一种微量蛋白质样品浓缩的方法技术

本发明专利技术公开了一种微量蛋白质样品浓缩的方法，在生物微量蛋白样品中加入Laemmli加样缓冲液和二硫苏糖醇进行加热变性，能够使得生物微量蛋白样品中的二硫键还原，打开了蛋白结构。然后将尿素加入样品中，再将样品混合物加入超滤管中，超滤浓缩，并将浓缩处理的蛋白样品SDS‑PAGE电泳、胶内酶解，即得质谱样品，再将质谱样品进行质谱鉴定分析。本发明专利技术能够对超低浓度蛋白样品进行检测，不受样品的体积或蛋白质浓度的限制，整个处理操作流程方便简洁，样品损失少、蛋白产物得率高、显著提高质谱对微量蛋白和多肽的鉴定率。

A Method for Concentrating Microprotein Samples

The invention discloses a method for concentrating microprotein samples. The microprotein samples are heated and denatured by adding Laemmli additive buffer and dithiothreitol, which can reduce the disulfide bond in the microprotein samples and open the protein structure. Then urea was added to the sample, then the mixture of the sample was added to the ultrafiltration tube to concentrate. SDS PAGE electrophoresis and in-gel enzymatic hydrolysis were used to obtain the mass spectrometric samples. The mass spectrometric samples were then identified and analyzed by mass spectrometry. The method can detect ultra-low concentration protein samples, and is not limited by the volume or protein concentration of the samples. The whole processing process is convenient and simple, with less sample loss, high yield of protein products, and significantly improves the identification rate of micro-proteins and polypeptides by mass spectrometry.

【技术实现步骤摘要】
一种微量蛋白质样品浓缩的方法
本专利技术涉及质谱样品制备领域，尤其针对微量蛋白质样品浓缩的方法。
技术介绍
样品制备仍是制约质谱分析的最大瓶颈问题之一，样品制备的一致性和可重现性是决定可重复和精确的质谱分析结果成败的关键所在。当样品的蛋白质浓度非常低时(<10微克/毫升)，例如，环境样品，用于研究蛋白质分泌物的培养基，珍贵的生物体液样本、大体积洗脱后的免疫共沉淀富集样本等，其中蛋白质的含量很低，这对质谱样品的前处理提出了很大的挑战。通常为了能得到足够量的蛋白，需要一种可以对样品进行浓缩、富集并与质谱鉴定兼容的方法策略。蛋白质浓缩技术属于生物大分子的浓缩技术，目的是利用物理或化学的方法，除去蛋白质溶液中的水分、离子和其它小分子物质，使单位体积内的蛋白质浓度大幅度提高。蛋白质样品经过一系列的分离提取和层析会导致样品的稀释，而许多分析和研究都需要高浓度或高纯度的样品，所以蛋白质样品的浓缩至关重要。蛋白质浓缩技术主要有透析袋浓缩法、超滤膜浓缩法、冷冻干燥浓缩法、吹干浓缩法、化学沉淀法，凝胶浓缩法等。当样品浓度足够大时，以上方法都可以取得满意效果。然而当样品浓度极低时，上述样品浓缩处理方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微量蛋白质样品浓缩的方法，其特征在于，包括以下步骤：a)向生物微量蛋白样品中Laemmli加样缓冲液和二硫苏糖醇，在90～100℃下反应5min；b)将加入步骤a)得到的混合物冷却至室温后加入尿素粉末，溶解；c)将步骤b)得到的溶解物离心浓缩，并用尿素进行冲洗，得到浓缩物；d)将步骤c)得到的浓缩物进行SDS‑PAGE电泳，得到蛋白质凝胶；e)将步骤d)得到的蛋白质凝胶进行胶内酶解，得到质谱样品；f)将步骤e)得到的质谱样品进行质谱分析，并通过数据库检索得到生物样品的多肽以及蛋白鉴定信息。

【技术特征摘要】
1.一种微量蛋白质样品浓缩的方法，其特征在于，包括以下步骤：a)向生物微量蛋白样品中Laemmli加样缓冲液和二硫苏糖醇，在90～100℃下反应5min；b)将加入步骤a)得到的混合物冷却至室温后加入尿素粉末，溶解；c)将步骤b)得到的溶解物离心浓缩，并用尿素进行冲洗，得到浓缩物；d)将步骤c)得到的浓缩物进行SDS-PAGE电泳，得到蛋白质凝胶；e)将步骤d)得到的蛋白质凝胶进行胶内酶解，得到质谱样品；f)将步骤e)得到的质谱样品进行质谱分析，并通过数据库检索得到生物样品的多肽以及蛋白鉴定信息。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物微量蛋白样品与...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆天聪，
申请(专利权)人：北京蛋白世界生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11