The invention discloses a method for determining negative and positive fluorescence amplification curves, which includes: generating slope distribution curves of fluorescence amplification curves; calculating peak slope and amplification multiple based on slope distribution curves; correcting the first and second thresholds of amplification multiple according to the shape of positive control curves to obtain the first and second revised thresholds; The product of slope peak value and amplification multiple was calculated, and then the negative and positive fluorescence curves were determined by judging the relationship between the product and the preset maximum threshold and the preset minimum threshold, and the relationship between the amplification multiple and the revised first threshold and the revised second threshold. The method corrects the threshold of amplification multiple according to the shape of positive control curve in different concentration, reduces the error of negative and positive judgement in different concentration, and improves the accuracy of negative and positive judgement of fluorescence amplification curve.
【技术实现步骤摘要】
一种荧光扩增曲线阴阳性判定方法及装置
本专利技术涉及荧光检测
,特别是涉及一种荧光扩增曲线阴阳性判定方法及装置。
技术介绍
基于荧光的核酸扩增检测是荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对荧光扩增产物进行标记跟踪,利用荧光信号强度实时监控反应过程的技术,具有高灵敏度、高特异性、低污染、反应稳定等优点,广泛应用于病原体检测、血液病毒筛选、环境微生物检测等领域,具有广阔的应用前景。目前基于荧光的核酸扩增检测技术主要包括PCR聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)技术、LAMP环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermalamplificationmethod))等,是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,能在短时间内快速扩增待检测的目的基因或某一段DNA片段,同时在每一个扩增循环结束后使用荧光染料或带有荧光标记的探针与扩增产物结合产生荧光,并由荧光检测仪器捕获荧光值,实时反映扩增循环情况。核酸扩增反应完成后,对反应过程中产生的荧光信号强度进行分析,得到检测样本的定性和定量分析结果。在实时监测核酸样本的荧光扩增检测过程中,荧光曲线的阴阳性判定是核酸扩增技术进行定性和定量分析的基础。目前较为常用的判定方法是计算核酸样本扩增产物产生的荧光信号强度与核酸样本扩增反应的起始荧光信号强度的比值,将所述比值(即荧光曲线的扩增倍数)与预设的荧光信号强度比值阈值进行比较,根据比较结果判定荧光扩增曲线的阴阳性。所述比值大于预设的荧光信号强度比值阈值时判定为阳性,否则判定为阴性。但在实际核酸样本的荧光扩增检测过程中,由于荧光采 ...
【技术保护点】
1.一种荧光扩增曲线阴阳性判定方法,其特征在于,该方法包括:生成荧光扩增曲线的斜率分布曲线;基于所述斜率分布曲线,计算获得斜率峰值和扩增倍数;根据阳性对照曲线的形态,对扩增倍数的第一阈值和第二阈值进行修正,获得修正后的第一阈值和修正后的第二阈值;计算获得所述斜率峰值和所述扩增倍数的乘积;若所述乘积大于预设最大阈值,判断所述荧光扩增曲线的扩增倍数是否大于所述修正后的第一阈值,若是,则将所述荧光扩增曲线确定为阳性,否则将所述荧光扩增曲线确定为阴性;若所述乘积大于预设最小阈值,且所述乘积小于预设最大阈值,判断所述荧光扩增曲线的扩增倍数是否大于所述修正后的第二阈值,若是,则判断所述荧光扩增曲线的斜率峰值是否大于预设斜率阈值,如果是,则将所述荧光扩增曲线确定为阳性,否则将所述荧光扩增曲线确定为阴性;若所述乘积小于预设最小阈值,则将所述荧光扩增曲线确定为阴性。
【技术特征摘要】
1.一种荧光扩增曲线阴阳性判定方法,其特征在于,该方法包括:生成荧光扩增曲线的斜率分布曲线;基于所述斜率分布曲线,计算获得斜率峰值和扩增倍数;根据阳性对照曲线的形态,对扩增倍数的第一阈值和第二阈值进行修正,获得修正后的第一阈值和修正后的第二阈值;计算获得所述斜率峰值和所述扩增倍数的乘积;若所述乘积大于预设最大阈值,判断所述荧光扩增曲线的扩增倍数是否大于所述修正后的第一阈值,若是,则将所述荧光扩增曲线确定为阳性,否则将所述荧光扩增曲线确定为阴性;若所述乘积大于预设最小阈值,且所述乘积小于预设最大阈值,判断所述荧光扩增曲线的扩增倍数是否大于所述修正后的第二阈值,若是,则判断所述荧光扩增曲线的斜率峰值是否大于预设斜率阈值,如果是,则将所述荧光扩增曲线确定为阳性,否则将所述荧光扩增曲线确定为阴性;若所述乘积小于预设最小阈值,则将所述荧光扩增曲线确定为阴性。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述生成荧光扩增曲线的斜率分布曲线之前,该方法还包括:对所述荧光扩增曲线进行预处理,获得处理后的荧光扩增曲线,其中,所述预处理包括平滑处理和滤波处理。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述基于所述斜率分布曲线,计算获得斜率峰值和扩增倍数,包括:计算获得所述斜率分布曲线在各个点的斜率值;在所述各个点的斜率值确定斜率最大值,将所述斜率最大值记为斜率峰值;基于所述斜率分布曲线,计算获得荧光信号强度最大值的第一均值,并获得起始荧光信号强度最小值对应的第二均值;计算所述第一均值和所述第二均值的比值,将所述比值记为扩增倍数。4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述根据阳性对照曲线的形态,对扩增倍数的第一阈值和第二阈值进行修正,获得修正后的第一阈值和修正后的第二阈值,包括:当检测指标为阳性对照指标时,将所述第一阈值和所述第二阈值分别确定为修正后的第一阈值和修正后的第二阈值;当检测指标为非阳性对照指标时,获取阳性对照曲线的基线;判断所述基线是否小于预设阈值,如果是,则将所述第一阈值和所述第二阈值分别确定为修正后的第一阈值和修正后的第二阈值。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,还包括:若所述阳性对照曲线为阴性,则将所述第一阈值和所述第二阈值分别确定为修正后的第一阈值和修正后的第二阈值;若所述阳性对照曲线为阳性,计算获得所述阳性对照曲线的扩增倍数;若所述扩增倍数大于预设扩增阈值,且小于第一阈值,则将所述扩增倍数作为修正后的第一阈值;若所述扩增倍数大于预设扩增阈值,且小于第二阈值,则将所述扩增倍数作为修正后的第二阈值。6.一种荧光扩增曲线阴阳性判定装置,其特征在于,该装置包括:曲线生成单元,用于生成荧光扩增曲线的...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨晓慧,王宝杰,辛娟,周慧,石磊,王磊,邢婉丽,程京,
申请(专利权)人:博奥生物集团有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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