一种高致病力生防菌爪哇虫草及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种具有高致病力生防菌爪哇虫草及其应用。本发明专利技术研究发现爪哇虫草（Cordyceps javanica）对烟粉虱和柑橘木虱具有很强的侵染杀虫效果，并筛选到一株具有高致病力的爪哇虫草菌株GZQ‑1，于2018年8月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌株保藏编号：GDMCC No：60437。该菌株是一种昆虫病原真菌，可作为一种活体生物农药，在烟粉虱和柑橘木虱的生物防治中，以及对于由烟粉虱和柑橘木虱传播病菌引起的病害防治方面具有具有非常强的应用潜力。

A highly pathogenic Biocontrol Bacterium Cordyceps javanica and its application

The invention discloses a high pathogenicity Biocontrol Bacterium Cordyceps javanica and its application. Cordyceps javanica has strong infection and insecticidal effect on whitefly and citrus psylla. A strain of Cordyceps javanica with high pathogenicity was screened and stored in Guangdong Microbial Species Preservation Center on August 20, 2018. The strain preservation number is GDMCC No: 60437. The strain is an insect pathogenic fungus and can be used as a living biological pesticide. It has great potential in biological control of Bemisia tabaci and Citrus psylla, and in disease control caused by Bemisia tabaci and Citrus psylla.

