一种替度鲁肽的合成方法技术

本发明专利技术公开了一种替度鲁肽的合成方法，属于多肽药物合成领域。该方法以替度鲁肽序列的第2‑3位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第5‑6位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第22‑23位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第27‑28位氨基酸作为伪脯二肽；或者以替度鲁肽序列的第29‑30位氨基酸作为伪脯二肽；再按顺序依次固相合成替度鲁肽序列的其他位点氨基酸，合成全保护替度鲁肽，经裂解沉淀，得到替度鲁肽。本发明专利技术方法提高了粗肽纯度，极大降低了物料成本和纯化成本，利于进行工业化放大生产。

A Method for the Synthesis of Tidolu Peptide

The invention discloses a synthesis method of tidulu peptide, which belongs to the field of polypeptide drug synthesis. In this method, the second 3 amino acid of the Tidulu peptide sequence is used as pseudoproline dipeptide, or the fifth 6 amino acid of the Tidulu peptide sequence is used as pseudoproline dipeptide, or the 22nd 23 amino acid of the Tidulu peptide sequence is used as pseudoproline dipeptide, or the 27th 28th amino acid of the Tidulu peptide sequence is used as pseudoproline dipeptide, or the 29th 30th amino acid of the Tidulu peptide sequence is used as pseudoproline dipeptide. Pseudo-proline dipeptide was synthesized by solid-phase synthesis of other amino acids of Tidolu peptide sequence in order to synthesize fully protected Tidolu peptide. Tidolu peptide was obtained by pyrolysis and precipitation. The method of the invention improves the purity of crude peptide, greatly reduces the cost of material and purification, and is conducive to industrial scale-up production.

【技术实现步骤摘要】
一种替度鲁肽的合成方法
本专利技术涉及一种多肽药物合成领域，特别涉及GLP-2受体激动素一种替度鲁肽的合成方法。
技术介绍
替度鲁肽，英文名：teduglutide。肽序列为：His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-lle-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-lle-Asn-Trp-Leu-lle-Gln-Thr-Lys-lle-Thr-Asp-OH；是一种胰高血糖素样肽2(GLP-2)类似物，一种天然生成的激素，可减少胃排空和分泌，并调节小肠内膜细胞的生长、增殖和修复。替度鲁肽于2001年被定性为孤儿药。在临床上用于治疗成人短肠综合征，需求应用前景广泛。在替度鲁肽的现有合成方法中，主要是采用纯固相顺序偶联的方法。如中国公开专利文献CN104072605A公开了一种替度鲁肽的制备方法，其同时包含了三种合成方式，一是先合成1-9位、10-18位、19-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得；二是先合成1-4位、5-12位、13-20位、21-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得；三是先合成1-4位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以替度鲁肽序列的第2‑3位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc‑Ile‑Thr(pro‑me‑me)‑OH；或者以替度鲁肽序列的第5‑6位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc‑Gln‑Thr(pro‑me‑me)‑OH；或者以替度鲁肽序列的第22‑23位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc‑Asn‑Thr(pro‑me‑me)‑OH；或者以替度鲁肽序列的第27‑28位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc‑Phe‑Ser(pro‑me‑me)‑OH；或者以替度鲁肽序列的第29‑30位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc‑Gly‑Ser(pro‑me‑me)‑OH；(2)按顺序依次...

【技术特征摘要】
1.一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以替度鲁肽序列的第2-3位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第5-6位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第22-23位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Asn-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第27-28位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第29-30位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH；(2)按顺序依次固相合成替度鲁肽序列的其他位点氨基酸，合成全保护替度鲁肽，经裂解沉淀，得到替度鲁肽。2.根据权利要求1所述的一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，裂解采用的裂解试剂为：TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2。3.根据权利要求1所述的一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，其具体步骤如下：(1)Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；取Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应0.5-1.5h，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；(2)裂解配制裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀，干燥即得替度鲁肽粗肽。4.根据权利要求1所述的一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，其具体步骤如下：(1)Fmoc-Gln(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备：取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；灿干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；(2)裂解配制裂解试剂为TFA∶PhSMe∶EDT∶TIS∶H2O∶Phenol＝80∶5∶5∶5∶3∶2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥即得替度鲁肽粗肽。5.根据权利要求1所述的一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，其具体步骤如下：(1)Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂0.4-0.6h；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入的DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1∶1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵呈青，谷海涛，施国强，孙美禄，
申请(专利权)人：江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32