肺癌诊断用蛋白芯片及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种肺癌诊断用的蛋白芯片及试剂盒。该肺癌诊断用蛋白芯片包括固相支持物及包被于所述固相支持物表面的抗原；所述抗原包括如下九种抗原片段：P53抗原片段、CTAG1B抗原片段、SOX2抗原片段、S100A10抗原片段、ZIC2抗原片段、ZNF258抗原片段、EIF4G1抗原片段、PRC1抗原片段及HNRNPA1抗原片段。该肺癌诊断用蛋白芯片及试剂盒创造性的选择出在肺癌早期发生过程中显著表达且能够引起免疫系统产生相关抗体的抗原，并且这些抗原在非癌症的良性病变中不表达或者表达很低，通过对筛选的抗原片段进行组合使用，利用蛋白芯片技术将抗原片段包被于固相支持物的表面，以检测人体血清中肿瘤相关的自身抗体，鉴别早期肺癌和肺部良性结节，具有较高的敏感性和特异性。

Protein chip and kit for lung cancer diagnosis

The invention relates to a protein chip and a kit for lung cancer diagnosis. The protein chip for lung cancer diagnosis includes a solid-phase supporter and an antigen coated on the surface of the solid-phase supporter. The antigen comprises nine antigen fragments: P53 antigen fragment, CTAG1B antigen fragment, SOX2 antigen fragment, S100A10 antigen fragment, ZIC2 antigen fragment, ZNF258 antigen fragment, EIF4G1 antigen fragment, PRC1 Antigen Fragment and HNRNPA1 antigen fragment. The protein chip and kit for diagnosis of lung cancer creatively selected antigens that were significantly expressed in the early stage of lung cancer and could cause the immune system to produce related antibodies, and these antigens were not expressed or expressed very low in benign non-cancer lesions. By combining the selected antigen fragments, the antigen fragments were coated in solid-phase branches by protein chip technology. The surface of the holder is sensitive and specific to detect tumor-related autoantibodies in human serum and to differentiate early lung cancer from benign pulmonary nodules.

【技术实现步骤摘要】
肺癌诊断用蛋白芯片及试剂盒
本专利技术涉及癌症诊断和治疗领域，尤其是涉及一种肺癌诊断用蛋白芯片及试剂盒。
技术介绍
