【技术实现步骤摘要】
检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片的制备使用方法
本专利技术涉及生物芯片领域，尤其涉及一种检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片的制备使用方法。
技术介绍
艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)感染引起的危害极大的传染病。其中，HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒，其攻击人体免疫系统中最重要的CD4T淋巴细胞，大量破坏该细胞从而使人体丧失免疫功能，导致人体易于感染各种疾病，并可发生恶性肿瘤，病死率较高。HIV在人体内的潜伏期平均为8～9年，患艾滋病以前，可以没有任何症状地生活和工作多年。随着大量留学生的进入，经济的快速发展等因素，近年来我国艾滋病发生率逐年上升。目前，我国艾滋病的诊断方法是抗体检测和抗原检测，抗原检测以实验室分子检测为主。然而，目前的分子生物学检测缺乏规范化，且受限于实验室条件。因此，亟需建立一种快速简便的检测方法。目前，国内外关于生物芯片的研究非常多，集中于疾病的诊断、新药开发、生物武器和司法鉴定等领域，生物芯片开发的方法学类型集中于：荧光、电化学发光、电压差。而关于电容式芯片的研究较少，常用于...
【技术保护点】
1.一种检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：A.使用灭活HIV免疫小鼠，制备鼠抗HIV多克隆抗体；B.采用饱和硫酸铵法纯化鼠抗HIV多克隆抗体；C.在可变电容式微纳米生物检测芯片的极板一检测孔中加入1～10mmol/L HDT乙醇溶液，再置于2～8℃环境下静置22～26h，实现芯片的改性；静置完成后，再采用超纯水轻柔冲洗3～6次，备用；D.在可变电容式微纳米生物检测芯片的极板一检测孔中加入0.1～0.5mol/L EDC与0.025～0.25mol/L NHS的混合溶液进行浸泡，实现芯片的活化，再采用超纯水轻柔冲洗3～6次，备用；E.将...
【技术特征摘要】
1.一种检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：A.使用灭活HIV免疫小鼠，制备鼠抗HIV多克隆抗体；B.采用饱和硫酸铵法纯化鼠抗HIV多克隆抗体；C.在可变电容式微纳米生物检测芯片的极板一检测孔中加入1～10mmol/LHDT乙醇溶液，再置于2～8℃环境下静置22～26h，实现芯片的改性；静置完成后，再采用超纯水轻柔冲洗3～6次，备用；D.在可变电容式微纳米生物检测芯片的极板一检测孔中加入0.1～0.5mol/LEDC与0.025～0.25mol/LNHS的混合溶液进行浸泡，实现芯片的活化，再采用超纯水轻柔冲洗3～6次，备用；E.将纯化后的鼠抗HIV多克隆抗体固化到经改性、活化步骤处理后的上述芯片极板一上，即得目标所需的检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片；其中，所述可变电容式微纳米生物检测芯片的结构具体包括极板一和极板二；所述极板一上设有若干个检测孔，检测孔底部通过一层弹性绝缘薄膜封底，被封底的检测孔内自底部覆有一层导体或半导体镀膜；所述极板二的上表面覆有一层与极板一检测孔面积相匹配的导体或半导体镀膜；上述纯化后的鼠抗HIV多克隆抗体以烷硫醇法固化到的极板一位置即是极板一上，位于所述检测孔底部的导体或半导体镀膜上表面。2.根据权利要求1所述的检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片的制备方法，其特征在于，所述制备鼠抗HIV多克隆抗体的具体方法为：选择6周龄体重25g以上雌性小鼠，取1mL灭活HIV抗原与等量弗氏佐剂充分匀浆形成稳定乳液，记为乳化抗原；每只小鼠于腹腔注射共0.2mL乳化抗原；7日后进行第二次免疫，免疫方案如前；21日后进行第三次免疫，免疫方案如前；42日后进行第四次免疫，免疫方案如前；49日后进行第五次免疫，免疫方案如前；55日取眼眶静脉丛血，使用琼脂双扩散法测抗体效价，测得效价1:32及以上，终止免疫；眼眶取血法获得全血，即得目标抗体。3.根据权利要求2所述的检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片的制备方法，其特征在于，所述灭活HIV抗原的浓度为2mg/mL。4.根据权利要求1所述的检测人类免疫缺陷病毒的电容式生物芯片的制备方法，其特征在于，所述纯化鼠抗HIV多克隆抗体的具体方法为：将上述...
【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，符修乐，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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