一种从生地黄中提取筋骨草醇的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及从地黄中提取筋骨草醇的方法及其应用，可有效解决从地黄中提取筋骨草醇及在制备治疗急性肾损伤药物中的应用，方法是，将生地黄用乙醇在回流提取两次，每次2h，提取液减压浓缩至无醇味，离心过滤，滤液上Diaion HP‑20柱，分别用柱体积的水和甲醇洗脱，甲醇部位用10%甲醇水溶液离散溶解，离心过滤，滤液上Diaion HP‑20柱，用10倍量10%甲醇溶液洗脱，洗脱部位经分离纯化重结晶，得筋骨草醇。本发明专利技术方法制备的筋骨草醇具有显著降低能够显著抑制TLR4表达并且能够降低细胞凋亡率以及细胞内ROS水平，通过TLR4受体降低细胞凋亡率以及细胞内ROS水平从而发挥对LPS诱导的急性肾损伤的保护作用，是治疗急性肾损伤药物上的创新，有显著的经济和社会效益。

A Method for Extracting Psoralen from Rehmannia glutinosa and Its Application

The present invention relates to the method and application of extracting glutenol from Radix Rehmanniae, which can effectively solve the problem of extracting glutenol from Radix Rehmanniae and its application in the preparation of drugs for acute kidney injury. The method is to extract raw Radix Rehmanniae with ethanol twice in reflux for 2 hours each time, concentrate the extract under decompression to be alcohol-free, centrifuge and filter, and use Diaion HP 20 columns on the filtrate, respectively, with water of column volume and A. Alcohol elution, methanol fraction was dissolved in 10% methanol water solution, centrifugal filtration, Diaion HP_20 column on the filtrate, eluted with 10 times the amount of 10% methanol solution, the elution fraction was purified and recrystallized to obtain glucocorticol. The astragalol prepared by the method of the invention can significantly reduce the expression of TLR4 and the apoptotic rate and the ROS level in cells. The apoptotic rate and the ROS level in cells can be reduced by TLR4 receptor so as to play a protective role in LPS-induced acute kidney injury. It is an innovation in medicine for treating acute kidney injury and has remarkable economic and social benefits.

