The invention relates to the field of exosome enrichment and isolation, in particular to a method for exosome culture and isolation of umbilical cord mesenchymal stem cells. The exosome culture method of umbilical cord mesenchymal stem cells provided by the present invention includes the following steps: umbilical cord mesenchymal stem cells are subcultured for 8 to 14 hours, the culture medium and non-adherent cells are sucked and cleaned, and then cultured in a special complete culture medium for exosomes; after 72 to 96 hours, the culture medium is collected into a centrifugal tube to obtain a culture medium rich in exosomes of mesenchymal stem cells. The umbilical cord mesenchymal stem cells (UCMSCs) are cultured in a special complete culture medium for exosomes for a period of time after passage, which can effectively increase the content of exosomes and obtain more exosomes of mesenchymal stem cells. Then the culture medium rich in mesenchymal stem cell exosomes was separated to obtain mesenchymal stem cell exosomes. The method is simple and easy, which provides a good basis for the application of mesenchymal stem cell exosomes.
【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞外泌体培养以及分离方法
本专利技术涉及外泌体富集和分离领域,具体而言,涉及一种脐带间充质干细胞外泌体培养以及分离方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)是中胚层来源的、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞。事实上,MSC广泛存在于全身多种组织中,几乎来源于机体所有的组织器官,如骨髓、骨膜、脂肪组织、牙髓、滑膜、脐带、胎盘、羊水及胎儿组织等。不同来源的间充质干细胞具有相似的形态,表达相同的表面标记,具有相似的生物学特性方面,如可在体外培养扩增,并能在特定条件下分化为包括神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞在内的多组织系统的细胞。MSC除了具有多向组织细胞分化能力之外,还在造血、免疫炎症反应、血管新生等人体重要功能中起重要调节作用。脐带间充质干细胞(UC-MSC)是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞。脐带间充质是一类低免疫原性细胞,且具有很强的免疫调节功能。脐带间充质干细胞拥有MSC的全部特性,并且含量丰富,易于分离培养。与其他来源的MSC相比,UC-MSC更原始,是介于胚胎干细胞和成体干细胞之间的干细胞,其增殖和分化能力比胚胎干细胞低,但明显高于成体干细胞。脐带间充质干细胞具有多分化潜能,在特定的诱导条件下,UC-MSC不仅能分化为骨、软骨、脂肪、肌腱等中胚层细胞,而且能够向内胚层组织细胞(如心肌细胞、肝细胞)和外胚层组织细胞(如神经细胞)分化。UC-MSC不具致瘤性,能在不同的诱导条件及合适的体内生长微环境中,安全地定向分化为不同的组织细胞系,具有修复各种组织和器官 ...
【技术保护点】
1.一种无外泌体FBS的制备方法,其特征在于,FBS于100000g‑120000g的转速离心8‑14h;吸取上层澄清血清,并用0.22μm滤膜过滤,滤液即为无外泌体FBS。
【技术特征摘要】
1.一种无外泌体FBS的制备方法,其特征在于,FBS于100000g-120000g的转速离心8-14h;吸取上层澄清血清,并用0.22μm滤膜过滤,滤液即为无外泌体FBS。2.外泌体专用完全培养基,其特征在于,以无酚红的α-MEM为基准,添加以下组分:无外泌体FBS体积百分数为10%±2%,200mM谷氨酰胺体积百分数为1%±0.05%,bFGF浓度为20±2ng/mL,EGF浓度为20±2ng/mL。3.脐带间充质干细胞外泌体的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:脐带间充质干细胞传代培养8-14h,吸走培养液和未贴壁的细胞,并进行清洗,然后加入权利要求2所述的外泌体专用完全培养液进行培养;72-96h后收集培养液到离心管中,得到富含间充质干细胞外泌体的培养液。4.根据权利要求3所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养方法,其特征在于,培养P3代脐带间充质干细胞,待细胞长至85%±10%融合时进行传代;进一步地,所述传代按照扩培3-5倍的比例进行。5.根据权利要求3所述的脐带间充质干细胞外泌体的培养方法,其特征在于,用PBS小心清洗2-3次;进...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘年,
申请(专利权)人:北京太东生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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