一种检测内毒素的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测内毒素的方法，该方法为将待测样品与荧光标记的LPS适配体，进行孵育；再加入还原氧化石墨烯和TBE缓冲液，再进行孵育；将孵育的样品加样到微流控芯片的进样口中，在微流控芯片的进、出样口之间施加电压进行处理，进样口处为阳极，电压处理后检测Nafion膜通道与阳极之间的荧光强度；根据荧光强度和标准曲线判定待测样品中LPS的含量。本发明专利技术方法的最低检测限为8fM，线性范围为宽，灵敏度高，选择性好，抗干扰能力较强，且能快速区分革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌。

【技术实现步骤摘要】
一种检测内毒素的方法
本专利技术涉及一种检测内毒素的方法。
技术介绍
内毒素(LPS)是一种高毒性的炎症刺激物，它可以与特异性细胞受体发生相互作用，从而产生炎性细胞因子，会导致发烧、败血症、多器官衰竭甚至死亡。由于可能产生严重的免疫反应，因此检测LPS变得至关重要，尤其是注射液等生物制品等，以便于确保灭菌产品的安全。目前用于LPS检测的主要方法是鲎试剂法(LAL)，在许多领域中都被广泛使用。[2]近年来还有一些基于LPS抗体或适配体的电化学和光学传感器的研究，[3,4]它们能够特异性地鉴别LPS，并且克服一些传统方法的缺点。适配体是具有高特异性和与靶标结合的高亲和性的单链寡核苷酸(ssRNA或ssDNA)，它可以通过折叠成独特的三维结构从而与靶分子结合，范围从小分子到蛋白质甚至细胞。[5]最近也已经有较多研究筛选出LPS的适配体。虽然鲎试剂法是目前测定LPS的金标准，但是它对温度、pH的变化以及干扰因子都非常敏感，并且样品制备程序繁琐。更重要的是，该方法依赖于因过度捕捞而严重减少的动物鲎。而基于LPS抗体、适配体的生物传感器虽然能够特异性识别LPS，但是其实际应用仍然受到成本高，耗时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测内毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待测样品与荧光标记的LPS适配体，进行第一次混合孵育；再加入还原氧化石墨烯和TBE缓冲液，进行第二次混合孵育；2)将微流控芯片清洗干净后，用含CH3OH的TBE缓冲液充满整个微流控芯片的通道，然后将上步第二次混合孵育的样品加样到微流控芯片的进样口中，在微流控芯片的进、出样口之间施加电压进行处理，进样口处为阳极，电压处理后检测Nafion膜通道与阳极之间的荧光强度；根据荧光强度和标准曲线判定待测样品中LPS的含量；上述微流控芯片中的Nafion膜通道垂直于微流控芯片中的富集通道。

【技术特征摘要】
1.一种检测内毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待测样品与荧光标记的LPS适配体，进行第一次混合孵育；再加入还原氧化石墨烯和TBE缓冲液，进行第二次混合孵育；2)将微流控芯片清洗干净后，用含CH3OH的TBE缓冲液充满整个微流控芯片的通道，然后将上步第二次混合孵育的样品加样到微流控芯片的进样口中，在微流控芯片的进、出样口之间施加电压进行处理，进样口处为阳极，电压处理后检测Nafion膜通道与阳极之间的荧光强度；根据荧光强度和标准曲线判定待测样品中LPS的含量；上述微流控芯片中的Nafion膜通道垂直于微流控芯片中的富集通道。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，当待测样品为血清样品时，在待测样品与LPS适配体混合之前，还需加入SDS、β-巯基乙醇，并于92～100℃加热处理3～8min。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述SDS、β-巯基乙醇在待测样品中的浓度分别为7～10mg/mL、3～10％v/v。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述荧光标记的L...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘利红，牛俊心，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44