FOXO3a抑制剂用于制备治疗或预防骨质疏松症药物的用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，本发明专利技术要求保护FOXO3a抑制剂用于制备预防或治疗骨质疏松症药物的用途；优选地，所述FOXO3a抑制剂为FOXO3a腺相关病毒RNAi。

【技术实现步骤摘要】
FOXO3a抑制剂用于制备治疗或预防骨质疏松症药物的用途
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及FOXO3a抑制剂用于制备治疗或预防骨质疏松症药物的用途。
技术介绍
近些年的研究发现，骨质疏松症的原因很多，除了传统认为的雌激素缺乏、衰老、激素使用等原因外，铁蓄积目前也被认为是骨质疏松症的一个原因。但是针对铁蓄积导致的骨质疏松症，目前尚没有相关的有效的治疗方法。虽然降低铁蓄积的方法，理论上具有改善骨质疏松的潜能，但是降低铁蓄积可能会导致机体缺铁性贫血，铁本身又是机体很多细胞、组织、器官功能必需的。FOXO转录因子是控制基因表达的一类蛋白质分子，主要通过转录调控和信号转到途径在动物的生长发育，代谢和细胞周期等方面起到重要作用。FOXO3a是由FOXO3基因编码的人类蛋白质，也称ForkheadboxO3或FOXO3。FOXO3a属于叉形头转录因子的O亚型，这一类转录因子的特点是鲜明的叉头DNA结合域。研究表明FOXO3a的异常表达，可能与肿瘤的发生密切相关，例如继发性急性白血病与MLL基因与此基因的易位相关联。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供FOXO3a抑制剂用于制备治疗或预防骨质疏松症药物的用途。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是：FOXO3a抑制剂用于制备治疗或预防骨质疏松症药物的用途。本专利技术优选技术方案中，所述FOXO3a抑制剂降低FOXO3a蛋白或其生物活性片段或变体的表达或生物活性，所述FOXO3a抑制剂选自由与编码一种或多种FOXO3a蛋白的基因或mRNA充分互补的分离的shRNA,siRNA,反义RNA,嵌合反义DNA/RNA、microRNA和核酶，以及与FOXO3a蛋白特异性结合以降低其生物活性的抗体或其生物活性片段或变体。本专利技术优选技术方案中，所述FOXO3a抑制剂为FOXO3a腺相关病毒RNAi。本专利技术优选技术方案中，FOXO3a抑制剂用于制备治疗铁蓄积导致的骨质疏松症药物的用途。FOXO3a蛋白的基因是指编码FOXO3a蛋白的任意基因，包括同源基因或其生物活性片段。FOXO3a的mRNA是指编码FOXO3a蛋白的任意mRNA，包括同源基因或其生物活性片段。反义核酸已经被当做治疗病态的动物和人的有疗效的部分。已经将反义核酸药物包括核酸酶，对人进行给药，且目前还在进行很多临床试验。因此，可以确定，核酸可以作为有效的治疗形式。制备反义核酸的方法是本领域中熟知的方法。双链RNA可通过RNA干扰的过程，在许多组织中诱导序列特异性转录后基因沉默。本文中使用的RNAi为RNA干扰过程。RNAi是干扰或显著减少由mRNA产生的蛋白拷贝数的过程。如将双链短干扰RNA(siRNA)分子设计为与被干扰的靶标mRNA的蛋白编码核酸序列互补和匹配。细胞内转运后，siRNA分子与RNA诱导沉默复合物RISC结合。siRNA联合RISC通过碱基配对作用结合所述靶标并将其降解。RISC能够降解靶标RNA的其他拷贝，也可以使用RNA的其他形式，如短发夹RNA和较长的RNA分子。较长的分子可通过促进凋亡和诱导干扰素应答而使得细胞死亡。“预防”包括但不局限为预防可能易感染疾病(或病症)的受试者中发生疾病，但还未被诊断为患有所述疾病，包括抑制组织疾病的发展，减轻疾病的症状和/或延迟疾病的发作减轻由疾病引起的症状。“治疗”包括但不限于对于患者的疾病、病症或者症状采取措施以获得有益的效果，包括临床效果。为了本专利技术的目的，有益或想要的临床效果包括但不局限于减轻或改善所述疾病的一种或多种症状；缓解疾病的程度，延迟或减慢疾病的恶化，改善和减轻或稳定病情。本专利技术的FOXO3a抑制剂用于制备治疗疾病的方式，可以是静脉方式或口服的肠道给药方式。