哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用制造技术

本发明专利技术提供了哈茨木霉LTR‑2在防治番茄花叶病方面的应用，该哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株LTR‑2于2005年1月30日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC NO.1498；该哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株LTR‑2在防治番茄花叶病方面的应用。该菌株具有钝化番茄花叶病的独特作用，且可对泛起花叶病进行预防，从而可有效防治番茄花叶病。

Application of Trichoderma harzianum LTR-2 in the Control of Tomato Mosaic Disease

The invention provides the application of Trichoderma harzianum LTR_2 in the prevention and control of tomato mosaic disease. The Trichoderma harzianum LTR_2 strain was preserved in the General Microbial Center of the China Council for the Preservation and Management of Microbial Species on January 30, 2005, and its preservation number is CGMCC NO.1498. The Trichoderma harzianum LTR_2 strain should be used in the prevention and control of tomato mosaic disease. Use. The strain has the unique function of passivating tomato mosaic disease, and can prevent pandemic mosaic disease, so it can effectively control tomato mosaic disease.

【技术实现步骤摘要】
哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用
本专利技术涉及生物防治菌
，具体为哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用。
技术介绍
长期以来，番茄病毒病的广泛传播严重影响着番茄的产量和质量。到目前为止，与之相关的病毒已报道的达40多种，其中以番茄花叶病毒引起的花叶病危害最为严重。在我国，番茄病毒病的发生多以番茄花叶病毒侵染为主。番茄花叶病毒(Tomatomosaicvirus，ToMV)作为引起番茄病毒病最主要的毒原之一，能够侵染茄科、藜科、十字花科和豆科等植物。该病毒尤其是对番茄的危害十分严重。感染番茄花叶病毒的番茄植株出现发育滞缓，整株叶片呈现黄化、皱缩、出现黑褐色或灰白色小点，影响植株坐果；未出现滞育和叶片黄化现象的植株，叶片出现叶脉黄褐色坏死，后沿叶柄蔓延至茎部，出现深褐色坏死条斑，严重时，植株整株枯死，严重影响其产量。早期发病的损失可达50-70％，甚至绝收。此外，病株上成熟的果实也会发生病变，轻者着色不均，严重者果实会出现凹陷的褐色病斑，导致“花脸”果的产生，果实品质大为降低，对其经济生产带来巨大损失。据研究，番茄花叶病毒流行的诱因大致有两种：一是天气原因，如番茄生长期，由于高温、干旱，容易产生花叶病；二是茄科、藜科、十字花科和豆科等植物重茬、连茬时间过久的农田。目前对番茄花叶病毒的防治手段多采用化学防控为主要措施。为有效防控该危害，多数果蔬产区会多次、大量施用化学农药，而化学农药的毒副作用以及化学残留问题至今尚未有效解决，对食品安全也是巨大隐患。由于木霉菌通过分泌抗生素类及酶类等物质，对病原产生抑制作用并能够促进植株生长。本专利技术借助木霉菌产生的钝化番茄花叶病毒物质进行番茄花叶病的生物防治，以期为保障茄科蔬菜，尤其是番茄产量与品质，为加强食品安全性提供参考。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术提供了哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，该菌株具有钝化番茄花叶病的独特作用，且可对泛起花叶病进行预防，从而可有效防治番茄花叶病。本专利技术的技术方案如下：哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，该哈茨木霉(Trichodermaharzianum)菌株LTR-2是由山东省科学院生态研究所分离获得并保存，于2005年1月30日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号：CGMCCNO.1498；该哈茨木霉(Trichodermaharzianum)菌株LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用；该菌株具有钝化番茄花叶病毒的独特作用，从而对番茄花叶病毒引发的番茄花叶病有良好防效。上述哈茨木霉(Trichodermaharzianum)菌株LTR-2，菌丝纤细无色，具分隔，多分枝；分生孢子梗从菌丝的侧枝上生出，对生或互生，一般有2～3次分枝，著生分生孢子的小梗呈瓶形或锥形；分生孢子呈球形，孢壁具小疣突，呈蓝绿色；菌落在PDA固体培养基上初为白色絮状，后变为暗绿色。所述的哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，具体为哈茨木霉LTR-2代谢产物在防治番茄花叶病方面的应用。上述代谢产物的制备方法如下：(1)发酵液的获得：将保藏的哈茨木霉LTR-2接种于PDA固体培养基，30℃±1℃的温度条件下培养72h后，在超净工作台中取Φ＝6mm菌块接种至液体发酵培养基，于30℃±1℃﹑转速160r/min条件下，震荡发酵120h；(2)具有钝化番茄花叶病毒功能的代谢产物的获取：120h发酵结束后，液体发酵产物先后经滤网过滤，取滤液经乙酸乙酯萃取，取下层，用超低温真空干燥，获得干粉；(3)2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液的制备：准确称取(2)中代谢产物干粉2.00g，加入适量无菌水，震荡充分溶解，按质量百分比加入氯化钾5％-6％，双乙酸钠0.1％-0.3％，黄原胶0.2％-0.3％，最终配置为浓度20.00g/L的代谢产物溶液(质量体积比)。在上述代谢产物制备方法的步骤(1)中，液体发酵培养基配方：每1000mL中含有去皮马铃薯200g，加热煮沸20min，8层纱布过滤除滤渣，滤液补充去离子水至1000mL；每1000mL滤液含有葡萄糖20.00g，蛋白胨20.00g，酵母粉5.00g，磷酸二氢钾3.00g，七水硫酸镁1.50g，pH7.0-7.5；500mL三角瓶装100mL液体培养基；0.1MPa，115℃灭菌30min，待冷却到室温条件下使用。所述的哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，包括在钝化番茄花叶病方面的应用和预防番茄花叶病方面的应用。优选的，将2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液应用在钝化番茄花叶病方面中，2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液为10倍稀释液时，钝化番茄花叶病毒效率达到100％；2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液为100倍稀释液时，钝化番茄花叶病毒效率约为95％；2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液为500倍稀释液时，钝化番茄花叶病毒效率达到85％以上。优选的，将2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液应用在预防番茄花叶病方面中，2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液为10倍稀释液时，对番茄花叶病防效接近90％；2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液为100倍稀释液时，对番茄花叶病防效超过85％；2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液为500倍稀释液时，对番茄花叶病防效约为80％。将2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液在番茄苗期使用和/或在设施地番茄种植中使用，效果更佳。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了哈茨木霉(Trichodermaharzianum)菌株LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，包括钝化番茄花叶病、预防番茄花叶病；利用液体发酵获得钝化及预防番茄花叶病毒活性代谢产物的方法；该代谢产物应用于预防番茄花叶病，为微生物源农药的开发开拓新的途径。本专利技术与现有技术相比，具有如下优点：本专利技术与生产常用化学农药相比，对番茄花叶病的防治效果好，一般防治效果在80％以上，最高可达90％；对设施地番茄的防治效果优于露天番茄的防治效果；用于番茄花叶病防治的2％哈茨木霉LTR-2代谢产物制备方法简单，易操作。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。实施例1哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用中，用于防治番茄花叶病的代谢产物的制备方法，如下：(1)发酵液的获得：将保存的哈茨木霉LTR-2接种于PDA固体培养基，30℃±1℃条件培养72h后，在超净工作台中取Φ＝6mm菌块接种至普通马铃薯糖水液体培养基，于30℃±1℃﹑转速160r/min条件下，震荡发酵120h；(2)具有钝化番茄花叶病毒功能的代谢产物的获取：120h发酵结束后，液体发酵产物先后经滤网过滤，取滤液经乙酸乙酯萃取，取下层，用超低温真空干燥，获得干粉；(3)2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液的制备：准确称取(2)中代谢产物干粉2.00g，加入适量无菌水，震荡充分溶解，按质量百分比加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.哈茨木霉LTR‑2在防治番茄花叶病方面的应用，其特征在于，该哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株LTR‑2于2005年1月30日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC NO.1498；该哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株LTR‑2在防治番茄花叶病方面的应用。

