引物去磷酸化引发的循环指数扩增检测碱性磷酸酶的方法技术

本发明专利技术公开了引物去磷酸化引发的循环指数扩增检测碱性磷酸酶的方法，采用传感器由DNA引物、发夹探针1和发夹探针2组成，发夹探针1和发夹探针2的5'端碱基均修饰荧光基团，与发夹探针1的5'端碱基互补的碱基修饰淬灭基团；与发夹探针2中的5'端碱基互补的碱基修饰淬灭基团，发夹探针1中的淬灭基团和3'端之间的碱基序列与DNA引物的碱基序列互补，发夹探针1的5'端和发夹探针1酶切识别序列之间碱基序列与发夹探针2中的淬灭基团与3'端之间的碱基序列互补，发夹探针2的5'端和发夹探针2酶切识别序列之间碱基序列与DNA引物的碱基序列互补。本发明专利技术的方法能够快速、超灵敏的检测碱性磷酸酶的活性。

Detection of alkaline phosphatase by cyclic index amplification initiated by primer dephosphorylation

The present invention discloses a method for detecting alkaline phosphatase by cyclic index amplification initiated by primer dephosphorylation. The sensor consists of DNA primer, hairpin probe 1 and hairpin probe 2. The 5'terminal bases of hairpin probe 1 and hairpin probe 2 are modified with fluorescent groups, and the 5' terminal bases of hairpin probe 1 are complementary with quenching groups of 5'terminal bases of hairpin probe 2; and the base repair of hairpin probe 2 is complementary with 5' terminal bases of hairpin probe 2. The base sequences of DNA primers complement each other with quenched groups, quenched groups and 3'ends of hairpin probe 1, base sequences complement each other between 5' ends of hairpin probe 1 and 3'ends of quenched groups in hairpin probe 2, base sequences and DNA primers between 5' ends of hairpin probe 1 and 3'ends of quenched groups in hairpin probe 2, and base sequences and DNA primers between 5' ends of hairpin probe 2 and 3'ends of hairpin probe 2. Base sequence complementation. The method of the invention can detect the activity of alkaline phosphatase quickly and supersensitively.

【技术实现步骤摘要】
引物去磷酸化引发的循环指数扩增检测碱性磷酸酶的方法
本专利技术属于生物分析技术，涉及引物去磷酸化引发的循环指数扩增检测碱性磷酸酶的方法。
技术介绍
碱性磷酸酶(ALP)是一种广泛分布的水解酶，其催化各种磷酸化底物(例如蛋白质，碳水化合物和核酸)的去磷酸化，其在调控细胞周期，生长，凋亡、信号转导途径等多个细胞内过程中起着重要的作用。ALP的异常水平与骨疾病(例如佩吉特氏病，骨软化症和成骨细胞性骨癌)、肝脏疾病(例如梗阻性黄疸、肝炎和肝癌)、糖尿病、乳腺癌和前列腺癌等各种人类疾病密切相关。此外，由于其高催化活性，良好的稳定性和广泛的底物特异性，ALP是酶免疫测定、基因表达分析、组织化学染色和生物分子监测中使用最广泛的标记示踪剂之一。因此，开发一种有效可靠的ALP活性检测方法对于临床诊断和药物研发具有十分重要的意义。目前为止，已经开发了多种方法来测量ALP的活性/水平，包括基于放射性标记的电泳法、色谱法、表面增强拉曼散射法、比色法、化学发光法和电化学测定法。尽管这些方法都具有各自的特色，但是它们会受到诸如有害辐射、灵敏度差、操作复杂、程序耗时、样品处理复杂、仪器昂贵以及需要蛋白质抗体固定在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种循环指数扩增检测碱性磷酸酶的传感器，其特征是，由DNA引物、发夹探针1和发夹探针2组成；DNA引物为单链DNA序列，DNA引物的3'端为磷酸化末端，发夹探针1和发夹探针2的均具有突出的3'端，发夹探针1和发夹探针2的5'端碱基均修饰荧光基团，与发夹探针1的5'端碱基互补的碱基修饰淬灭基团；与发夹探针2中的5'端碱基互补的碱基修饰淬灭基团，发夹探针1中的淬灭基团和3'端之间的碱基序列与DNA引物的碱基序列互补，发夹探针1的5'端和发夹探针1酶切识别序列之间碱基序列与发夹探针2中的淬灭基团与3'端之间的碱基序列互补，发夹探针2的5'端和发夹探针2酶切识别序列之间碱基序列与DNA引物的碱基序...

【技术特征摘要】
1.一种循环指数扩增检测碱性磷酸酶的传感器，其特征是，由DNA引物、发夹探针1和发夹探针2组成；DNA引物为单链DNA序列，DNA引物的3'端为磷酸化末端，发夹探针1和发夹探针2的均具有突出的3'端，发夹探针1和发夹探针2的5'端碱基均修饰荧光基团，与发夹探针1的5'端碱基互补的碱基修饰淬灭基团；与发夹探针2中的5'端碱基互补的碱基修饰淬灭基团，发夹探针1中的淬灭基团和3'端之间的碱基序列与DNA引物的碱基序列互补，发夹探针1的5'端和发夹探针1酶切识别序列之间碱基序列与发夹探针2中的淬灭基团与3'端之间的碱基序列互补，发夹探针2的5'端和发夹探针2酶切识别序列之间碱基序列与DNA引物的碱基序列互补。2.如权利要求1所述的传感器，其特征是，荧光基团为FAM，淬灭基团为BHQ1。3.如权利要求1所述的传感器，其特征是，DNA引物有19～21个碱基。4.如权利要求1所述的传感器，其特征是，DNA引物从5'端至3'端的序列为TCGATTGATGAACACTGCGA；或，发夹探针1从5'端至3'端的序列为ACTATACAACCTACTACCTTTCAGACTCACGTAGTAGGTTGTATAGTGTTTGTCATCGCAGTGTTCATCA；或，发夹探针2从5'端至3'端的序列为TCGCAGTGTTCATCAATCGACTTTCAGACTCACTCGATTGATGAACACTGCGAATCTGAGAACTATACAACCTACT。5.如权利要求1所述的传感器，其特征是，包括DNA聚合酶和DNA切口酶。6.一种循环指数扩增检测碱性磷酸酶的试剂盒，其特征是，包括权利要求1～5任一所述的传感器。7.如权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，王黎娟，王子月，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37