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高。目前对肺癌的诊断主要依靠影像学(如螺旋CT)和细胞学。螺旋CT可以较为敏感地探测3nm以上的肺部病变，但确诊肺癌，特别是鉴别早期肺癌和肺部良性结节，假阳性率高。其他检测技术，如痰细胞学、细针穿刺细胞学、荧光支纤镜等技术，均存在假阳性率高、侵入性及检测费用高等缺点，无法用于人群筛查。而传统的ELISA检测血清抗体、速度慢、效率低，需要血清样本量大具体检测起来非常不便。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种使用方便，并能够有效地鉴别肺癌和肺部良性病变的肺癌诊断用的蛋白芯片及试剂盒。一种肺癌诊断用蛋白芯片，包括固相支持物及包被于所述固相支持物表面的抗原；所述抗原包括如下九种抗原片段：P53抗原片段、CTAG1B抗原片段、SOX2抗原片段、S100A10抗原片段、ZIC2抗原片段、ZNF258抗原片段、EIF4G1抗原片段、PRC1抗原片段及HNRNPA1抗原片段。在其中一个实施例中，所述P53抗原片段的序列包括SEQIDNo.1所示的抗原特征氨基酸序列；所述CTAG1B抗原片段的序列包括SEQIDNo.2所示的抗原特征氨基酸序列；所述SOX2抗原片段的序列包括SEQIDNo.3所示的抗原特征氨基酸序列；所述S100A10抗原片段的序列包括SEQIDNo.4所示的抗原特征氨基酸序列；所述ZIC2抗原片段的序列包括SEQIDNo.5所示的抗原特征氨基酸序列；所述ZNF258抗原片段的序列包括SEQIDNo.6所示的抗原特征氨基酸序列；所述EIF4G1抗原片段的序列包括SEQIDNo.7所示的抗原特征氨基酸序列；所述PRC1抗原片段的序列包括SEQIDNo.8所示的抗原特征氨基酸序列；所述HNRNPA1抗原片段的序列包括SEQIDNo.9所示的抗原特征氨基酸序列。在其中一个实施例中，所述抗原片段为重组融合蛋白，还包括位于相应抗原特征氨基酸序列的N端的Myc-Histag以及C端的链霉亲和素。在其中一个实施例中，所述固相支持物为玻片、免疫印迹膜、微孔板或磁性微珠。在其中一个实施例中，所述固相支持物为磁性微珠，所述九种抗原片段分别包被于九种不同颜色的磁性微珠表面。在其中一个实施例中，所述抗原片段为亲和素化的抗原片段，所述固相支持物的表面通过肽键连接生物素化的牛血清白蛋白，所述抗原片段与所述固相支持物之间通过亲和素与生物素化的牛血清白蛋白间接连接。一种肺癌诊断用试剂盒，包括上述任一实施例所述的肺癌诊断用蛋白芯片。在其中一个实施例中，所述肺癌诊断用试剂盒还包括含有荧光物质标记的二抗试剂、标准品试剂和质控参比品试剂。在其中一个实施例中，所述荧光物质标记的二抗试剂是抗人IgGFc-PE抗体和抗人IgMFc-PE抗体。在其中一个实施例中，所述标准品试剂与所述质控参比品试剂均是Anti-Myc嵌合抗体。上述肺癌诊断用蛋白芯片及试剂盒创造性的选择出在肺癌早期发生过程中显著表达且能够引起免疫系统产生相关抗体的抗原，并且这些抗原在非癌症的良性病变中不表达或者表达很低，通过对筛选的抗原片段进行组合使用，利用蛋白芯片技术将抗原片段包被于固相支持物的表面，以检测人体血清中肿瘤相关的自身抗体，鉴别早期肺癌和肺部良性结节。通过这九种抗原的抗原谱，检测血清中的自身抗体含量，来判断被检者是否患肺癌或肺部良性结节，比传统方法(如影像学和细胞学等)诊断肺癌，特别是早期肺癌，阳性率高，敏感性强，而且可以同时检测多个(大于100种)血清自身抗体含量，对样品需求少，能大大提高早期肺癌诊断的敏感性和特异性。附图说明图1为本专利技术一实施方式的肺癌诊断用蛋白芯片检测原理示意图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。请结合图1，一实施方式的肺癌诊断用蛋白芯片，包括固相支持物及包被于固相支持物表面的抗原。在本实施方式中，所述抗原包括至少如下九种抗原片段：P53抗原片段、CTAG1B抗原片段、SOX2抗原片段、S100A10抗原片段、ZIC2抗原片段、ZNF258抗原片段、EIF4G1抗原片段、PRC1抗原片段及HNRNPA1抗原片段。