【技术特征摘要】
1.哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，其特征在于，该哈茨木霉(Trichodermaharzianum)菌株LTR-2于2005年1月30日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNO.1498；该哈茨木霉(Trichodermaharzianum)菌株LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用。2.如权利要求1所述的哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，其特征在于，哈茨木霉LTR-2代谢产物在防治番茄花叶病方面的应用。3.如权利要求2所述的哈茨木霉LTR-2在防治番茄花叶病方面的应用，其特征在于，所述代谢产物的制备方法如下：(1)发酵液的获得：将保藏的哈茨木霉LTR-2接种于PDA固体培养基，30℃±1℃的温度条件下培养72h后，在超净工作台中取Φ＝6mm菌块接种至液体发酵培养基，于30℃±1℃﹑转速160r/min条件下，震荡发酵120h；(2)具有钝化番茄花叶病毒功能的代谢产物的获取：120h发酵结束后，液体发酵产物先后经滤网过滤，取滤液经乙酸乙酯萃取，取下层，用超低温真空干燥，获得干粉；(3)2％哈茨木霉LTR-2代谢产物溶液的制备：准确称取(2)中代谢产物干粉2.00g，加入适量无菌水，震荡充分溶解，按质量百分比加入氯化钾5％-6％，双乙酸钠0.1％-0.3％，黄原胶0.2％-0.3％，最终配置为浓度20.00g/L的代谢产物溶液。4.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢雪迎，温孚江，朱常香，张新建，王加宁，张广志，周方园，
申请(专利权)人：山东省科学院生态研究所，山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37