本发明专利技术属于免疫学诊断技术领域，具体涉及一种单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物,重组抗原组合物包括糖蛋白gG的抗原表位的重组抗原以及糖蛋白gD的抗原表位的重组抗原。本发明专利技术还包括一种含有重组抗原组合物的一种检测试剂盒。采用含有本发明专利技术重组抗原组合物的试剂盒来检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体，大大提高了检测的准确性。
A recombinant antigen composition for detection of herpes simplex virus type II IgG antibody and its kit
The invention belongs to the field of immunological diagnosis technology, in particular to a recombinant antigen composition of herpes simplex virus type II IgG antibody, which includes the recombinant antigen of the antigen epitope of glycoprotein gG and the recombinant antigen of the antigen epitope of glycoprotein gD. The invention also includes a detection kit containing recombinant antigen composition. A reagent kit containing the recombinant antigen composition of the invention is used to detect the IgG antibody of herpes simplex virus type II, which greatly improves the accuracy of the detection.
【技术实现步骤摘要】
一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物及其试剂盒
本专利技术属于免疫学诊断
，具体涉及一种单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物及其试剂盒。
技术介绍
单纯疱疹病毒II属于疱疹病毒科a病毒亚型，它主要引起生殖器感染和躯干下部皮肤感染，引起生殖器疱疹和新生儿疱疹甚至胎儿畸形。许多首次感染的患者是无症状的，如无疱疹症状的宫颈炎，它可垂直感染胎儿或者新生儿，造成极大的危害。虽然大部分感染后无症状，但病毒可潜伏于感染者的周围神经节，使个体终生携带单纯疱疹病毒，并可反复周期性的再次激活引发再次感染。病毒感染的早期治疗是有效的，鉴于对胎儿和新生儿产生的危害，建立一种早期、快速、灵敏度和抗原性极高的诊断试剂盒具有重要的意义。培养分离病毒耗时长，敏感度低、取样本易于污染操作复杂，其他检测方法不能区分首次感染还是再次感染等原因，由此单纯疱疹II抗体的免疫学检测具有很大的优势。糖蛋白gG基因位于HSVUS4序列区，编码699个氨基酸，是单纯疱疹I和II差异最大的一个糖蛋白基因。所以gG蛋白对单纯疱疹病毒II的诊断和疫苗的研究具有重要的意义。有报道称用全长的gG蛋白作抗原检测HSV抗体灵敏度不高，容易导致假阳。因此本专利技术分析单纯疱疹病毒II氨基酸序列，得到抗原性比较强的表位，克隆至表达载体进行大肠杆菌表达，纯化获得表达蛋白，并初步用于抗单纯疱疹病毒IIIgG抗体的检测。糖蛋白gD是感染细胞和病毒囊膜表面最丰富的病毒糖蛋白之一，它是激发单纯疱疹病毒II中抗体的主要成分。但gD在单纯疱疹病毒I和单纯疱疹病毒II之间具有高度的同源性，本专利技术分析氨基酸序列，找出同源性不高的区域，进行原核表达，与糖蛋白gG同时包被应用到诊断单纯疱疹病毒II型IgG抗体中，提高诊断的抗原性。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于是：针对现有技术存在的不足，为了获得具有诊断意义的重组抗原，本专利技术提供一种特异性强、灵敏度高、可提高检出率、避免出现假阳性的检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物。为了实现上述专利技术的目的，本专利技术的技术方案是：一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物，所述重组抗原组合物包括糖蛋白gG的抗原表位的重组抗原以及糖蛋白gD的抗原表位的重组抗原。作为一种改进的技术方案，所述糖蛋白gG的抗原表位的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，且编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。作为一种改进的技术方案，所述糖蛋白gD的抗原表位的氨基酸序列SEQIDNO:3所示，且编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。本专利技术还提供一种诊断单纯疱疹病毒II型IgG抗体的试剂盒，所述试剂盒包括包被权利要求1中的重组抗原组合物的酶标板、辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体、标本稀释液、洗涤液、显色液、终止液、阴性对照品和阳性对照品。作为一种改进的技术方案，所述重组抗原组合物中的糖蛋白gG的抗原表位的重组抗原和糖蛋白gD的抗原表位的重组抗原在相同浓度下，按照体积比1-5:1的比例混合后包被酶标板。