一种用于检测人体免疫年龄的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于检测人体免疫年龄的试剂盒及其应用，所述试剂盒中的试剂由CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体组成；所述CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体分别标记有适用于流式细胞仪的四种荧光素；四种所述荧光素的颜色互不相同；所述试剂盒中的试剂，其组分如下：荧光标记的CD3，0.66‑94.34％；荧光标记的CD4，0.66‑94.34％；荧光标记的CD31，0.66‑94.34％；荧光标记的CD45RA，0.66‑94.34％。所述的试剂盒用于检测人体胸腺新近输出细胞数量，并根据所述的胸腺新近输出细胞数量的检测结果确定人的免疫年龄，用以评价人体的免疫能力的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测人体免疫年龄的试剂盒及其应用
本专利技术涉及医药
，特别是涉及一种试剂盒及其应用，所述试剂盒用于检测人体免疫年龄。
技术介绍
胸腺(thymus)为机体的重要淋巴器官，既是人体免疫系统的中枢免疫器官，又是内分泌系统的一个腺体。作为免疫系统的中枢控制器官，其功能与免疫紧密相关，对整个人体免疫系统的建立、完善和功能的发挥都起着重要的作用。随着年龄的增加，胸腺发生着明显的病理学变化，大部分被脂肪组织取代，仅剩下极少的胸腺皮质或髓质。因此，长期以来一直认为，年龄相关的胸腺演化过程伴随着胸腺的无功能。然而最近研究表明：胸腺增生尽管与年龄呈负相关的关系，但其能够持续终生地产生初始的新分化的细胞并将其输送到外周血，见【CML患者胸腺近期输出功能和TCRVβ谱系利用特点】。胸腺输出功能的测定是评价细胞免疫功能重建的一个重要指标，人体胸腺是T细胞发育和成熟的主要部位，骨髓来源的前T细胞会选择性的迁移到胸腺，并在胸腺内发育为成熟T细胞；其在胸腺发育后，重排形成具有多样化T细胞受体(TCR)的成熟T细胞释放到外周，见【胸腺近期输出功能测定在评价细胞免疫功能重建中的应用】。Recentthymicemigrants(胸腺新近输出，RTE)是一类刚从胸腺释放到外周血的T细胞，RTE被释放到外周血后，表面TCR(Tcellreceptor,T细胞抗原受体，是所有T细胞表面的特征性标志)会逐渐发生多样化重组，变成常规T细胞，以便对抗和监视细菌、病毒和癌细胞。尽管RTE会随着年龄的增长而降低，但是其也遵循特定的规律，因此我们可根据RTE的比例反推该RTE水平所对应的年龄范围，这就是免疫年龄。常规T细胞根据标记不同分为辅助T细胞和细胞毒T细胞，后者主要起到杀伤病毒作用，而前者的角色多样，有起主持战斗的司令官，有带领不同病种的团长，所以对抗细菌、真菌、病毒、体内突变的癌细胞等均少不了辅助T细胞。辅助T细胞根据状态不同可大致分为初始T细胞和记忆T细胞，初始T细胞相当于没有见过坏蛋的战士，需要战斗后才能变成有丰富经验的、能记住敌人特征的记忆T细胞。初始T细胞和记忆T细胞也会随着年龄有降低趋势。尽管规律不明显，但需要各自维持一定的水平，若记忆T细胞水平过高，有可能会存在免疫系统功能的耗竭，进一步加剧严重感染或癌症的风险。人胸腺功能测定主要是检测胸腺近期输出T细胞的能力，是研究多种与细胞免疫功能重建或免疫缺陷相关疾病等的重要手段。应用流式细胞仪分析胸腺新近输出细胞的表型，能够确定胸腺功能或者是近期胸腺输出功能，见【WeinbergK,BlazarBR,WagnerJE,AguraE,HillBJ,SmogorzewskaM,KoupRA,BettsMR,CollinsRH,DouekDC(2001)Factorsaffectingthymicfunctionafterallogeneichematopoieticstemcelltransplantation.Blood97:1458–166】。WeinbergK等在有关化疗和造血干细胞移植患者免疫重建的研究中，已经把细胞表面分子CD45RA作为胸腺新近输出细胞的表型标志，研究发现：儿童癌症患者化疗之后，外周血胸腺新近输出细胞中的CD4+T细胞和CD45RA+的数量与患者年龄呈负相关。了解癌症发生的危险因素是生物医学研究的主要目标。一直以来，医学研究的重点一直是体细胞突变的作用，并且把癌症通常在较大年龄发生的原因主要归因于此类突变的逐渐积累。SamPalmer等人在2018年2月份的PNAS上发表了一篇文章，质疑这一观点，提出与年龄相关的免疫系统衰退才是癌症发生的主要原因，并提出了T细胞产生和年龄的免疫学模型，可评估许多癌症类型和感染性疾病的风险概况，表明通过治疗方法逆转T细胞耗竭或恢复T细胞产生，将是有希望的治疗途径。时代在进步，人们对于自身免疫力状况的重视程度也远超从前。工作压力大、生活节奏快、环境恶化等多种因素引起人体免疫力低下，对于年轻职业工作者、儿童、老年人、疾病治愈后等特殊人群，掌握自身免疫力状况，对于重大疾病的预防，十分必要。然而，对于胸腺功能的测定，传统的CT扫描分析胸腺体积是检测胸腺功能的一种解剖学方法，根据胸腺组织的大小可分为5个等级，并形成公认的TI评分，但胸腺体积测定存在一定的局限性，组织界限难以确定、部位无法区分等。因此，胸腺体积测定的方法仅能作为胸腺功能的一个参考指标。目前对于人体免疫年龄的检测，尚无任何一家医学检测机构提出；目前对于人体免疫年龄的判定，并没有一个成熟的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种试剂盒及其应用，所述的试剂盒用于检测人体胸腺释放的胸腺新近输出细胞数量，并根据所述的胸腺新近输出细胞数量的检测结果确定人体的免疫年龄，用以评价人体的免疫能力。