【技术实现步骤摘要】
一种高致病力生防菌爪哇虫草及其应用
本专利技术属于生物防治
更具体地，涉及一种高致病力生防菌爪哇虫草及其应用。
技术介绍
虫害指的是有害昆虫对植物生长造成的伤害。如烟粉虱(Bemisiatabaci(Gennadius))番茄、黄瓜、辣椒等蔬菜及棉花等众多作物，烟粉虱直接刺吸植物汁液，导致植株衰弱，若虫和成虫还可以分泌蜜露，诱发煤污病的产生，密度高时，叶片呈现黑色，严重影响光合作用。另外，烟粉虱还可以在30种作物上传播70种以上的病毒病，不同生物型传播不同的病毒，引起的危害不容轻视。再如柑橘木虱(DiaphorinacitriKuwayama)是柑橘黄龙病的重要媒介昆虫，对我国乃至世界柑橘产业的健康发展存在着巨大的威胁。受害的寄主嫩梢可出现凋萎、新梢畸变等。木虱还会分泌白色蜜露并粘附于枝叶上，能引起煤烟病的发生。更为糟糕的是，木虱在柑橘黄龙病病株上取食、产卵繁殖，可产生大量的带菌成虫，成虫可通过转移为害新植株而传播黄龙病。柑橘木虱的主要危害作物为芸香科植物，以柑橘属受害最重，黄皮、九里香和枸椽次之。目前虫害的防治仍是以传统的化学防治为主。但农药多数有剧毒已被国家禁用，而且长期、大量使用化学农药导致了天敌昆虫大量死亡、生物多样性丧失、产生不同程度的抗药性、生态环境受到污染等一系列问题，农药残留超标的问题也时有发生。面对这样的被动局面，虫害防控的非化学手段研究与应用已是急迫问题。生物防治因其绿色、环保、持效等优点成为害虫最有效和最具应用前景的防治手段。生物防治是利用有益生物及其产物控制有害生物种群的防治技术，主要是通过利用生物之间相互依存、相互制约的食物链，使生物间的动态平衡向有利于农业生产方向倾斜。因此，寻求有效的生物防治产品及应用技术是今后害虫可持续控制的主要研究方向之一。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服烟粉虱和柑橘木虱等虫害防治方法的缺陷和技术不足，提供一种对其高致病力的生防菌，即爪哇虫草菌(Cordycepsjavanica)。该菌是一种昆虫病原真菌，可作为一种具有高致病力的活体生物农药用于防治烟粉虱和柑橘木虱。本专利技术的目的是提供一种高致病力生防菌爪哇虫草。本专利技术另一目的是提供爪哇虫草菌在防治烟粉虱和柑橘木虱方面的应用。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：本专利技术研究发现爪哇虫草(Cordycepsjavanica)对烟粉虱和柑橘木虱具有很强的侵染杀虫效果，并筛选到一株具有高致病力的爪哇虫草菌株GZQ-1，于2018年8月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌株保藏编号：GDMCCNo：60437，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。因此，如下应用均应在本专利技术的保护范围之内：爪哇虫草在防治烟粉虱和/或柑橘木虱方面的应用。爪哇虫草在制备烟粉虱和/或柑橘木虱防治药物方面的应用。爪哇虫草在防治由烟粉虱和/或柑橘木虱引起病害或制备防治药物方面的应用。另外，一种包含有爪哇虫草菌的可防治烟粉虱和/或柑橘木虱的药物，以及包含有爪哇虫草菌的可防治由烟粉虱和/或柑橘木虱引起病害的药物，也均应在本专利技术的保护范围之内。优选地，所述爪哇虫草为上述爪哇虫草菌株GZQ-1。优选地，所述由烟粉虱和/或柑橘木虱引起病害是指由烟粉虱和/或柑橘木虱作为传播媒介所引起的病害。具体地，所述由烟粉虱作为传播媒介所引起的病害包括黄化曲叶病等双生病毒病，由柑橘木虱作为传播媒介所引起的病害包括柑橘黄龙病。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术筛选得到了一株对烟粉虱和柑橘木虱具有高致病力的爪哇虫草菌株GZQ-1，经长期的侵染生物学和室内生物测定，表明该菌株对烟粉虱和柑橘木虱具有很强的侵染杀虫效果，而且，该菌株是一种昆虫病原真菌，可作为一种活体生物农药，在烟粉虱和柑橘木虱的生物防治中具有非常强的应用潜力。附图说明图1为不同浓度的爪哇虫草孢子悬浮液(1×103，1×104，1×105，1×106，1×107分生孢子/ml)对不同发育阶段柑橘木虱的死亡率。数据为三个重复的平均值±标准误。图2为爪哇虫草菌株GZQ-1的形态图。图3为爪哇虫草菌株GZQ-1的分子鉴定系统发育树。图4为在半田间条件下，柑橘木虱成虫感染爪哇虫草菌株GZQ-1、玫烟色虫草菌株IF010和绿僵菌菌株CNGD7孢子悬浮液(1×107孢子/ml)后的存活率。数据为三个重复的平均值±标准误。图5为爪哇虫草和玫烟色虫草对烟粉虱不同龄期的致病力比较；注：图中同列柱端后具有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。图6为田间条件下各处理对烟粉虱死亡率(％)；注：不同柱子上方相同字母表示不同处理间差异不显著(P＞0.05Duncan检验)。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1爪哇虫草菌株GZQ-1的分离与鉴定1、材料来源(1)样品：爪哇虫草菌由华南农业大学教育部生物防治工程研究中心续代保存，对该菌株保存样品采用单胞分离获得纯化菌株。(2)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：200g去皮马铃薯，切成小块，加水1L，煮沸20min，纱布过滤：趁热加葡萄糖20g，琼脂18～20g，搅拌使之溶解混匀，定容至锥形瓶中，放在高压灭菌锅(121℃，30min)中灭菌30min。(3)无菌操作条件：所有器皿和用具须经过高压锅灭菌(121℃，30min)，接种等操作均在超净工作台内进行。(4)培养条件：置于25℃光照(12L：12D)恒温箱中培养，待菌落形成后，转移到PDA斜面，再转入4所说的冰箱贮存。2、菌株的分离与纯化(1)分离该菌株由专利技术人欧达在2017年6月采集于华南农业大学长岗山2号网室的九里香叶片上被寄生的柑橘木虱成虫虫体，方法是：利用5％的次氯酸钠溶液对样品进行表面消毒，消毒后的样品在灭菌水中冲洗三次，并放入PDA平板中，倒置于25℃恒温箱中培养，待菌落形成后，转移到PDA斜面中，再转入4℃冰箱贮存。(2)纯化对分离株分别在PDA培养基上培养10d，待其形成孢子后，挑取分生孢子制成1×103孢子/ml的分生孢子悬浮液，将悬液滴于放有盖玻片的载玻片上，在生物显微镜下观察，将一个液滴中只有一个分生孢子的玻片插入培养基上，放在培养箱中培养，获得分离株。3、爪哇虫草分离株的筛选虫生真菌在遗传、生态及生物学等方面具有多样性。高产优质菌株的筛选与获得是取得较好防治效果的首要前提。菌株筛选主要考虑3个指标分别是产孢量、菌落生长速率、致病力。本专利技术以这些指标为依据，筛选优良菌株。(1)供试菌株的处理经纯化的爪哇虫草菌株，在PDA平板于25℃的恒温箱(12L：12D)中培养。(2)供试昆虫与寄主植物柑橘木虱，来自教育部生物防治工程研究中心网室内九里香上的继代繁殖种群。九里香MurrayapaniculataL.，在广州增城购买大量的九里香嫩苗，种植在华南农业大学教育部生物防治工程研究中心的网室内。(3)菌落生长速率和产孢量的测定爪哇虫草菌株配制成1×106孢子/ml浓度的分生孢子悬浮液，取1ml滴入直径为9cm的PDA平板内，用三角玻璃棒涂匀，待7d长出菌丝后用直径为13mm的打孔器取新鲜菌落，然本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株高致病力生防菌爪哇虫草（Cordyceps javanica）菌株GZQ‑1，其特征在于，于2018年8月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌株保藏编号：GDMCC No：60437，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

【技术特征摘要】
1.一株高致病力生防菌爪哇虫草（Cordycepsjavanica）菌株GZQ-1，其特征在于，于2018年8月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌株保藏编号：GDMCCNo：60437，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。2.爪哇虫草（Cordycepsjavanica）在防治烟粉虱和/或柑橘木虱方面的应用。3.爪哇虫草在制备烟粉虱和/或柑橘木虱防治药物方面的应用。4.爪哇虫草在防治由烟粉虱和/或柑橘木虱引起病害或制备防治药物方面的应用。5.根据权利要求2-4任一所述应用，其特征在于，所述爪哇虫草为权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱宝利，欧达，阿里·肖卡特，张利荷，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44