一种葡萄糖氧化酶及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种葡萄糖氧化酶及其制备方法，属于生物发酵工程技术领域；包括以下步骤：(1)菌株选育；(2)发酵扩大培养；(3)提取葡萄糖氧化酶；本发明专利技术通过选育诱变处理后的酶活最高的菌株，并通过控制各培育阶段的培养条件，培养基的葡萄糖浓度和培养基中加入适宜浓度的碳酸钙，从优良菌株筛选和适宜发酵工艺方面，制备出了本发明专利技术高酶活(≥100U/mL)酶活及高产率(产率≥20g/L)的葡萄糖氧化酶，本发明专利技术的制备方法特别适宜于工业化生产，填补了国内葡萄糖氧化酶的准备产量低的技术缺陷。

【技术实现步骤摘要】
一种葡萄糖氧化酶及其制备方法
本专利技术属于生物发酵工程
，具体涉及一种葡萄糖氧化酶及其制备方法。
技术介绍
葡萄糖氧化酶，是一种需氧脱氢酶。它能催化D-葡萄糖+O2D-葡糖酸(的δ-内酯)+H2O2的反应,由于反应生成的H2O2具灭菌作用，因此具有优异的抗菌性能。葡萄糖氧化酶的提纯物含有2分子的FAD，作为电子受体，除O2外，也能与2，6，二氯酚、靛酚反应。该酶对葡萄糖具有特异性。由于能定量地生成H2O2，因此作为D-葡萄糖的定量试剂而广泛被应用于生物化学领域和临床检查。葡萄糖氧化酶市场十分广泛，主要在以下几个方面应用：1、食品添加剂；2、葡萄糖氧化酶在动物产品中的防腐保鲜作用：保鲜名贵产品，无毒无残留，增加鲜美滋味；3、葡萄糖氧化酶在动物养殖中的作用：清除体内，特别是肠道内致病因子，固体肠道环境，提高食欲，增加采食量，替代抗生素和益生素，保护免疫系统，增强肝脏功能，降低动物体内药物残留，提高畜产品品质；4、葡萄糖氧化酶在动物疾病防治中的作用：可以快速解除毒素中毒，特别是霉菌毒素中毒；可以辅助药物，增加疗效，加快痊愈。如，神医喜来乐、溢利健等产品在养殖上的使用，效益显著。目前本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种葡萄糖氧化酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)菌株选育A、将原始菌种放入斜面培养基进行恒温培养至产生孢子，培养温度为26‑28℃，培养时间为120h，然后将所述孢子用无菌生理盐水从斜面洗下，装入灭菌瓶中，充分振摇后过滤制成孢子悬浮液，所述孢子悬浮液浓度为1×106‑2×106个·孢子/mL；B、将步骤A所得孢子悬浮液进行菌种诱变处理,然后取多个平皿培养基，将所述孢子悬浮液分别以0.2‑0.3mL/皿等量均匀涂布于各平皿培养基中培养，直至长出菌落；所述培养温度为25‑27℃，培养时间为72‑120h；C、分别挑取步骤B所得各菌落接种到不同的斜面培养基中进行恒温培养，并做好标记，直...

【技术特征摘要】
1.一种葡萄糖氧化酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)菌株选育A、将原始菌种放入斜面培养基进行恒温培养至产生孢子，培养温度为26-28℃，培养时间为120h，然后将所述孢子用无菌生理盐水从斜面洗下，装入灭菌瓶中，充分振摇后过滤制成孢子悬浮液，所述孢子悬浮液浓度为1×106-2×106个·孢子/mL；B、将步骤A所得孢子悬浮液进行菌种诱变处理,然后取多个平皿培养基，将所述孢子悬浮液分别以0.2-0.3mL/皿等量均匀涂布于各平皿培养基中培养，直至长出菌落；所述培养温度为25-27℃，培养时间为72-120h；C、分别挑取步骤B所得各菌落接种到不同的斜面培养基中进行恒温培养，并做好标记，直至长出孢子或菌丝，所述培养温度为26～28℃，培养时间为120h；然后将各孢子或菌丝分别进行摇瓶发酵，发酵温度为30℃，发酵时间为48-60h，转速为200r/min；然后逐瓶取发酵液，测定各发酵液中的葡萄糖氧化酶酶活，筛选出酶活最高的菌株；所述发酵培养基pH值为7-8；(2)发酵扩大培养将步骤(1)中筛选出的菌株进行发酵扩大培养，按重量份计，培养基的组分及配比为：葡萄糖70～80份、硝酸钠7～9份、氯化钾0.6～1份、磷酸氢二钾1～1.5份、硫酸镁0.5～1份，碳酸钙1-2份，蒸馏水900-1000份，培养条件：装液量为10～20ml/100ml，接种量为3～7％，温度为30～35℃，转速为200～400r/min，培养时间为72～96h；(3)提取葡萄糖氧化酶取步骤(2)所得的培养物，在0～5℃、4000～8000r/min转速条件下，离心10～15min，得到的上清液即为葡萄糖氧化酶液，将所述葡萄糖氧化酶液浓缩...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡海燕，郭杰，李觅，刘义会，孙中理，常少键，刘念，张磊，王超凯，张颖，
申请(专利权)人：四川省食品发酵工业研究设计院，
类型：发明
国别省市：四川,51