本专利技术在现有技术免疫学模型的基础上，根据检测的数百例样本，建立了适合中国人检测的反映胸腺新近输出细胞产生能力的“免疫年龄”模型，该模型可反映该人体的胸腺新近输出细胞产生能力是否与其年龄相符，从而评估其免疫力是否出现提前衰老。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种试剂盒，所述试剂盒中的试剂由CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体组成；所述CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体分别标记有适用于流式细胞仪的四种荧光素；四种所述荧光素的颜色互不相同。本专利技术的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。优选的，前述的试剂盒，其中所述的荧光素选自FITC、APC、APC/Cy7、PerCP/Cy5.5、PerCP、BrilliantViolet510TM、PE/Cy7、PE、Alexa700、BrilliantViolet605TM、Biotin、PE/Cy5、Alexa488、Alexa647、PacificBlueTM、PE/DazzleTM594、BrilliantViolet421TM、BrilliantViolet570TM、Alexa594、BrilliantViolet711TM、BrilliantViolet650TM、APC/FireTM750、BrilliantViolet785TM的任意一种。优选的，前述的试剂盒，其中所述的荧光素选自FITC、PerCP、PE和APC的任意一种。优选的，前述的试剂盒，其中所述的荧光标记的单克隆抗体分别为CD3-FITC、CD4-PerCP、CD31-PE和CD45RA-APC。优选的，前述的试剂盒，其中所述试剂盒中的试剂，以体积百分含量计，其组分如下：荧光标记的CD3，0.66-94.34％；荧光标记的CD4，0.66-94.34％；荧光标记的CD31，0.66-94.34％；荧光标记的CD45RA，0.66-94.34％。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：1)将抗体进行荧光标记；2)按照配方量计量荧光标记的抗体；3)将上述计量的荧光标记的抗体加入避光的试剂瓶内，混合均匀，密封。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种试剂盒在用于检测人体免疫年龄中的应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂由CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体组成；所述CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体分别标记有适用于流式细胞仪的四种荧光素；四种所述荧光素的颜色互不相同。

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂由CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体组成；所述CD3、CD4、CD31和CD45RA单克隆抗体分别标记有适用于流式细胞仪的四种荧光素；四种所述荧光素的颜色互不相同。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光素选自FITC、APC、APC/Cy7、PerCP/Cy5.5、PerCP、BrilliantViolet510TM、PE/Cy7、PE、Alexa700、BrilliantViolet605TM、Biotin、PE/Cy5、Alexa488、Alexa647、PacificBlueTM、PE/DazzleTM594、BrilliantViolet421TM、BrilliantViolet570TM、Alexa594、BrilliantViolet711TM、BrilliantViolet650TM、APC/FireTM750、BrilliantViolet785TM的任意一种。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光素选自FITC、PerCP、PE和APC的任意一种。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂，以体积百分含量计，其组分如下：荧光标记的CD3，0.66-94.34％；荧光标记的CD4，0.66-94.34％；荧光标记的CD31，0.66-94.34％；荧光标记的CD45RA，0.66-94.34％。5.一种试剂盒的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：1)将抗体进行荧光标记；2)按照配方量计量荧光标记的抗体；3)将上述计量的荧光标记的抗体加入避光的试剂瓶内，混合均匀，密封。6.一种权利要求1-5任一项所述的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪万茂，迟妍妍，陈乐芝，倪万根，倪声雷，张鸿，张鸿君，林鹏程，刘维杰，朱阳承，
申请(专利权)人：浙江博真生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33