内生真菌Aspergillussp.MBL1612提取物。本专利技术制备Aspergillussp.MBL1612提取物的方法中，步骤①中液体培养基的制备方法为：每1L的液体培养基，取200g新鲜马铃薯，切块，用超纯水煮沸30min，用多层纱布过滤，然后加入蛋白胨120g、葡萄糖30g、NaCl15g，再加水补至1L；将配好的液体培养基在121℃下灭菌20min后，备用。本专利技术还提供了一种植物内生真菌Aspergillussp.MBL1612提取物在天然生物农药中的用途，具体将植物内生真菌Aspergillussp.MBL1612提取物应用于病原真菌立枯丝核菌的抑制，具体应用步骤为：步本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物内生真菌，其特征在于，分类学命名为曲霉菌Aspergillus sp.MBL1612，该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2018798，保藏日期为2018年11月16日，保藏单位地址为：中国，武汉，武汉大学。

【技术特征摘要】
1.一种植物内生真菌，其特征在于，分类学命名为曲霉菌Aspergillussp.MBL1612，该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2018798，保藏日期为2018年11月16日，保藏单位地址为：中国，武汉，武汉大学。2.如权利要求1所述的植物内生真菌，其特征在于，所述曲霉菌Aspergillussp.MBL1612的ITS区碱基序列为：TATAGCGGAGGACTCTGGGTCCACCTCCCACCCGTGTCTATCGTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCGTTTCGACGGCCGCCGGGGAGGCCTCGCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACCCCAACATGAACGCTGTTCTGAAAGTATGCAGTCTGAGTTGATTATCATAATCAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCCCCCGTCCCCTCTCCCGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCCAGCCGACACCCAACTTTATTTCTAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCATAAACCGGGAGGAGAAATCATTACCGAGTGAGGGCCCTCTGGGGTCCAACCCTCCCCCGTGTTCTATCGTACTTGTTGCTTCAGCGGGCCGCCGTTTCGACGGCCGCCGGGGAGGCCTCGCGCCCCGGGCCCGCGCCGCCGAAGACCCACATGAACGCTGTTCTGAAGTATGCATCTGAGTTGATTATCATAATCAGTTAAACTTTCACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAAACGCAGCGAATGCGATAAGTATGTGGAATTGCAGAATTCATGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCGGGTATTCCGGGGGCATGCCTGTCCGACGTCGTGCTGCCTACGTGGTTGGTCTCTCGCCAGACACCAAAAGAAAGAGCACGATTCGTTTTTAATGAAGGAGTTTTATCCT。3.如权利要求1所述的植物内生真菌，其特征在于，所述曲霉菌Aspergillussp.MBL1612的分离方法步骤为：步骤①、将新鲜的凤丹取其根皮，洗净表面的泥土，晾干，置于洁净工作台中；步骤②、表面消毒过程：首先用75％医用酒精浸泡2.5min，再用3.5％的NaClO溶液浸泡2min，随后再用75％医用酒精漂洗30s，最后用无菌水反复浸洗4-6次，吸取浸洗的最后一次无菌水用无菌涂布棒均匀涂布于PDA固体培养基表面，此过程是为验证表面消毒是否完全；若2-3d后PDA固体培养基表面长出菌落，说明表面消毒不完全，反之，则表面消毒完全；步骤③、将已经表面消毒了的凤丹根皮切成小块，宽度为0.2cm×0.2cm，再将其接至PDA固体培养基表面，放于生化培养箱中恒温培养5-7d，温度设置为28℃；若观察到凤丹组织块与培养基交接处有菌丝或孢子生长出，利用尖端挑取法，用牙...

【专利技术属性】
技术研发人员：王举涛，张培良，吴培云，王刚，汪聪聪，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34