青蒿素在防治脑卒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了青蒿素在防治脑卒中的应用，本发明专利技术青蒿素副作用低，通过激活小鼠脑中ERK1/2信号通路，改善脑缺血再灌注小鼠缺血后的神经功能；减轻脑缺血再灌注小鼠缺血后的脑水肿和氧化损伤，降低脑缺血再灌注小鼠脑梗塞面积，减少脑缺血再灌注小鼠神经细胞凋亡及细胞缺失等对改善脑卒中具有积极作用。

Application of artemisinin in prevention and treatment of stroke

The invention discloses the application of artemisinin in the prevention and treatment of cerebral apoplexy. The artemisinin has low side effects. By activating ERK1/2 signaling pathway in the brain of mice, the neurological function of ischemia-reperfusion mice can be improved; the brain edema and oxidative damage after ischemia-reperfusion mice can be alleviated; the infarct area of cerebral ischemia-reperfusion mice can be reduced; and the nerve fineness Cell apoptosis and cell loss play an active role in improving stroke.

【技术实现步骤摘要】
青蒿素在防治脑卒中的应用
本专利技术涉及中药单体的应用领域，具体涉及青蒿素在防治脑卒中的应用。
技术介绍
目前，脑卒中是我国第一位死亡原因，也是成年人残疾的首要原因。脑卒中发病率高、死亡率高和致残率高，目前尚无安全有效的药物用于治疗脑卒中。TTC(2,3,5－三苯基氯化四氮唑)的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲月替(TTF)。应用TTC的水溶液浸泡脑组织，使之渗入脑组织的细胞内，如果细胞具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为三苯甲月替而呈红色(正常脑组织染色为红色)，如果为梗死区则染色为苍白色。应用Belayev等的计算公式纠正水肿：矫正梗死体积百分比＝(矫正梗死体积/非缺血侧半球体积)×100％。免疫组织化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。在生物医学研究中具有十分广泛的作用。蛋白质印迹(WesternBlot),是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。青蒿素作为一种抗疟药而广为熟知，除此之外，其被研究发现还具有多种作用，其中包括抗炎，抗凋亡等。但目前尚无青蒿素与脑卒中神经保护的关系的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供青蒿素在防治脑卒中的应用。本专利技术提供了青蒿素在防治脑卒中的应用，包括改善缺血后的神经功能、减轻脑缺血性后梗死体积、减轻缺血后的脑水肿、改善氧化损伤、细胞凋亡及细胞缺失。研究发现，ERK级联在脑缺血再灌注损伤过程中被抑制，小鼠脑缺血再灌注后，小鼠脑缺血再灌注脑组织ERK的磷酸化水平显著降低。我们的研究发现，给予青蒿素后小鼠脑缺血再灌注侧ERK的磷酸化水平明显激活，而给予ERK抑制剂(PD98059)能逆转ERK的磷酸化水平、青蒿素致小鼠脑缺血梗塞面积降低作用也因PD98059的逆转而消失。说明青蒿素通过诱导ERK的磷酸化而对脑卒中起到神经保护作用。本专利技术所采取的技术方案是：青蒿素在制备预防或/和治疗脑卒中药剂中的应用。进一步的，脑卒中是由大脑动脉闭塞造成的缺血性脑卒中。青蒿素在制备预防/治疗脑梗塞的药剂中的应用。进一步的，所述的脑梗塞为脑缺血梗塞。青蒿素在制备预防/治疗脑水肿药剂中的应用。进一步的，所述的脑水肿为脑缺血后脑水肿。青蒿素在制备抑制脑卒中细胞损伤及凋亡药剂中的应用。青蒿素在制备抗脑卒中氧化损伤药剂中的应用。进一步的，所述抗脑卒中氧化损伤药剂为能够减少自由基及丙二醛和/或提高增加脑内抗氧化能力或物质。一种预防/治疗脑卒中的药物，活性成分包括青蒿素。本专利技术的有益效果是：青蒿素可以提高小鼠脑缺血后的神经功能、改善小鼠缺血后神经功能以及降低小鼠缺血后脑水肿和氧化损伤，降低脑缺血再灌注小鼠脑梗塞面积，减少脑缺血再灌注小鼠神经细胞凋亡及细胞缺失等。青蒿素激活小鼠脑中ERK信号通路相关蛋白的磷酸化,使受试小鼠的脑梗塞面积、神经功能、脑水肿与模型组(给与等量PBS)相比得到明显改善，包括脑梗塞面积减少，神经功能状态好转，缺血性脑水肿降低等。