一种多肽的修饰方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种多肽的修饰方法及应用，所述方法包括以下步骤：(1)向多肽的N端引入X，获得X‑多肽；(2)将所述X氧化为醛基；(3)加入还原剂，将步骤(2)获得的氧化产物与PEG进行共价偶联，得到PEG修饰的多肽；其中，所述X为苏氨酸或丝氨酸。本发明专利技术向多肽的N端引入一个苏氨酸或一个丝氨酸，并采用高度特异性的氧化方法将多肽N端的临位氨基醇结构衍生为醛基，与PEG共价偶联后得到成分单一的PEG修饰多肽，方法通用性强，应用范围广，修饰后的多肽分离方法简便，提高了多肽的稳定性和循环半衰期。

A Modification Method of Polypeptide and Its Application

The present invention provides a polypeptide modification method and its application. The method comprises the following steps: (1) introducing X into the N terminal of the polypeptide to obtain X -polypeptide; (2) oxidizing the X to aldehyde group; (3) adding reductant to covalently couple the oxidized product obtained in step (2) with PEG to obtain PEG-modified polypeptide, in which X is threonine or serine. The method introduces a threonine or a serine to the N-terminal of a polypeptide, and derives the N-terminal amino alcohol structure of the polypeptide into an aldehyde group by a highly specific oxidation method. After covalently coupling with PEG, a single PEG modified polypeptide is obtained. The method has strong versatility and wide application range. The modified polypeptide separation method is simple, and the stability and cyclic half-life of the polypeptide are improved.

【技术实现步骤摘要】
一种多肽的修饰方法及应用
本专利技术属于医药
，涉及一种多肽的修饰方法及应用，尤其涉及一种GLP-1受体激动剂类似物及其制备方法和应用。
技术介绍
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是肠道L细胞分泌的葡萄糖依赖性降血糖多肽激素，具有阻止胰腺细胞退化、刺激胰腺细胞增殖和分化、促进胰岛素生成等作用，是已发现的促胰岛素分泌作用最强的肠肽类激素。GLP-1可通过促进胰岛β细胞的再生和修复、增加胰岛β细胞的数量等多种机制改善II型糖尿病患者的血糖情况。此外，GLP-1还能减慢胃排空速度，通过作用下丘脑抑制食欲，降低食物摄入量从而控制血糖。GLP-1在II型糖尿病治疗方面具有良好的应用前景，成为近年来糖尿病治疗领域的研究热点。GLP-1由30个氨基酸组成，包括2种生物活性形式：GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺，这两者仅有一个氨基酸序列不同，GLP-1约80％的循环活性来源于GLP-1(7-36)酰胺。GLP-1的分子量较小，仅3kDa，容易被肾小球过滤清除；同时，GLP-1氮端的His-Ala序列是二肽基肽酶IV的识别位点，极易被体内的二肽基肽酶IV降解，酶解后残留片段的活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽的修饰方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)向多肽的N端引入X，获得X‑多肽；(2)将所述X氧化为醛基；(3)加入还原剂，将步骤(2)获得的氧化产物与PEG进行共价偶联，得到PEG修饰的多肽；其中，所述X为苏氨酸或丝氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种多肽的修饰方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)向多肽的N端引入X，获得X-多肽；(2)将所述X氧化为醛基；(3)加入还原剂，将步骤(2)获得的氧化产物与PEG进行共价偶联，得到PEG修饰的多肽；其中，所述X为苏氨酸或丝氨酸。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述引入的方法包括固相合成法或生物表达法；优选地，所述固相合成法为Fmoc法；优选地，所述生物表达法包括将构建的X-多肽表达载体转入宿主菌，诱导收集菌体，裂解纯化后得到X-多肽。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述氧化采用氧化剂进行；优选地，所述氧化剂包括高碘酸盐，优选为高碘酸钠；优选地，所述氧化剂与所述X-多肽的摩尔比为(1-3):1；优选地，步骤(2)所述氧化的温度为3-6℃，优选为3-4℃；优选地，步骤(2)所述氧化的时间为20-40min，优选为30-35min。4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述还原剂包括硼氢化钠、醋酸硼氢化钠或氰基硼氢化钠中的任意一种或至少两种的组合，优选为氰基硼氢化钠；优选地，步骤(3)所述PEG为甲氧基聚乙二醇；优选地，步骤(3)所述甲氧基聚乙二醇的端基包括氨基、氧氨基或酰肼中的任意一种；优选地，步骤(3)所述PEG与所述氧化产物的摩尔比为(4-6):1；优选地，步骤(3)所述共价偶联的温度为3-6℃，优选为3-4℃；优选地，步骤(3)所述共价偶联的时间为1-3h；优选地，步骤(3)所述共价偶联的pH为4-5，优选为4-4.5。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)在多肽的N端通过固相合成法或生物表达法引入X，获得X-多肽；(2)按氧化剂与X-多肽的摩...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈永恒，周展，陈主初，李俊，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南,43