循环microRNAs检测试剂盒和特异性检测循环microRNAs的方法及应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种循环microRNAs检测试剂盒和特异性检测循环microRNAs的方法及应用。该试剂盒包括：具有粘性末端的发卡结构DNA，其一部分与目标microRNA的至少一部分互补配对；双链特异性核酸酶及反应缓冲液；环状DNA探针，其一部分与发卡结构DNA的一部分互补配对；任选的以下组份之一：SYBR Gold荧光核酸染料；DNA聚合酶；DNA聚合酶反应缓冲液；4×dNTPs。本发明专利技术采用双链特异性核酸酶介导的靶标循环反应和滚环扩增反应对循环miRNAs进行特异性检测，既可以降低检测背景又可以起到双向信号放大的作用，具有操作简单、检测快速，灵敏度高、特异性好和成本低等特点。

Detection Kit of Circulating MicroRNAs and Specific Detection of Circulating MicroRNAs

The invention belongs to the field of biotechnology, and relates to a circulating microRNAs detection kit and a method and application of specific detection of circulating microRNAs. The kit includes: hairpin-structured DNA with viscous ends, which partially complements at least part of the target microRNA; double-stranded specific nucleases and reaction buffers; circular DNA probe, which partially complements part of hairpin-structured DNA; one of the following components: SYBR Gold fluorescent nucleic acid dye; DNA polymerase; DNA polymerase reaction buffers; 4. * dNTPs. The method adopts double-strand specific nuclease mediated target cyclic reaction and rolling ring amplification reaction to detect circulating microRNAs specifically, which can not only reduce the detection background, but also play the role of two-way signal amplification. The method has the characteristics of simple operation, fast detection, high sensitivity, good specificity and low cost.

【技术实现步骤摘要】
循环microRNAs检测试剂盒和特异性检测循环microRNAs的方法及应用
本专利技术属于生物
，更具体地，涉及一种循环microRNAs检测试剂盒，一种特异性检测循环microRNAs的方法，及它们在检测循环microRNAs中的应用。
技术介绍
循环microRNAs(miRNAs)是一类长约19-23nt，内源性，非编码，存在于血清、血浆或尿液等体液中的细胞外游离状态的miRNAs，它通过与其靶mRNA分子的3’端非编码区(3’UTR)互补结合，在翻译水平上调控基因的表达，因此miRNAs广泛参与了生物体多种生理过程，如个体发育，细胞增殖、分化和凋亡，代谢与应激反应的调节，甚至疾病发生，包括肿瘤形成。miRNAs还参与了肿瘤细胞重要的生物程序调控，间接地起着促癌基因和抑癌基因的功能，在肿瘤的发生和发展中起了至关重要的作用，因此miRNAs被视为肿瘤早期诊断、预后和治疗的重要潜在生物标记物和靶标。循环miRNAs具有短序列、高同源、低含量和极易降解的特性，因此在生物医学研究和早期临床诊断方面急需高效，特异的miRNAs检测方法。传统的miRNAs的检测方法主要有Nort本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种循环microRNAs检测试剂盒，其特征在于，该循环microRNAs检测试剂盒包括以下组份：(1)具有粘性末端的发卡结构DNA，所述发卡结构DNA的一部分与目标microRNA的至少一部分互补配对；所述互补配对使得发卡结构DNA展开，与目标microRNA形成miRNA‑DNA杂交体；(2)双链特异性核酸酶及双链特异性核酸酶反应缓冲液；(3)环状DNA探针，所述环状DNA探针的一部分与发卡结构DNA的一部分互补配对；(4)任选的以下组份之一：(4‑1)SYBR Gold荧光核酸染料；(4‑2)DNA聚合酶；(4‑3)DNA聚合酶反应缓冲液；(4‑4)4×dNTPs。

【技术特征摘要】
2018.04.25 CN 20181038077691.一种循环microRNAs检测试剂盒，其特征在于，该循环microRNAs检测试剂盒包括以下组份：(1)具有粘性末端的发卡结构DNA，所述发卡结构DNA的一部分与目标microRNA的至少一部分互补配对；所述互补配对使得发卡结构DNA展开，与目标microRNA形成miRNA-DNA杂交体；(2)双链特异性核酸酶及双链特异性核酸酶反应缓冲液；(3)环状DNA探针，所述环状DNA探针的一部分与发卡结构DNA的一部分互补配对；(4)任选的以下组份之一：(4-1)SYBRGold荧光核酸染料；(4-2)DNA聚合酶；(4-3)DNA聚合酶反应缓冲液；(4-4)4×dNTPs。2.根据权利要求1所述的循环microRNAs检测试剂盒，其中，所述发卡结构DNA的靠近长粘性末端的一部分与目标microRNA的至少一部分互补配对；优选地，所述发卡结构DNA的长粘性末端开始的一部分与目标microRNA完全互补配对；进一步优选地，所述发卡结构DNA的长粘性末端的一部分与目标microRNA的至少一部分互补配对的碱基个数为15-24。3.根据权利要求2所述的循环microRNAs检测试剂盒，其中，所述环状DNA探针的一部分与发卡结构DNA短粘性末端的一部分互补配对。4.根据权利要求1所述的循环microRNAs检测试剂盒，其中，所述发卡结构DNA以发卡结构DNA的缓冲液的形式提供，其浓度为1nM-100nM；所述环状DNA探针以环状DNA探针的滚环扩增反应液的形式提...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶家嘉，毛瑜，陈妍，孙钦升，李露露，
申请(专利权)人：深圳市乾康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44