诱发牛皮癣动物模型及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种诱发牛皮癣动物模型及其用途。具体讲，就是涉及一种通过给药强力霉素(doxycycline)使Peli1(Pellino同系物1)基因过表达形成转基因的诱发牛皮癣动物模型及其用途。依据本发明专利技术的转基因动物模型，通过给药强力霉素使Pelil(Pellino同系物1)基因过表达，确认了牛皮癣患者出现的表型与类似性表现，因此可以有效应用于筛选牛皮癣治疗候选药物等临床研究。另外，通过以抑制基质蛋白与Peli1蛋白正常基质结合的FHA结合基序为靶标源于Peli1FHA结构域的肽，可以有效应用于治疗牛皮癣相关疾病的新药研发。此外，通过确认所述Peli1蛋白的表达水平，可以有效应用于对牛皮癣患者的疾病程度进行评估。

Animal model of psoriasis and its application

The invention relates to an animal model for inducing psoriasis and its application. Specifically, it refers to an animal model of psoriasis induced by overexpression of Peli1 (Pellino homologue 1) gene through doxycycline administration and its application. According to the genetically modified animal model of the present invention, Pelil (Pellino homologue 1) gene is overexpressed by doxycycline administration, which confirms the phenotype and similarity of psoriasis patients, so it can be effectively used for screening candidate drugs for psoriasis treatment and other clinical research. In addition, by targeting FHA binding motifs that inhibit the binding of matrix proteins to normal matrix of Peli1 protein, a peptide derived from the domain of Peli1FHA can be effectively used in the development of new drugs for psoriasis-related diseases. In addition, by confirming the expression level of the Peli1 protein, it can be effectively used to evaluate the disease severity of psoriasis patients.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诱发牛皮癣动物模型及其用途
本专利技术涉及一种诱发牛皮癣动物模型及其用途。具体讲，就是涉及一种通过给药强力霉素(doxycycline)使Peli1(Pellino同系物1)基因过表达形成转基因的诱发牛皮癣动物模型及其用途。
技术介绍
牛皮癣是一种比较具有代表性的慢性皮肤病，发病后大部分都会持续10-20年的时间，即使经过治疗会暂时好转，也必须终生冒着可能复发的风险生活。牛皮癣以边界分明的银白色鳞屑覆盖的红斑性皮肤病变为特征，主要在受到刺激较多部位的胳膊肘、膝盖、臀部、头皮等处发生。另外，牛皮癣通常会伴随多种并发症。其中，包括牛皮癣患者产生的特异性关节炎即牛皮癣关节炎。这种牛皮癣目前还没有能够直接预防发病的方法，预防其恶化就是最佳的方法。各种统计表明，接受牛皮癣诊断的患者数量在全球约占3％，国内约占1-2％。其中，约有三分之一的患者属于几乎不可能治愈的重症牛皮癣患者。特别是，据健康保险审查评估院的资料显示，2013年一年时间国内就有163936人因患牛皮癣而接受治疗。