【技术实现步骤摘要】
一种从生地黄中提取筋骨草醇的方法及其应用
本专利技术涉及医药，特别是一种从生地黄中提取筋骨草醇的方法及其应用。
技术介绍
生地黄为玄参科植物地黄（Rehmanniaglutinosa）的新鲜或干燥块根，是传统补益类中药，《神农本草经》将其列为上品。味甘苦，性寒，归心、肝、肾经，具有滋阴、养血、凉血、填精髓的功效。现代药理研究表明，地黄有保护肾脏、促进血管内皮细胞增殖、调节免疫、降血糖等多种作用。急性肾损伤（acutekidneyinjury,AKI）是一种常见临床急症，以肾功能短时间内急剧下降为特征。其发病机理复杂，氧化应激、细胞凋亡、炎症反应与AKI的发生发展密切相关。据2015年发表在Lancet上的流行病学调查显示，AKI在成人中的发病率是22%，在儿童中是14%，在我国，每年新发170万AKI，死亡70万，每年医疗花费约880亿人民币，严重危害人民健康。因此，寻找简便易行、经济又有效的药物，是治疗急性肾损伤的关键所在。研究发现地黄除常规的功效外，提取物筋骨草醇（ajugol）是生地黄中环烯醚萜类的化学成分。通过TLR4受体降低细胞凋亡率以及细胞内ROS水平从而发挥对LPS诱导的急性肾损伤的保护作用。但至今未见有筋骨草醇如何从生地黄中提取出来治疗急性肾损伤的公开报道。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种从地黄中提取筋骨草醇的方法及其应用，可有效解决从地黄中提取筋骨草醇及在制备治疗急性肾损伤药物中的应用。本专利技术解决的技术方案是，一种从地黄中提取筋骨草醇的方法，该筋骨草醇是从地黄中提取的环烯醚萜类化合物，其制备方法是，将生地黄用体积浓度为95%乙醇在78℃回流提取两次,每次体积浓度为95%乙醇的用量为生地黄重量体积的10倍，重量体积是指固体用g计，液体用毫升计，每次提取2h，合并2次提取液，提取液减压浓缩至无醇味，得浓缩液，浓缩液经离心过滤，滤液上DiaionHP-20柱，分别用柱体积的水和甲醇洗脱，得到水部位和甲醇部位，甲醇部位用体积浓度为10%甲醇水溶液离散溶解，离心过滤，滤液再次上DiaionHP-20柱，用10倍量的体积浓度为10%甲醇溶液洗脱，洗脱部位经分离纯化重结晶，通过分析鉴定为筋骨草醇（ajugol）。上述方法制备的筋骨草醇具有显著降低能够显著抑制TLR4表达并且能够降低细胞凋亡率以及细胞内ROS水平，通过TLR4受体降低细胞凋亡率以及细胞内ROS水平从而发挥对LPS诱导的急性肾损伤的保护作用，实现筋骨草醇在制备治疗急性肾损伤药物中的应用，开辟了生地黄的药用新价值（新用途），是治疗急性肾损伤药物上的创新，有显著的经济和社会效益。具体实施方式以下结合实施例和具体情况对本专利技术的具体实施方式做详细说明。本专利技术在具体实施中，可由以下实施例实现。本专利技术一种从生地黄中提取筋骨草醇的方法，是将生地黄20Kg，用体积浓度为95%乙醇在78℃回流提取两次,每次体积浓度为95%乙醇的用量为200L，每次2h，合并2次提取液，提取液减压浓缩至无醇味3000mL，离心过滤，滤液上DiaionHP-20柱，分别用柱体积的水和甲醇洗脱，得到水部位和甲醇部位101.2g，甲醇部位再用体积浓度为10%甲醇水溶液离散溶解，离心过滤，滤液再次上DiaionHP-20柱，用滤液10倍量的体积浓度为10%甲醇溶液洗脱，洗脱部位经分离纯化重结晶，通过分析鉴定为筋骨草醇（ajugol）。上述方案制备的筋骨草醇经鉴定和实验具有上述方法制备的筋骨草醇具有显著降低能够显著抑制TLR4表达并且能够降低细胞凋亡率以及细胞内ROS水平，通过TLR4受体降低细胞凋亡率以及细胞内ROS水平从而发挥对LPS诱导的急性肾损伤的保护作用，实现筋骨草醇在制备治疗急性肾损伤药物中的应用，并经实验得到了充分证明，有关资料如下：1、提取物的鉴定：按上述方法所得到的提取物，经HMBC波谱鉴定，为无色结晶（甲醇），硅胶TLC检识，1%茴香醛-浓硫酸加热显红棕色(105℃)。在1H-NMR(MeOD,500MHz)谱中，氢质子比较分散，难以得到优先的结构片段，在δ4.63(1H,d,J=6.0Hz,H-1′′)是葡萄糖的端基氢信号，说明结构中有一分子的β-构型的葡萄糖。在13C-NMR(MeOD,125MHz)中，共有15个碳信号，其中δ99.5(C-1′),74.2(C-2′),77.6(C-3′),71.7(C-4′),77.4(C-5′),62.3(C-6′)是一组葡萄糖的特征信号；其余碳信号结合DEPT谱可知，有一个季碳信号：δ79.4(C-8)；6个叔碳信号：δ140.1(C-3)和106.5(C-4)是一对双键的碳信号，δ94.5(C-1)是一个缩醛的碳信号，δ77.7(C-6)是一个连氧叔碳信号，δ51.9(C-9)和41.3(C-5)是两个普通叔碳信号；δ50.0(C-7)是一个仲碳信号；δ25.2(C-10)是一个伯碳信号。结合HSQC和1H-1HCOSY很容易得到环烯醚萜的结构片段。在HMBC谱中，δH4.63与δC94.5有相关信号，说明葡萄糖连在环烯醚萜的C-1上；δH1.31与δC79.4有相关信号，说明其C-8位上连一个甲基。综上所述，该化合物的结构确定，通过波谱数据与文献[7]对照，鉴定该化合物为筋骨草醇(ajugol)。筋骨草醇的NMR数据(inMeOD)SIXIRIDOIDGLYCOSIDESFROMREHMANNIAGLUTINOSA*HIROAKINISHIMURA,HIROSHISASAKI,TAKASHIMOROTA,MASAOCHIN(CHENZHENGXIONG)andHIROSHIMITSUHASHIPhytochemrstry,Vol28,No10,pp2705-27091,989NISHIMURAH,SASAKIH,MOROTAT,etal.SixiridoidglycosidesfromRehmanniaGlutinosa[J].Phytochemrstry,1989,28(10):2705-2709.2、提取物活性实验1.1实验药物本专利技术从生地黄中提取的筋骨草醇，生地黄采用河南省焦作市温县生地黄，实验前取筋骨草醇结晶样本溶于水，配成筋骨草醇含量为2mg/ml的水溶液。实验动物SPF级雄性BABL/c小鼠，体重18～22g；由北京维通利华实验动物有限公司提供，许可证号:SCXK京2016-0001。仪器与试剂酶标仪(BIO-RAD680)；Centrifuge-5804R小型高速冷冻离心机（Eppendorf公司）；BDFACSAriaIII流式细胞仪（BDBiosciences）；微量加样器（Eppendorf公司）；Odessey双色红外激光成像系统（LI-COR公司）；半干转膜仪（BIO-RAD）；WD-9405B型水平摇床（北京市六一仪器厂）；DYY-24DN电泳仪（北京市六一仪器厂）；脂多糖（LPS，Sigma公司）；一抗TLR4(Abcam公司，ab22048)；羊抗兔二抗（LI-COR公司，批号925-68071）；AnnexinV-PE/7-AAD凋亡检测试剂盒（BDBiosciences,7310941）；活性氧ROS检测试剂盒（BDBiosci本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从生地黄中提取筋骨草醇的方法，其特征在于，所述的筋骨草醇分子结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种从生地黄中提取筋骨草醇的方法，其特征在于，所述的筋骨草醇分子结构式为：其制备方法是，将生地黄用体积浓度为95％乙醇在78℃回流提取两次,每次体积浓度为95％乙醇的用量为生地黄重量体积的10倍，重量体积是指固体用g计，液体用毫升计，每次提取2h，合并2次提取液，提取液减压浓缩至无醇味，得浓缩液，浓缩液经离心过滤，滤液上DiaionHP-20柱，分别用柱体积的水和甲醇洗脱，得到水部位和甲醇部位，甲醇部位用体积浓度为10％甲醇水溶液离散溶解，离心过滤，滤液再次上DiaionHP-20柱，用10倍量的体积浓度为10％甲醇溶液洗脱，洗脱部位经分离纯化重结晶得筋骨草醇。2.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾梦楠，阚玉璇，郑晓珂，李孟，张贝贝，王胜超，高吉吉，冯卫生，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：河南,41