多肽LDHA237-244及其作为参与肥胖相关慢性炎症的CD8+T细胞识别的靶点制造技术

本发明专利技术涉及一条来源于乳酸脱氢酶A链的多肽LDHA237‑244及其作为促进肥胖相关慢性炎症的CD8

Polypeptide LDHA237-244 and Its Target for CD8+T Cell Recognition in Obesity-related Chronic Inflammation

The present invention relates to a polypeptide LDHA237 244 derived from lactate dehydrogenase A chain and its CD8 as a promoter of obesity-related chronic inflammation.

【技术实现步骤摘要】
多肽LDHA237-244及其作为参与肥胖相关慢性炎症的CD8+T细胞识别的靶点
属于免疫识别和治疗领域，涉及来源于乳酸脱氢酶A链的多肽LDHA237-244及其作为参与肥胖相关慢性炎症的CD8+T细胞识别的靶点。
技术介绍
随着全球经济的快速发展，生活水平的日益提高、饮食结构不断变化，以及体力劳动的减少，肥胖症的发病率与日俱增，已成为全球首要健康问题。目前肥胖与艾滋病、吸毒、酗酒并列为世界性四大医学社会问题。肥胖常伴随着一系列的健康问题，包括胰岛素抵抗、2型糖尿病、脂肪肝、动脉粥样硬化及退行性疾病(如痴呆)、呼吸道疾病、癌症等,而这些疾病的发生与存在于内脏脂肪组织中的慢性炎症密切相关。肥胖诱导的慢性炎症与多种代谢性疾病密切相关，肥胖促发慢性炎症的机制研究成为肥胖及相关代谢疾病研究的前沿和热点，近年来研究证实：在肥胖相关慢性炎症中，特异性免疫细胞T细胞是内脏脂肪组织定居巨噬细胞(adiposetissueresidentmacrophages：ATMs)极化的关键调控者。内脏脂肪组织(VAT)浸润的效应性CD8+T细胞参与招募ATM及启动脂肪组织慢性炎症，但这些CD8+T细胞的活化受到何种靶抗原驱动尚未见报道。我们推测在营养和能量过剩所致脂肪细胞代谢紊乱状态下，小鼠VAT中可能有一些新生自身抗原肽产生，并通过激活特异性CD8+T细胞免疫反应而参与肥胖相关慢性炎症的发生及维持。对于肥胖慢性炎症相关CD8+T细胞免疫识别及活化机制的研究，有助于从全新角度深入理解肥胖诱导慢性炎症发生机制，并可能发现全新的免疫治疗靶点。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种来源于乳酸脱氢酶A链的多肽LDHA237-244及其作为参与肥胖相关慢性炎症的CD8+T细胞识别的靶点。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：利用高分辨率高通量质谱分析技术发现来源于乳酸脱氢酶A链的多肽LDHA237-244，其氨基酸序列为SAYEVIKL，如SEQIDNO.1所示；多肽LDHA237-244，是一条特异性存在于肥胖内脏脂肪组织中被MHC-I类分子提呈的新生肽；多肽LDHA237-244具有免疫原性可被CD8+T细胞识别与活化，并产生促炎反应，也就是说，LDHA237-244可有效激活CD8+T细胞炎症反应，是参与肥胖相关慢性炎症的CD8+T细胞识别的靶点，可能作为预防肥胖相关慢性炎症的潜在疫苗靶标。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过建立高脂饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠模型，获取DIO小鼠与正常对照小鼠附睾脂肪组织(内脏脂肪组织，VAT)MHC-I类分子相关免疫肽组(MIPs)；首次利用高分辨率高通量质谱分析技术，对比正常与肥胖小鼠VAT相关MIP差异，揭示高脂饮食产生脂肪细胞应激及压力可能导致MHC-I类免疫肽组产生变化，而一些新生的抗原肽如LDHA237-244则成为早期驱动CD8+T细胞激活的关键因素。申请人发现这些抗原肽均来源于正常表达于脂肪细胞中的蛋白质，前期研究发现口服这些来源于脂肪组织的蛋白质混合物可诱导特异性免疫耐受性，可有效保护HFD诱导的肥胖及肥胖相关代谢紊乱，故这些具有免疫原性的内脏脂肪组织新生抗原肽可以作为负调疫苗候选靶标，未来预防肥胖可能通过口服某蛋白抗原或肽疫苗就能轻松实现。