虽然目前尚未准确查明牛皮癣的病因，但是最近的研究表明，皮肤上的免疫细胞即T细胞的活性增加之后，其结果导致T细胞分泌的细胞因子(cytokine)刺激表皮細胞引起表皮細胞过度繁殖和炎症，因此免疫异常与基因变异成为现在主要的研究领域。此外，研究证明，环境因素、药物、持续性皮肤刺激、皮肤干燥、上呼吸道炎症、精神压力等也会引发牛皮癣或者使之恶化。目前，用于牛皮癣治疗的方法有很多，为了寻求更加有效的治疗方法，研究人员正在尝试各种方法，包括：将药物直接涂抹在皮肤上的局部治疗、利用光线的光疗、服用免疫抑制剂或者类固醇制剂药物的全身治疗、以及将这些治疗方法根据患者的情况综合运用而实施综合治疗等多种方法，一般根据牛皮癣的严重程度、活性度、病变的形态与状态、发生部位等因素确定治疗方法。同时，患者的年龄、治疗接近可能性(approachpossibility)与精神状态等也是非常重要的因素。在症状较轻的情况下，开始大多采用涂药的方式进行治疗。如果属于重症情况，一般就同时辅以光疗或者服药的方法进行治疗。另外，最近正在将通过多项研究开发的生物制剂用于临床测试验证其稳定性。实际上，也可以将生物制剂对患者使用。但是，现有治疗方法大部分都只能够缓解病情，而不能够从根本上进行彻底治疗。特别是，目前还没有针对牛皮癣患者的定制型疗法或靶向疗法。因此，有必要针对牛皮癣实施有效的诊断及治疗，为了开发用于牛皮癣的机理研究与治疗方法研究的生物样本，就需要合适的动物模型。虽然这方面的研究正在积极开展(韩国公开专利10-2010-0021561),但是目前尚处于不成熟的阶段。专利技术的详细说明技术问题本专利技术就是为解决上述问题而研发的，本专利技术人不仅确认能够将通过给药强力霉素使Peli1基因过表达形成转基因的小鼠用作治疗重症牛皮癣的动物模型，而且确认Peli1蛋白的过表达可以会诱发牛皮癣，因此Peli1蛋白表达或活性抑制剂可用于牛皮癣的预防、改善、抑制或治疗，以基质蛋白的FHA结合基序(motive)为靶标源于Peli1FHA结构域的肽会妨碍Peli1蛋白的正常基质结合，由此确认可以将其用作新的治疗剂。在此基础上，完成了本专利技术。因此，本专利技术的一个目的在于，提供一种使Peli1(Pellino同系物1)基因过表达形成转基因的诱发牛皮癣动物模型及诱发所述牛皮癣动物模型的制作方法。本专利技术的另一个目的在于，提供一种利用所述动物模型筛选牛皮癣治疗剂的方法。本专利技术的另一个目的在于，由于利用最常用处方牛皮癣全身治疗剂即免疫抑制剂或者类固醇制剂可以有效治疗由Peli1蛋白过表达诱发的牛皮癣，因此可以提供一种将Peli1用于牛皮癣治疗剂开发治疗靶标的方法。本专利技术的另一个目的在于，提供一种由从序列号5至序列号11形成的组中选择的任意一个氨基酸序列构成的肽及以所述肽为有效成分的牛皮癣预防或治疗用药物组合物。本专利技术的另一个目的在于，提供一种以细胞渗透性肽与由从序列号5至序列号11形成的组中选择的任意一个氨基酸序列构成的肽连接为特征的Peli1结合活性抑制肽和以所述Peli1结合活性抑制肽为有效成分的牛皮癣预防或治疗用药物组合物。本专利技术的另一个目的在于，提供一种包含用于测定Peli1蛋白表达水平的制剂的牛皮癣诊断用组合物。但是，本专利技术所要解决的技术问题并非仅限定于以上提供的课题，本领域的技术人员可以通过以下说明内容对尚未提到的其它课题有一个明确的了解。解决问题方法为了实现上述目的，本专利技术提供一种使Peli1(Pellino同系物1)基因过表达形成转基因的诱发牛皮癣动物模型。作为本专利技术的一个实现例，所述Peli1基因会随着强力霉素的给药而进行过表达。作为本专利技术的另一实现例，所述Peli1基因由序列号1的碱基序列构成。另外，本专利技术提供一种包括以下步骤的诱发牛皮癣动物模型制作方法：(a)将包含Peli1(Pellino同系物1)基因的表达载体引入宿主动物受精卵的步骤；(b)使所述引入的受精卵在代母的子宫内着床、分娩，获得第1代后代动物的步骤；(c)让所述获得的第1代后代动物与rtTA(反向四环素反式激活因子)模型动物交配获得第2代后代动物的步骤。另外，本专利技术提供一种包括以下步骤的牛皮癣治疗剂筛选方法：a)将所述动物模型用候选物质处理的步骤；b)将用所述候选物质处理的动物模型进行饲养，并确认预后的步骤。另外，本专利技术提供一种以Peli1(Pellino同系物1)蛋白表达或活性抑制剂为有效成分的牛皮癣预防或治疗用药物组合物。