而且临床副作用低，为治疗脑卒中的临床应用提供实验基础，具有良好的临床应用前景。附图说明图1青蒿素改善了脑缺血再灌注小鼠的神经功能。为青蒿素在脑缺血再灌注0小时和24小时的神经学评估，再灌注0小时时，模型组与青蒿素治疗组的神经功能评分一致，而在24小时，青蒿素治疗组小鼠的神经功能得到了改善，而模型组的神经功能未得到改善。Blank为空白组，Model为模型组，ART为青蒿素，下同。图2青蒿素剂量依赖性降低脑缺血再灌注小鼠的脑梗塞面积。小鼠在缺血1小时后给予青蒿素，再灌注24小时后取材并对各组脑组织行TTC染色所获得梗塞面积。其中，A组为空白对照组(给与等量生理盐水)，B组为模型组(给与等量生理盐水)，C组为模型组+青蒿素2mg/kg，D组模型组+青蒿素6mg/kg，E组模型组+青蒿素18mg/kg。与模型组相比，青蒿素6mg/kg及18mg/kg组显著降低脑缺血再灌注小鼠的脑梗塞面积。图3青蒿素时间依赖性改善脑缺血再灌注小鼠的脑梗塞面积。小鼠在脑缺血开始0小时、1小时、3小时、4.5小时、6小时给予6mg/kg青蒿素，总计再灌注24小时后取材并对各组脑组织行TTC染色所获得梗塞面积。其中，A组为空白对照组，B组为模型组，C组为缺血0小时给予青蒿素，D组为缺血1小时给予青蒿素，E组为缺血3小时给予青蒿素，F组为缺血4.5小时给予青蒿素，G组为缺血6小时给予青蒿素。青蒿素可以明显的减少C57/B6L小鼠脑缺血再灌注后的梗死区域面积(即苍白色区域减少)，不管是缺血时给药还是缺血再灌注后给药(0h、1h、3h、4.5h四个给药时间点)，青蒿素的保护效果都很明显，这种保护效果在再灌注6h(6h)后不明显。图4青蒿素改善脑缺血再灌注小鼠的脑水肿情况。各组小鼠在脑缺血再灌注给药处理后进行脑组织含水量测定，从而观察脑水肿的变化。结果说明青蒿素改善脑缺血再灌注小鼠的脑水肿情况。与对照组相比，模型组小鼠脑组织含水量明显升高(P＜0.05)。与模型组相比，青蒿素治疗组(2mg/kg,6mg/kg,18mg/kg)脑含水量均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；但青蒿素治疗组组间无统计学差异(P＞0.05)，即青蒿素可以显著降低C57/B6L小鼠脑梗塞引起的脑水肿。图5青蒿素减弱脑缺血再灌注小鼠大脑皮质中的细胞损伤及凋亡。通过HE染色检测细胞形态变化，然后使用Nissl染色检查神经元细胞活力，并且使用末端脱氧核苷酸转移的UTP缺口末端标记(TUNEL)测定法测定皮质中的凋亡细胞。结果说明青蒿素能减弱脑缺血再灌注小鼠大脑皮质中的细胞损伤及凋亡。图6青蒿素增加脑缺血再灌注小鼠大脑皮层的神经元细胞数量。NeuN是神经元的标记，用于检查青蒿素对脑缺血再灌注小鼠脑组织中神经元数量。结果说明青蒿素能增加脑缺血再灌注小鼠大脑皮层的神经元细胞数量。图7青蒿素降低脑缺血再灌注小鼠的丙二醛(MDA)水平和增加超氧化物歧化酶(SOD)的水平。使用酶联免疫吸附测定法测定丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。结果表明青蒿素能降低脑缺血再灌注小鼠脑中的丙二醛(MDA)水平和升高脑缺血再灌注小鼠脑中的超氧化物歧化酶(SOD)水平。图8青蒿素刺激ERK1/2,CREB的磷酸化。蛋白免疫印迹实验检测p-ERK和p-CREB的蛋白磷酸化。结果表明青蒿素刺激ERK1/2和CREB的磷酸化。图9抑制ERK的表达减弱了青蒿素对脑缺血再灌注小鼠的保护作用。用药前给予ERK抑制剂(PD98059)后，降低了青蒿素的治疗作用，如小鼠脑缺血再灌注侧脑梗塞面积降低作用消失，且青蒿素刺激ERK1/2,CREB的磷酸化作用减弱，结果表明青蒿素是通过部分激活ERK的磷酸化而对脑卒中起到神经保护作用。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1青蒿素对脑缺血再灌注小鼠的神经功能评估的影响取40只C57/B6L小鼠分成5组，每组8只。给药前分别称取体重，并根据体重计算用药量。A组为空白对照组(给与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.青蒿素在制备预防或/和治疗脑卒中药剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.青蒿素在制备预防或/和治疗脑卒中药剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，脑卒中是由大脑动脉闭塞造成的缺血性脑卒中。3.青蒿素在制备预防/治疗脑梗塞的药剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，所述的脑梗塞为脑...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑文华，彭汤明，
申请(专利权)人：澳门大学，
类型：发明
国别省市：中国澳门,82