一种EB病毒特异性T细胞抗原受体及其应用制造技术

一种EB病毒特异性T细胞抗原受体及其应用。本发明专利技术提供了一种特异性结合人类疱疹病毒(HHV‑4)即EB病毒(Epstein‑Barr Virus，EBV)潜伏期膜蛋白LMP2肽(包含序列TYGPVFMCL和/或TYGPVFMSL)的T细胞抗原受体(TCR)及其在制备治疗与EBV相关疾病的药物中的应用或在制备杀伤小鼠肿瘤细胞、提高小鼠存活率的产品中的应用。本发明专利技术所述的TCR能够特异性地被病毒抗原肽提呈细胞激活，提高胞外细胞因子IFNγ、IL2的释放水平及乳酸脱氢酶释放量，且显著地杀伤靶细胞。

An EB virus specific T cell antigen receptor and its application

An EB virus specific T cell antigen receptor and its application. The invention provides a T cell antigen receptor (TCR) specifically binding to the latent membrane protein LMP2 peptide of human herpesvirus (HHV_4), namely Epstein Barr Virus (EBV), and its application in the preparation of drugs for treating EBV-related diseases or in the preparation of products that kill mouse tumor cells and improve the survival rate of mice. The TCR of the invention can be specifically activated by virus antigen peptide presenting cells, increase the release level of extracellular cytokines IFNgamma and IL2 and the release amount of lactate dehydrogenase, and significantly kill target cells.