肠胃外投药可以避免吸收步骤(例如静脉内，动脉内，心内，脊柱内或者腰内或者关节内)或者同时包括吸收(例如肌肉内，皮下，皮内，经皮或者腹膜内)进行。适合于肠胃外投药法的合适的服用形式特别地是用于注射和注入以溶液，悬浮液，乳剂，冻干物或者无菌粉末形式的制剂。FOXO3a抑制剂腺相关病毒注射剂量范围可以是1011-1013v.g/mlx100ul，本研究中剂量优选为3.86E+12v.g/mlx100ul。适于口服的是根据现有技术水平起作用和迅速地和/或以改进方式释放本专利技术的药物组合物的给药形式，并且包含以结晶和/或无定形的和/或溶解形式，例如片剂(无涂层或有涂层的片剂，其例如具有抵制胃液或者延迟溶解或不溶解的涂层，根据本专利技术的组合物释放)，在口中迅速破碎的片剂，或膜片，膜/冻干物，胶囊(例如硬或软胶囊)，糖衣片，颗粒，小丸，粉末，乳剂，悬浮液，烟雾剂或者溶液的根据本专利技术的药物组合物。适合于另一个给药途径的是例如用于吸入的药物形式，例如粉末吸入七或者雾化器，或者可以鼻服用的药物形式，录入滴剂，溶液或者喷雾剂。附图说明图1A为野生型小鼠(WT)股骨Micro-CT三维结构；图1B为铁调素基因敲除小鼠(Hepcidin-KO)的股骨Micro-CT三维结构；表明铁调素基因敲除小鼠(Hepcidin-KO)比野生型小鼠(WT)明显骨质疏松。图2A为野生型小鼠(WT)来源的骨髓巨噬细胞(BMM)分化成的破骨细胞TRAP染色结果；图2B为铁调素基因敲除小鼠(Hepcidin-KO)来源的骨髓巨噬细胞(BMM)分化成的破骨细胞TRAP染色结果；表明铁调素基因敲除小鼠(Hepcidin-KO)来源的骨髓巨噬细胞(BMM)和野生型小鼠(WT)来源的骨髓巨噬细胞(BMM)，向破骨细胞分化的过程无明显差异，提示铁调素基因敲除小鼠骨密度的下降不是与铁调素基因敲除后破骨细胞分化过程影响相关。图3A为野生型小鼠(WT)来源的骨髓间充质干细胞(BMSC)分化成的成骨细胞ALP染色结果；图3B为铁调素基因敲除小鼠(Hepcidin-KO)来源的骨髓间充质干细胞(BMSC)分化成的成骨细胞ALP染色结果；表明铁调素基因敲除小鼠(Hepcidin-KO)来源的骨髓间充质干细胞(BMSC)，与野生型小鼠(WT)来源的骨髓间充质干细胞(BMSC)，向成骨细胞分化的过程有差异，提示铁调素基因敲除小鼠骨密度的下降与铁调素基因敲除后成骨细胞分化过程受抑制有关。图4A为铁调素基因敲除小鼠(Hepcidin-KO)和野生型小鼠(WT)骨组织内b-catenin蛋白表达水平，Western-Blot实验结果显示无明显差异。图4B为Co-IP实验结果，显示铁调素敲除小鼠骨组织内与b-catenin结合的FOXO3a增多，与经典Wnt/b-catenin通路中LEF1/TCF的结合减少；提示铁调素敲除后抑制了经典的Wnt/b-catenin信号通路，而经典的Wnt/b-catenin信号通路已被证实可以促进骨形成。图5A为对照组(KO+FOXO3a-NC)小鼠的股骨Micro-CT三维结构；图5B为实验组(KO+FOXO3a-RNAi)小鼠的股骨Micro-CT三维结构；图5C为对照组(KO+FOXO3a-NC)小鼠和实验组(KO+FOXO3a-RNAi)小鼠的股骨骨密度值(BMD)；图5D为对照组(KO+FOXO3a-NC)小鼠和实验组(KO+FOXO3a-RNAi)小鼠的材料体积/总体积值(BV/TV)；图5E为对照组(KO+FOXO3a-NC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.FOXO3a抑制剂用于制备治疗或预防骨质疏松症药物的用途。

【技术特征摘要】
1.FOXO3a抑制剂用于制备治疗或预防骨质疏松症药物的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述FOXO3a抑制剂降低FOXO3a蛋白或其生物活性片段或变体的表达或生物活性，所述FOXO3a抑制剂选自由与编码一种或多种FOXO3a蛋白的基因或mRNA充分互补的分离的shRNA,siRNA,反义RNA,嵌合反义D...

【专利技术属性】
技术研发人员：李光飞，张辉，王爱飞，高焱，徐又佳，
申请(专利权)人：苏州大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32