本发明专利技术提供了一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的绿原酸与抗CD20单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。本发明专利技术绿原酸与抗CD20单克隆抗体的联合使用可以发挥协同增效的作用，克服单用抗CD20抗体后产生的耐药性，缓解单用抗CD20抗体后产生的机体损伤，有效降低抗CD20抗体的毒副作用，临床应用前景良好。
A Combination Drug for B Lymphocyte Related Diseases
The invention provides a combined drug for treating B lymphocyte related diseases, which contains chlorogenic acid and anti-CD20 monoclonal antibodies administered simultaneously or separately with the same or different specifications of unit preparations, as well as pharmaceutically acceptable carriers. The combined use of chlorogenic acid and anti-CD20 monoclonal antibody can play a synergistic role, overcome the drug resistance caused by anti-CD20 antibody alone, alleviate the body damage caused by anti-CD20 antibody alone, effectively reduce the toxicity and side effects of anti-CD20 antibody, and has a good clinical application prospect.
【技术实现步骤摘要】
一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物
本专利技术涉及一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物。
技术介绍
B淋巴细胞，是由骨髓中的造血干细胞分化发育而成，其过分增值或过分抑制均会导致机体相关功能的紊乱，进而引起疾病。与B淋巴细胞相关性较高的疾病主要有B淋巴细胞瘤，淋巴细胞白血病等恶性肿瘤，以及类风湿性关节炎等自身免疫系统相关疾病。CD20是B淋巴细胞表面特有的标识，仅表达于前B淋巴细胞、未成熟B淋巴细胞、成熟B淋巴细胞、激活B淋巴细胞中，在浆细胞、淋巴多能干细胞及其他组织中均无表达，另外，超过95％的B淋巴细胞瘤也都有CD20的表达。因此，CD20在B淋巴细胞相关疾病的治疗中，是药品研发和临床治疗的重要靶点，抗CD20单抗也被用于上述B淋巴细胞相关疾病的治疗中。大量的基础和临床研究证实，抗CD20抗体往往因为其杀伤力不足、容易产生耐药等特点，在治疗CD20阳性B淋巴细胞相关疾病上表现出治疗缺陷。为增加疗效，临床常用抗CD20抗体与化疗药物联合治疗，但由于化疗药物存在较大的毒副作用，故对机体损伤较大。因此，构建既能增强抗CD20抗体的药效，又不会对机体造成较大伤害的联合用药方式，是此类疾病临床研究中迫切需要解决的问题。绿原酸是一种具有强生物活性的天然物质，目前的临床试验已经证实，绿原酸是一种安全、无毒、广谱的抗肿瘤药物，可以用于包括肺癌、脑胶质瘤、肝细胞癌、淋巴细胞肿瘤等多种恶性肿瘤的治疗，同时机理研究显示，绿原酸主要通过调节机体T细胞介导的细胞免疫过程，发挥抗肿瘤作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，以提高抗CD20抗体单独用药的疗效，及降低抗CD20抗体的毒副作用。本专利技术提供了一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的绿原酸和抗CD20单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。其中，所述抗CD20单克隆抗体包括利妥昔单抗、奥法木单抗。其中，绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为300:1-1.5:1；摩尔比为100:0.025-100:0.6。其中，绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为40:3。本专利技术还提供了前述的联合用药物在制备治疗B淋巴细胞相关疾病中的用途。其中，所述B淋巴细胞相关疾病为B淋巴细胞瘤、淋巴细胞白血病或类风湿性关节炎。本专利技术还提供了绿原酸和抗CD20单克隆抗体在制备治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物中的用途。本专利技术还提供了绿原酸在制备降低抗CD20单克隆抗体的毒副作用的药物中的用途。其中，所述药物是减弱抗CD20单克隆抗体导致体重变轻的副作用的药物。本专利技术最后提供了绿原酸在制备降低肿瘤对CD20单克隆抗体的耐药性的药物中的用途。本专利技术绿原酸与抗CD20单克隆抗体的联合使用治疗B淋巴细胞相关疾病可以发挥协同增效的作用，克服单用抗CD20抗体后产生的耐药性，缓解单用抗CD20抗体后产生的机体损伤，有效降低抗CD20抗体的毒副作用，将绿原酸与抗CD20单克隆抗体制成联合用药物的疗效优良，毒性小，临床应用前景良好。下面通过具体实施方式对本专利技术做进一步详细说明，但是并不是对本专利技术的限制，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。