The invention discloses a method for inducing peripheral blood immune gamma-delta T cells into pluripotent stem cells, including the following steps: 1) isolating peripheral blood mononuclear cells by density gradient centrifugation; 2) activating and culturing peripheral blood mononuclear cells with zoledronic acid and interleukin-2 to obtain gamma-delta T cells; 3) transferring embryonic stem cell-related genes into the gamma-delta T cells by Sendai virus vector; In cells, reprogramming factors are introduced to induce their transformation into pluripotent stem cells; 4) Co-culture of the gamma-delta T cells with inactivated human skin fibroblast trophoblast cells to promote their transformation into iPSCs; 5) After the gamma-delta T cells are transformed into iPSCs, they are cultured in embryonic stem cell culture medium. The gamma delta T_iPSC produced by the invention can be differentiated into hematopoietic progenitor cells. This new technology will pave the way for new approaches to immunotherapy and can be applied to various types of cancer.
【技术实现步骤摘要】
一种将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法
本专利技术属于细胞工程
,涉及一种将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法。
技术介绍
免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答相关的细胞。T细胞为免疫细胞的一种,根据T细胞表面受体(TCRs)的不同可将T细胞分为αβT细胞和γδT细胞。αβT细胞表面受体为TCR2(T细胞表面受体2),它在外周血单核细胞(PBMC)中的含量为65-75%,αβT细胞中CD4+的占60%,CD8+占30%,CD4+CD8+不到1%,αβT细胞根据其表面标记CD4+和CD8+分别受MHCⅡ类分子和MHCⅠ类分子限制,需要抗原递呈细胞进行抗原递呈才能发挥免疫效应应答,这类T细胞也是目前免疫治疗中应用最广泛的细胞,例如car-T治疗和细胞毒性T细胞(CTL)治疗等;γδT细胞与αβT细胞不同,其表面受体为TCR1(T细胞表面受体1),该类型受体不受MHC分子限制,CD4与CD8的表达均为阴性。γδT细胞优于淋巴因子激活的杀伤细胞,具有广谱杀肿瘤和病毒的作用。但是γδT细胞在外周血PBMC中仅占不到10%,并且γδT细胞在传统方法的体外扩增过程中其扩增能力与杀伤会随之减弱,出现明显的由于因子诱导的扩增细胞效用耗尽的现象。为了克服传统的T细胞在制备生产中的这些问题,人们尝试将T细胞诱导为多能干细胞T-IPSC,其拥有相同的T细胞受体(TCR)基因作为其原始T细胞,这为抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)提供了几乎无限的来源。然而,这些技术主要集中在αβT细胞上,并且需要大量抗原特异性CTL,它们通过HLA肽多聚体的细胞分选纯化 ...
【技术保护点】
1.一种将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)用密度梯度离心法分离外周血单核细胞;2)用唑来膦酸和白细胞介素‑2活化培养所述外周血单核细胞,从而获得γδT细胞;3)用仙台病毒载体将胚胎干细胞相关基因转移到所述γδT细胞中,从而引入可诱导其转变成多能干细胞的重编程因子;4)用灭活的人皮肤成纤维滋养层细胞共培养所述γδT细胞,促进其转变成iPSCs;5)待所述γδT细胞转变成iPSCs后,用胚胎干细胞培养基培养。
【技术特征摘要】
1.一种将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)用密度梯度离心法分离外周血单核细胞;2)用唑来膦酸和白细胞介素-2活化培养所述外周血单核细胞,从而获得γδT细胞;3)用仙台病毒载体将胚胎干细胞相关基因转移到所述γδT细胞中,从而引入可诱导其转变成多能干细胞的重编程因子;4)用灭活的人皮肤成纤维滋养层细胞共培养所述γδT细胞,促进其转变成iPSCs;5)待所述γδT细胞转变成iPSCs后,用胚胎干细胞培养基培养。2.如权利要求1所述的将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法,其特征在于,步骤1)的具体操作过程为:①用淋巴细胞分离液将全血血液离心分离,分别收集其中的血浆层和白膜层;②用生理盐水清洗白膜层,然后离心收集白膜层细胞;③用收集的血浆重悬所述白膜层细胞。3.如权利要求2所述的将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法,其特征在于,步骤①所述淋巴细胞分离液为Ficoll淋巴细胞分离液。4.如权利要求2所述的将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法,其特征在于,步骤①所述离心的转速为380-420g,离心时间为25-35分钟。5.如权利要求2所述的将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法,其特征在于,步骤②所述离心的转速为1500-1800rpm,离心时间为8-12min。6.如权利要求1所述的将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方法,其特征在于,步骤2)的具体操作过程为:将所述白膜层细胞接种至含有唑来膦酸的DMEM-F12培养基中,在恒温37℃,CO2浓度为5%的条件下培养20-28小时后加入白细胞介素-2,继续培养10天以上,获得γδT细胞。7.如权利要求1所述的将外周血免疫γδT细胞诱导成多能干细胞的方...
【专利技术属性】
技术研发人员:高戎戎,佟艳辉,
申请(专利权)人:上海中溢精准医疗科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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