【技术实现步骤摘要】
一种EB病毒特异性T细胞抗原受体及其应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种针对EBVLMP2表位的高亲和力T细胞抗原特异性受体及其制备方法，以及其在制备治疗与EBV相关的疾病的药物中的应用或在制备杀伤小鼠肿瘤细胞、提高小鼠存活率的产品中的应用。
技术介绍
T细胞抗原受体(Tcellreceptor，TCR)对免疫系统的细胞免疫功能是至关重要的，TCR是呈递在主要组织相容性复合体(MHC)上的特异性抗原肽的唯一受体，通过抗原特异性TCR与pMHC复合物结合引发T细胞与抗原呈递细胞直接的物理接触，相互作用，导致一系列后续细胞信号传递和其他生理反应，从而使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。EB病毒(Epstein-BarrVirus，EBV)也称人类疱疹病毒4型，属于γ疱疹病毒，是最常见的引起人类疾病的病毒之一，主要感染B细胞和鼻咽上皮细胞。EBV感染分为增殖型感染和潜伏型感染。潜伏型表达的蛋白主要包括6个核蛋白EBNA1、2、3A、3B和3C，EBNA-LP以及3个潜伏期膜蛋白LMP1、LMP2A、LMP2B，其中LMP2B是LMP2A的截短异形体。根据不同疾病表达的潜伏蛋白谱的差异，将潜伏型分为I、II、III期。专利CN108289950A公开了一种特异于人HLA呈递的EBVLMP2的T细胞受体样抗体药剂，其中所述的T细胞受体识别的抗原肽表位为CLGGLLTMV。专利CN1526072A公开了EBV肿瘤相关潜伏膜蛋白的胞外结构域的鉴定方法和与之反应的抗体试剂的选择方法，其中EBVLMP2胞外域的氨基酸序列为4-9中的任一个。及CN1269804A中公开的众多EBV的T细胞CTL表位。但是均非公开本专利技术所述的TCR特异性识别及结合的表位。因此，本专利技术提供了一种T细胞抗原受体，能够特异性地被病毒抗原肽提呈细胞激活，提高胞外细胞因子IFNγ、IL2的释放水平及乳酸脱氢酶释放量，且显著地杀伤靶细胞。
技术实现思路
本专利技术提供了一种T细胞抗原受体(TCR)，其特异性结合EBV潜伏期膜蛋白LMP2，所述的EBV潜伏期膜蛋白LMP2包含SEQIDNO：8和/或SEQIDNO：20所示的氨基酸序列。优选的，所述的T细胞抗原受体特异性结合EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽，所述的EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽包含SEQIDNO：1和/或SEQIDNO：21所示的氨基酸序列。本专利技术所述的SEQIDNO：1具体序列为：TYGPVFMCL。本专利技术所述的SEQIDNO：21具体序列为：TYGPVFMSL。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述的EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽的氨基酸序列如SEQIDNO：8所示，或与SEQIDNO：8所示序列具有至少80％同源性并具有抗原活性的序列。MGSLEMVPMGAGPPSPGGDPDGYDGGNNSQYPSASGSSGNTPTPPNDEERESNEEPPPPYEDPYWGNGDRHSDYQPLGTQDQSLYLGLQHDGNDGLPPPPYSPRDDSSQHIYEEAGRGSMNPVCLPVIVAPYLFWLAAIAASCFTASVSTVVTATGLALSLLLLAAVASSYAAAQRKLLTPVTVLTAVVTFFAICLTWRIEDPPFNSLLFALLAAAGGLQGIYVLVMLVLLILAYRRRWRRLTVCGGIMFLACVLVLIVDAVLQLSPLLGAVTVVSMTLLLLAFVLWLSSPGGLGTLGAALLTLAAALALLASLILGTLNLTTMFLLMLLWTLVVLLICSSCSSCPLSKILLARLFLYALALLLLASALIAGGSILQTNFKSLSSTEFIPNLFCMLLLIVAGILFILAILTEWGSGNRTYGPVFMCLGGLLTMVAGAVWLTVMSNTLLSAWILTAGFLIFLIGFALFGVIRCCRYCCYYCLTLESEERPPTPYRNTV*(SEQIDNO：8)其中，SEQIDNO：8中下滑线标注的序列为被本专利技术所述的TCR识别的EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽的氨基酸序列。在本专利技术的另一个具体实施方式中，所述的EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽的氨基酸序列如SEQIDNO：20所示，或与SEQIDNO：20所示序列具有至少80％同源性并具有抗原活性的序列。MGSLEMVPMGAGPPSPGGDPDGYDGGNNSQYPSASGSSGNTPTPPNDEERESNEEPPPPYEDPYWGNGDRHSDYQPLGTQDQSLYLGLQHDGNDGLPPPPYSPRDDSSQHIYEEAGRGSMNPVCLPVIVAPYLFWLAAIAASCFTASVSTVVTATGLALSLLLLAAVASSYAAAQRKLLTPVTVLTAVVTFFAICLTWRIEDPPFNSLLFALLAAAGGLQGIYVLVMLVLLILAYRRRWRRLTVCGGIMFLACVLVLIVDAVLQLSPLLGAVTVVSMTLLLLAFVLWLSSPGGLGTLGAALLTLAAALALLASLILGTLNLTTMFLLMLLWTLVVLLICSSCSSCPLSKILLARLFLYALALLLLASALIAGGSILQTNFKSLSSTEFIPNLFCMLLLIVAGILFILAILTEWGSGNRTYGPVFMSLGGLLTMVAGAVWLTVMSNTLLSAWILTAGFLIFLIGFALFGVIRCCRYCCYYCLTLESEERPPTPYRNTV*(SEQIDNO：20)其中，SEQIDNO：20中下滑线标注的序列为被本专利技术所述的TCR识别的EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽的氨基酸序列。本专利技术所述的T细胞抗原受体通过主要组织相容性复合物分子(MHC)的呈递，与来自EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽特异性结合。本专利技术所述的TCR至少含有一个α链可变区和/或β链可变区。优选的，所述TCR是αβ二聚体。本专利技术所述的T细胞抗原受体包含α链和β链；所述的α链的可变区氨基酸序列包含SEQIDNO：11所示序列，或包含与SEQIDNO：11所示序列具有至少80％同源性的序列。所述的β链的可变区氨基酸序列包含SEQIDNO：12所示序列，或包含与SEQIDNO：12所示序列具有至少80％同源性的序列。所述α链包含互补决定区CDR3α的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示序列，或与SEQIDNO：2所示序列具有至少80％同源性并具有与EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽表位：MHC复合物结合功能的序列，或与SEQIDNO：2的差异包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的序列或至少一个N-/C-末端延伸并具有与EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽表位：MHC复合物结合功能的序列；所述β链包含互补决定区CDR3β的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示序列，或与SEQIDNO：3所示序列具有至少80％同源性并具有与EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽表位：MHC复合物结合功能的序列，或与SEQIDNO：3的差异包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的序列或至少一个N-/C-末端延伸并具有与EBV潜伏期膜蛋白LMP2肽表位：MHC复合物结合功能的序列。本专利技术所述的S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种T细胞抗原受体，其特征在于，其特异性结合EBV潜伏期膜蛋白LMP2，所述的EBV潜伏期膜蛋白LMP2包含SEQ ID NO：8和/或SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种T细胞抗原受体，其特征在于，其特异性结合EBV潜伏期膜蛋白LMP2，所述的EBV潜伏期膜蛋白LMP2包含SEQIDNO：8和/或SEQIDNO：20所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的T细胞抗原受体，其特征在于，所述的EBV潜伏期膜蛋白LMP2包含如SEQIDNO：1和/或SEQIDNO：21所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的T细胞抗原受体，其特征在于，其包含α链和/或β链，所述的α链包含三个互补决定区，其中，CDR1α的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示序列；CDR2α的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示序列，CDR3α的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示序列；和/或，所述的β链包含三个互补决定区，其中，CDR1β的氨基酸序列如SEQIDNO：6所示序列，CDR2β的氨基酸序列如SEQIDNO：7所示序列，CDR3β的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示序列。4.一种核苷酸序列，其特征在于，其编码权利要求1-3任一项所述的T细胞抗原受体、所述T细胞抗原受体的α链或β链。5.一种包含权利要求4所述的核苷酸序列的载体。6.一种表达权利要求1-3任一所述的T细胞抗原受体、包含权利要求4所述的核苷酸序列和...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾乐梅，陈花，赵学强，林欣，
申请(专利权)人：清华大学，华夏英泰北京生物技术有限公司，上海赛傲生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11