附图说明图1为不同给药组对Raji细胞凋亡的影响；图2为不同给药组对B淋巴细胞瘤小鼠的体重影响；图3为不同给药组的小鼠B淋巴细胞瘤体积-时间生长曲线；图4为不同给药组的小鼠B淋巴细胞瘤质量；图5为不同给药组在Daudi细胞和Daudi-R细胞上对肿瘤细胞的抑制率；图6为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的关节炎累积评分；图7为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的体重监测结果；图8为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的关节病理切片；图9为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的血清细胞因子检测结果，从左往右依次分别为：血清中TNF-α检测结果、血清中IL-6检测结果。具体实施方式实施例1体外MTT法检测绿原酸联合抗CD20单抗对恶性肿瘤细胞的抑制作用及药物联合作用的评价1、材料药品：利妥昔单抗注射液(美罗华，罗氏)，奥法木单抗(Arzerra，葛兰素史克)绿原酸原料药(99.1％纯度，四川九章生物科技有限公司)细胞株：Raji细胞(人淋巴瘤细胞)，BALL-1细胞(人B淋巴细胞白血病细胞)，Daudi细胞(人B淋巴细胞)2、实验方法2.1单药及联合用药MTT实验分别取对数生长期的细胞Raji细胞、BALL-1细胞和Daudi细胞，胰酶消化计数，1000r/min离心5min并弃上清，RPMI-1640完全培养基调整浓度至2.5×106个/mL，分别接种于3个96孔板中，每个96孔板中留3个孔不加细胞，只加培养基，作为空白对照组，其余每孔加入细胞悬液200μL，在5％CO2、37℃条件培养箱中孵育12h，待细胞完全贴壁后，吸弃原培养基。加入RPMI-1640完全培养基稀释的不同浓度的不同药物并按照表1中的5个不同浓度交叉组合，每个96孔板(一种细胞)中，分别是绿原酸与2种抗CD20单抗的药物组合，同时设置相应的对照组(不加药物)。每组均设置3个复孔，培养48h后每孔加入PBS配制的5mg/mL的MTT溶液20μL，继续孵育4h，小心吸弃上清，每孔加150μLDMSO后置水平摇床上低速振荡10min，充分溶解结晶，490nm波长处测量各孔吸光值(A)。分别计算各加药组的抑制率。表1每种细胞96孔板中设置的不同药物的浓度及组合2.2药物联合作用的评价①根据上述实验结果计算不同药物对不同细胞的抑制率，抑制率计算公式如下：抑制率(IC)＝1-(实验组A-空白对照组A)/(阴性对照组A-空白对照组A)×100％②以同一药物不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图，可得到剂量效应曲线。③根据药物浓度及对应的肿瘤细胞抑制率，采用Logit法IC50计算软件计算半数抑制浓度(IC50值)。④联合用药以公式Q＝E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)计算有无协同作用。其中E(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，Ea和Eb为两药单用时的抑制率，分母(Ea+Eb-Ea×Eb)为期望合并效应，Q为两者比值。Q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，Q值在1.15～20时为协同(++)，Q值＞20为明显协同(+++)，Q值在0.05～0.85时为拮抗，Q值＜0.05为明显拮抗。3、实验结果对上述实验结果按照联合用药指数法进行分析后，算得联合用药的联合用药的Q值，结果如表2、表3所示：试验结果如表表2、表3：表2不同浓度的绿原酸与利妥昔单抗联合作用于Raji细胞、BALL-1细胞和Daudi细胞的联合指数表3不同浓度的绿原酸与奥伐木单抗联合作用于Raji细胞、BALL-1细胞和Daudi细胞的联合指数由表2、表3可以看出：不同浓度绿原酸原料药联合利妥昔单抗或奥伐木单抗作用于不同种CD20+细胞(Raji、BALL-1和Daudi)上，其联合用药的Q值均在1.15至20之间，在部分浓度组合表现出强烈协同作用(Q＞20)。表明绿原酸和抗CD20单抗联合使用在该类细胞上表现为协同作用，可以显著的加强对Raji细胞、BALL-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的绿原酸和抗CD20单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。
【技术特征摘要】
1.一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的绿原酸和抗CD20单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。2.根据权利要求1所述的联合用药物，其特征在于：所述抗CD20单克隆抗体包括利妥昔单抗、奥法木单抗。3.根据权利要求1或2所述的联合用药物，其特征在于：绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为300:1-1.5:1；摩尔比为100:0.025-100:0.6。4.根据权利要求3所述的联合用药物，其特征在于：绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为40:3...
【专利技术属性】
技术研发人员：张洁，杨华蓉，张梦甜，
申请(专利权)人：四川九章生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51
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