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：图1为高脂饮食诱导的肥胖模型建立；图2为高脂和正常饮食小鼠脾脏及内脏脂肪组织MIPs特征分析；图3为仅存在于肥胖脂肪组织中的新生抗原肽诱导CD8+T细胞促炎免疫应答；图4为肥胖脂肪组织新生抗原LDHA237-244诱导CD8+T细胞促炎免疫应答；图5为洗脱下来的LDHA237-244和合成的LDHA237-244二级质谱图对比；图6为LDHA234-244特异性T细胞在HFD喂养的肥胖小鼠体内表达增加。具体实施方式下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例：1、建立高脂饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠模型采用D12492(含有60％卡路里饲料)作为高脂饲料(HFD组)，同时采用D12450B(含有10％卡路里饲料)作为正常对照(NCD组)，动态监测小鼠体重变化情况，HFD组比NCD组体重显著增加(图1中A，B)、附睾脂肪组织重量也显著增加(图1中C)(第12周)；分别检测第12周和第13周的各组小鼠葡萄糖耐量及胰岛素敏感性，HFD组出现明显的葡萄糖耐受不良及胰岛素抵抗(图1中D-E)，表明DIO小鼠及代谢紊乱模型成功建立。2、DIO小鼠与正常对照小鼠附睾脂肪组织MHC-I类分子相关免疫肽组(MIPs)的获取及质谱分析从12周龄正常小鼠或者肥胖C57小鼠内脏脂肪组织(VAT)28g，溶解在40ml含完全蛋白酶抑制剂的冰冷的蛋白裂解缓冲液中(包含50mMTrispH8.0,150mMNaCl,和体积百分数1％的CHAPS)，裂解液经过3次离心，收集上清。HiTrapNHS-activatedHP(GEHealthcare)偶联上anti-H2-KbmAbY-3，Y-3抗体(BioXcell公司)(1mg/ml,10ml)4℃环境下循环4小时，蛋白裂解液4度环境下柱子过夜，亲和柱子依次用下列缓冲液清洗：50mMTris(pH8.0),150mMNaCl,和体积百分数1％的CHAPS,50mMTris-HCl(pH8.0),150mMNaCl,5mMEDTA；50mMTris-HCl(pH8.0),150mMNaCl；50mMTris-HCl(pH8.0),450mMNaCl；50mMTris-HCl(pH8.0)，得到HLA-肽组复合物。随后HLA-肽组复合物用6ml10％的乙酸水溶液洗脱，过3KD超滤管分离HLA和肽组复合物，分离出来的肽组复合物过C18柱子进行纯化，真空浓缩至20μl后上液质联用检测仪进行肽段序列检测。分别从NCD、HFD小鼠的脾组织(SPL)中获得总肽段数量为392条及583条，从NCD、HFD小鼠内脏脂肪组织(VAT)中分别获得总肽段数量为932及813条。根据三次质谱结果重现性，并比对Uniprot数据库中小鼠蛋白质组，对三次质谱结果重现性最好的多肽进行多肽来源分析，发现MIPs中约有三分之一的高重现性多肽为剪切多肽，无法追索其蛋白来源，因此在后续分析时被忽略。后续分析仅保留来源蛋白属于小鼠蛋白质组，且同时满足与H2-Kb结合亲和力IC50<1000nM的多肽，最终从NCD、HFD小鼠VAT中筛到的肽段分别为125条及71条，其中在NCD、HFD组VATMIPs同时存在的肽段有39条；从NCD、HFD小鼠的SPL中获得肽段数量分别为84条及124条，其中在NCD、HFD组SPLMIPs同时存在的肽段有45条。进一步将筛选出的多肽的肽段长度分布、与H2-Kb结合亲和力大小以及多肽序列特征进行分析，发现鉴定到的肽长度分布集中在8-mer最多，9-mer长度次之(图2中A)，绝大多数肽段显示出与H2-Kb较强的结合能力(图2中B、C)，这些肽均具有典型的H2-Kb结合的特征基序(图2中D)，并对肽段来源的蛋白定位进行了分析(图2中E)。3、对比正常与肥胖小鼠VAT相关MIP差异，筛选肥胖小鼠新生肽进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.来源于乳酸脱氢酶A链的多肽LDHA237‑244，其特征在于，其氨基酸序列为SAYEVIKL，如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.来源于乳酸脱氢酶A链的多肽LDHA237-244，其特征在于，其氨基酸序列为SAYEVIKL，如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的多肽LDHA237-244，其特征在于，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓玲，王莉，吴玉章，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50