作为本专利技术的一个实现例，所述Peli1蛋白可以用由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸编码。作为本专利技术的另一实现例，所述Peli1蛋白由序列号2的氨基酸序列构成。作为本专利技术的另一实现例，所述Peli1蛋白的表达抑制剂可以是从由与Peli1基因的mRNA互补结合的反义核苷酸、小干扰RNA(shortinterferingRNA)、短发夹RNA(ShorthairpinRNA)及核酶(ribozyme)构成的组中选择的任意一种。作为本专利技术的另一实现例，所述Peli1蛋白的活性抑制剂可以是从由与所述Peli1蛋白互补结合的化合物、肽、肽模拟物、基质类似物、适体及抗体构成的组中选择的任意一种。另外，本专利技术提供一种由从序列号5至序列号11形成的组中选择的任意一个氨基酸序列构成的肽。作为本专利技术的一个实现例，所述肽能够抑制Peli1蛋白与基质蛋白之间的结合。另外，本专利技术提供一种以细胞渗透性肽与由从序列号5至序列号11形成的组中选择的任意一个氨基酸序列构成的肽连接为特征的Peli1结合活性抑制肽。作为本专利技术的另一实现例，所述Peli1结合活性抑制肽通过GS连接子连接。作为本专利技术的另一实现例，所述细胞渗透性肽可以是从由聚精氨酸(Polyarginines)、Tat49-57、穿透素(Penetratin)、Pep-1、转运蛋白(Transportan)、NLS(核定位序列(Nuclearlocalizationsequence))及HP4构成的组中选择的任意一种。另外，本专利技术提供一种以所述肽或Peli1结合活性抑制肽为有效成分的牛皮癣预防或治疗用药物组合物。另外，本专利技术提供一种包括向个体给药所述药物组合物步骤的牛皮癣治疗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱发牛皮癣动物模型，其特征在于：使Peli1(Pellino同系物1)基因过表达形成转基因。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.05 KR 10-2016-0084594;2017.06.29 KR 10-2011.一种诱发牛皮癣动物模型，其特征在于：使Peli1(Pellino同系物1)基因过表达形成转基因。2.根据权利要求项1所述的诱发牛皮癣动物模型，其特征在于：所述Peli1基因随着强力霉素的给药而过表达。3.根据权利要求项1所述的诱发牛皮癣动物模型，其特征在于：所述Peli1基因由序列号1的碱基序列构成。4.一种诱发牛皮癣动物模型制作方法，其特征在于：包括以下步骤：(a)将包含Peli1(Pellino同系物1)基因的表达载体引入宿主动物受精卵内的步骤；(b)使所述引入的受精卵在代母的子宫内着床、分娩，获得第1代后代动物的步骤；(c)让所述获得的第1代后代动物与rtTA(反向四环素反式激活因子)模型动物交配获得第2代后代动物的步骤。5.一种牛皮癣治疗剂的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：a)将所述权利要求项1所述的动物模型用候选物质处理的步骤；b)将用所述候选物质处理的动物模型进行饲养，并确认预后的步骤。6.一种牛皮癣预防或治疗用药物组合物，其特征在于：以Peli1(Pellino同系物1)蛋白表达或活性抑制剂为有效成分。7.根据权利要求项6所述的药物组合物，其特征在于：所述Peli1蛋白用由序列号1的碱基序列构成的多核苷酸编码。8.根据权利要求项6所述的药物组合物，其特征在于：所述Peli1蛋白由序列号2的氨基酸序列构成。9.根据权利要求项6所述的药物组合物，其特征在于：所述Peli1蛋白表达抑制剂可以从由与Peli1基因的mRNA互补结合的反义核苷酸、小干扰RNA(shortinterferingRNA)、短发夹RNA(ShorthairpinRNA)及核酶(ribozyme)构成的组中选择任意一种。10.根据权利要求项6所述的药物组合物，其特征在于：所述Peli1蛋白活性抑制剂可以从由与...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昌雨，高贤贞，金修贤，裵叙允，
申请(专利权)人：成均馆大学校产学协力团，财团法人峩山社会福祉财团，
类型：发明
国别省市：韩国,KR