一种利用融合截短表达策略提高谷氨酸氧化酶稳定性的方法技术

本发明专利技术公开了一种融合截短表达策略提高谷氨酸氧化酶稳定性的方法，利用融合截短表达策略，将位于谷氨酸氧化酶的α与β链之间的40个氨基酸残基进行删除，构建了新的重组蛋白(αβγ)2，融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO．1所示，融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因编码的谷氨酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其得到具有相同功能的蛋白质，且重组蛋白的比酶活和稳定性均得到提升。

【技术实现步骤摘要】
一种利用融合截短表达策略提高谷氨酸氧化酶稳定性的方法
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种利用融合截短表达策略提高谷氨酸氧化酶稳定性的方法。
技术介绍
L－谷氨酸氧化酶(LGOX)可以催化L－谷氨酸氧化酶生成α-酮戊二酸，氨和过氧化氢。α-酮戊二酸是一种重要的生物化合物。作为三羧酸循环的重要中间代谢产物之，α-酮戊二酸参与氨基酸、糖类、蛋白质以及脂肪代谢等重要生理过程，并且在微生物的碳氮代谢调控中起着重要作用。由α-酮戊二酸在细胞代谢上的重要性，其被广泛用于食品、医药、精细化工和化妆品行业，市场需求量巨大。此外，LGOX还被用于测定谷氨酸或制成测定谷氨酸的生物传感器，用于发酵和食品工业中的成分分析等。尤其现阶段利用其高度的立体异构选择性设计的生物传感分析仪测定谷氨酰胺、血肌酐、L-谷氨酸、氨等指标以服务于人类的生产、生活研究。来源于Streptomycessp.X-19-6的LGOX含有六个亚基(α2β2γ2)，其中α亚基约为44kDa，β亚基约为16kDa，γ亚基约为10kDa。该LGOX在大肠杆菌中重组表达后仅能获得LGOX前体，需通过特殊处理后才可获得成熟酶。
技术实现思路
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【技术保护点】
1.融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因，其特征在于，核苷酸序列如 SEQ ID NO．1所示。

【技术特征摘要】
1.融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNO．1所示。2.权利要求1所述的融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因编码的谷氨酸氧化酶，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.含权利要求1所述谷氨酸氧化酶基因的重组质粒。4.根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒是将权利要求1所述谷氨酸氧化酶基因克隆到pET-29a中所得。5.含权利要求3所述的重组质粒的重组微生物。6.根据权利要求5所述的重组微生物，其特征在于，以大肠杆菌E.coliBL21(DE3)为宿主菌。7.权利要求1所述的谷氨酸氧化酶基因在在制备生物传感器中的应用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜岷，董维亮，吕紫瑶，周杰，周鑫海，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32