【技术实现步骤摘要】
一种人肾小管上皮细胞分离及培养方法
本专利技术属于细胞生物学领域,具体涉及一种人肾小管上皮细胞分离及培养方法。
技术介绍
肾小管上皮细胞对于研究肾小管-间质疾病的发病机制,筛选合适治疗药物,并对该细胞生物学特性和病理生理学机制的充分了解具有科学价值,因此提供良好的人肾小管上皮细胞模型是非常重要的。由于在哺乳类动物肾脏至少有15~20种细胞,因此肾小管上皮细胞培养相对于其它组织细胞的培养相对困难,主要体现在分离纯化同种细胞难度大,传代培养时易呈退行性发育。目前对肾小管上皮细胞的研究多采用培养难度低、准备时间短的细胞株,但细胞株离体时间长,细胞会产生变异而影响实验结果,而原代培养具有与体内状态更相近的优点。本专利技术提供一种相对完善的肾小管上皮细胞分离培养的方法,为研究肾小管上皮细胞缺血、缺氧以及肾脏疾病的发病机制及治疗药物的筛选提供一个良好的实验平台。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种耗时短、高效获得人肾小管上皮细胞的方法。为了解决上述所涉及到的问题,本专利技术采取如下方法获得人肾小管上皮细胞:本专利技术提供一种人肾小管上皮细胞分离及培养方法,包括步骤:(a)含双抗预冷PBS清洗组织标本;(b)剪碎并研磨组织,收集研磨后的组织块;(c)混合酶消化,筛网过滤,收集滤液离心;(d)Percoll分离;(e)完全培养基重悬细胞沉淀,接种于培养瓶中;(f)培养数天后更换混合完全培养基继续培养。可选的组织标本为离体2-4h的新鲜组织;可选的研磨收集组织块的方式为组织块置于重叠的孔径分别为80目和100目的不锈钢筛网上,用注射器内芯在80目筛网上研磨剪碎组织块,无菌 ...
【技术保护点】
1.一种人肾小管上皮细胞分离及培养方法,包括步骤:(a)含双抗预冷PBS清洗组织标本;(b)剪碎并研磨组织,收集研磨后的组织块;(c)混合酶消化,筛网过滤,收集滤液离心;(d)Percoll分离;(e)完全培养基重悬细胞沉淀,接种于培养瓶中;(f)培养数天后更换混合完全培养基继续培养。
【技术特征摘要】
1.一种人肾小管上皮细胞分离及培养方法,包括步骤:(a)含双抗预冷PBS清洗组织标本;(b)剪碎并研磨组织,收集研磨后的组织块;(c)混合酶消化,筛网过滤,收集滤液离心;(d)Percoll分离;(e)完全培养基重悬细胞沉淀,接种于培养瓶中;(f)培养数天后更换混合完全培养基继续培养。2.根据权利要求1所述的人肾小管上皮细胞分离及培养方法,其特征在于,所述的组织为离体2-4h的新鲜组织。3.根据权利要求1所述的人肾小管上皮细胞分离及培养方法,其特征在于,所述步骤b中研磨收集组织块的方式为组织块置于重叠的孔径分别为80目和100目的不锈钢筛网上,用注射器内芯在80目筛网上研磨剪碎组织块,无菌...
【专利技术属性】
技术研发人员:不公告发明人,
申请(专利权)人:江苏齐氏生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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