本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：(1)本专利技术通过分析得到单纯疱疹病毒II特异性抗原位点，作为重组抗原的对象，利用该重组抗原组合物来检测单纯疱疹病毒II抗体可避免与单纯疱疹病毒I抗体产生交叉反应，大大提高了重组抗原的灵敏度。(2)本专利技术用单纯疱疹病毒II的两种糖蛋白gG和gD作为诊断抗原，通过ELISA检测IgG抗体与患者血清的反应情况，其能特异性的结合单纯疱疹病毒II型IgG抗体，灵敏度为100％，特异性为98.76％，大大提高了诊断试剂盒的灵敏度和特异性，具有较高的敏感性，大大降低了假阳性概率。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物，该重组抗原组合物包括糖蛋白gG的抗原表位的重组抗原以及糖蛋白gD的抗原表位的重组抗原。其中糖蛋白gG的抗原表位的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，且编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。其中糖蛋白gD的抗原表位的氨基酸序列SEQIDNO:3所示，且编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。该重组抗原组合物的制备方法包括以下步骤：(1)单纯疱疹病毒II型IgG抗体诊断抗原表位的筛选利用生物信息学分析工具，分析单纯疱疹病毒II糖蛋白gG和gD的氨基酸序列全长，筛选出单纯疱疹病毒II糖蛋白gG和gD抗原表位的氨基酸序列，采用大肠杆菌优势密码子反向翻译成核苷酸序列；(2)由上海生工分别合成糖蛋白gG和糖蛋白gD的抗原表位的核苷酸序列；(3)分别构建gG和gD蛋白表达载体用BamHI和EcoRI分别将糖蛋白gG核苷酸序列和糖蛋白gD核苷酸序列双酶切，酶切产物跑核酸电泳后切胶回收目的片段，将目的片段和双酶切的PET32a载体分别经T4DNA连接酶连接后转入大肠杆菌DH5a，涂布于含有氨苄抗生素(100ug/ml)的LB平板上，37℃倒置培养过夜，构建成PET32a/gG和PET32a/gD；(4)重组质粒的筛选和鉴定经抗性筛选得到单纯疱疹病毒IIgG和gD抗原的基因工程菌，挑取阳性克隆测序，测序结果表明载体构建正确；(5)gG和gD工程菌高效表达将鉴定呈阳性的重组质粒和PET32a载体质粒转化表达菌种BL21(DE3)，涂布含氨苄青霉素(100ug/ml)LB平板上，37℃恒温培养箱过夜，次日经抗性筛选可以得到单纯疱疹病毒IIgG和gD抗原的基因工程菌；将鉴定阳性工程菌和对照菌(转化PET32a载体的工程菌)接种至含氨苄青霉素的LB培养基中，将阳性工程菌和对照菌与LB培养基按1:100比例接种，37℃恒温振荡4h，加终浓度为1mmol/lIPTG，25℃继续诱导过夜；离心收集的菌液经过破碎，取上清和沉淀均进行SDS-PAGE检测，PET32a/gG和PET32a/gD表达的目的蛋白在上清中，对照菌中无目的蛋白条带；(6)表达蛋白的纯化将高效表达的重组蛋白工程菌分别离心，收集的沉淀菌体分别重悬于原离心体积的1/10裂解液(裂解液为50mMTris-Hcl、10mMEDTA、15mMNacL、10mMDTT)内，冰浴超声菌体20min，在12000rpm，4℃条件下离心30min，分别收集菌液上清液，再将上清液过镍柱，用结合缓冲液(pH8.5，50mMNaH2PO4·2H2O，300mMNacl，2mMimidazole)平衡清洗上样后，用洗杂缓冲液(pH8.0，50mMNaH2PO4·2H2O，300mMNacl，10mMimidazole)冲洗，用洗脱缓冲液(pH8.0，50mMNaH2PO4·2H2O，300mMNacl，250mMimidazole)洗脱，收集第一个洗脱峰。洗脱抗原采用SDS-PAGE进行纯化鉴定，纯度达到90％以上。实施例2一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的试剂盒，该试剂盒包括：重组抗原组合物包被的酶标板，阴性对照血清100ul，阳性对照血清100ul，牛血清白蛋白10.0mg，辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG10本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物，其特征在于：所述重组抗原组合物包括糖蛋白gG的抗原表位的重组抗原以及糖蛋白gD的抗原表位的重组抗原。
【技术特征摘要】
1.一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物，其特征在于：所述重组抗原组合物包括糖蛋白gG的抗原表位的重组抗原以及糖蛋白gD的抗原表位的重组抗原。2.根据权利要求1所述的一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物，其特征在于：所述糖蛋白gG的抗原表位的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，且编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。3.根据权利要求1所述的一种检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体的重组抗原组合物，其特征在于：所述糖蛋白gD的抗原表位的氨基酸序列SEQIDNO:3所示，且编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。4.根据权利要求1所述的一种检测...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨致亭，孙树凯，姚立琼，孙异凡，王婷，
申请(专利权)人：潍坊市康华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37
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