其中，P53抗原片段的序列包括SEQIDNo.1所示的抗原特征氨基酸序列；CTAG1B抗原片段的序列包括SEQIDNo.2所示的抗原特征氨基酸序列；SOX2抗原片段的序列包括SEQIDNo.3所示的抗原特征氨基酸序列；S100A10抗原片段的序列包括SEQIDNo.4所示的抗原特征氨基酸序列；ZIC2抗原片段的序列包括SEQIDNo.5所示的抗原特征氨基酸序列；ZNF258抗原片段的序列包括SEQIDNo.6所示的抗原特征氨基酸序列；EIF4G1抗原片段的序列包括SEQIDNo.7所示的抗原特征氨基酸序列；PRC1抗原片段的序列包括SEQIDNo.8所示的抗原特征氨基酸序列；HNRNPA1抗原片段的序列包括SEQIDNo.9所示的抗原特征氨基酸序列。各抗原片段可以是含有相应抗原特征氨基酸序列的提纯的天然蛋白、或是重组表达的蛋白，或者重组表达的含有相应抗原特征氨基酸序列的重组融合蛋白，或者是直接合成的含相应抗原特征氨基酸序列的多肽等。优选的，在本实施方式中，抗原片段为含有相应抗原特征氨基酸序列的重组融合蛋白，包括在相应的氨基酸序列的N端连接的Myc-Histag片段和在C端连接的链霉亲和素(SA)片段，整个抗原片段的结构为Myc-Histag-肺癌特征抗原-SA。整个抗原片段的DNA片段的密码子为细菌的密码子，以适合于在细菌中表达。其中，Myc的氨基酸序列为EQKLISEEDL，具体如SEQIDNo.10所示；Myc-Histag的DNA序列为GAGCAGAAACTCATCTCTGAAGAGGATCTGCATCACCATCACCATCAC，具体如SEQIDNo.11所示，其中，Histag的DNA序列为CATCACCATCACCATCAC。本实施方式所述的各抗原片段可采用但不限于下述方法制备得到：步骤一：合成肺癌特征抗原的DNA片段，并在5’端连接Myc和Histag对应的DNA片段，得到Myc-Histag-肺癌特征抗原的重组融合DNA片段；步骤二：合成链霉亲和素对应的DNA片段，并将所述链霉亲和素对应的DNA片段连接在Myc-Histag-肺癌特征抗原的重组融合DNA片段的3’端，得到Myc-Histag-肺癌特征抗原-SA的目的重组融合DNA片段；步骤三：将所述目的重组融合DNA片段克隆入重组表达载体中，转化细菌；步骤四：挑取阳性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肺癌诊断用蛋白芯片，其特征在于，包括固相支持物及包被于所述固相支持物表面的抗原；所述抗原包括如下九种抗原片段：P53抗原片段、CTAG1B抗原片段、SOX2抗原片段、S100A10抗原片段、ZIC2抗原片段、ZNF258抗原片段、EIF4G1抗原片段、PRC1抗原片段及HNRNPA1抗原片段。

【技术特征摘要】
1.一种肺癌诊断用蛋白芯片，其特征在于，包括固相支持物及包被于所述固相支持物表面的抗原；所述抗原包括如下九种抗原片段：P53抗原片段、CTAG1B抗原片段、SOX2抗原片段、S100A10抗原片段、ZIC2抗原片段、ZNF258抗原片段、EIF4G1抗原片段、PRC1抗原片段及HNRNPA1抗原片段。2.如权利要求1所述的肺癌诊断用蛋白芯片，其特征在于，所述P53抗原片段的序列包括SEQIDNo.1所示的抗原特征氨基酸序列；所述CTAG1B抗原片段的序列包括SEQIDNo.2所示的抗原特征氨基酸序列；所述SOX2抗原片段的序列包括SEQIDNo.3所示的抗原特征氨基酸序列；所述S100A10抗原片段的序列包括SEQIDNo.4所示的抗原特征氨基酸序列；所述ZIC2抗原片段的序列包括SEQIDNo.5所示的抗原特征氨基酸序列；所述ZNF258抗原片段的序列包括SEQIDNo.6所示的抗原特征氨基酸序列；所述EIF4G1抗原片段的序列包括SEQIDNo.7所示的抗原特征氨基酸序列；所述PRC1抗原片段的序列包括SEQIDNo.8所示的抗原特征氨基酸序列；所述HNRNPA1抗原片段的序列包括SEQIDNo.9所示的抗原特征氨基酸序列。3.如权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡海，许勇，赵晓龙，林当，周海鹰，黄静，黄璐，潘敬东，
申请(专利权)人：广州市丹蓝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44