一种检测转基因玉米MIR604的引物、探针及试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种转基因玉米MIR604的RPA检测引物与探针组合、试剂盒及检测方法。引物组由2条特异性引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID No：1～2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示。检测试剂盒包括检测引物与探针溶液、Buffer A、Buffer B和阳性对照。检测方法是采用特异性引物及探针在重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)、链置换DNA聚合酶和核酸外切酶的作用下，在37～42℃对样品DNA模板进行扩增，通过对探针荧光信号收集的方法，判断样品是否含有转基因玉米MIR604成分。本发明专利技术不需要特殊仪器，具有快速高效、操作简便、灵敏度高、特异性强等特点，适合现场检测。

A Primer, Probe and Kit for Detecting Transgenic Maize MIR604

The invention discloses a combination of RPA detection primers and probes, a kit and a detection method of a transgenic maize MIR604. The primer group consisted of two specific primers. The nucleotide sequence was shown as SEQ ID No:1-2 and the probe sequence was shown as SEQ ID No.3. The detection kit included detection primers and probe solutions, Buffer A, Buffer B and positive controls. Specific primers and probes were used to amplify the DNA template of the sample at 37-42 C under the action of recombinant enzyme, single stranded DNA binding protein (SSB), strand displacement DNA polymerase and nucleic acid exonuclease. By collecting the fluorescence signal of the probe, the samples were judged to contain the MIR604 component of GM maize. The invention does not need special instruments, has the characteristics of fast, high efficiency, simple operation, high sensitivity and strong specificity, and is suitable for on-site detection.

【技术实现步骤摘要】
一种检测转基因玉米MIR604的引物、探针及试剂盒和方法
本专利技术属于分子生物学
，涉及转基因植物及其产品的检测方法，具体涉及一种利用重组酶聚合酶扩增技术(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)快速检测转基因玉米MIR604的引物与探针组合、试剂盒和检测方法。
技术介绍
2016年全球转基因作物种植面积高达1.851亿公顷，比1996年商业化初期增长了100余倍。目前商业化种植的转基因作物主要有大豆、玉米、棉花、油菜。转基因玉米MIR604是先正达公司研发的一种抗虫转基因玉米，已被我国政府批准进口用作加工原料。针对转基因玉米MIR604开展快速精准的检测方法研究，是转基因生物安全管理相关法律法规顺利实施的技术支撑和保障。转基因成分检测技术主要分为两大类：一类以外源DNA为检测对象，如PCR、基因芯片等，另一类以外源基因表达的蛋白质为检测对象，如ELISA、免疫试纸条等。在上述方法中，目前PCR技术应用最为广泛，但基于PCR的转基因检测方法需要PCR仪、凝胶成像系统等专业仪器设备，且扩增和产物检测时间较长(约3～4h)，难以达到现场快速检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因玉米MIR604的RPA检测引物，其特征在于，所述的引物包括正向引物F和反向引物R，所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种转基因玉米MIR604的RPA检测引物，其特征在于，所述的引物包括正向引物F和反向引物R，所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。2.权利要求1所述的RPA检测引物在检测转基因玉米MIR604种质资源中的应用。3.一种RPA检测转基因玉米MIR604种质资源的探针，其特征在于，所述的探针与权利要求1所述的引物配合使用，所述的探针核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。4.一种转基因玉米MIR604的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的正向引物F和反向引物R。5.根据权利要求4所述的一种转基因玉米MIR604的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述的探针。6.一种转基因玉米MIR604的RPA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取待测样品的基因组DNA；2)配制待测样品的RPA检测反应体系：在200μLPCR反应管内加入模板DNA2μL、检测正反引物溶液各1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈笑芸，徐俊锋，汪小福，彭城，徐晓丽，魏巍，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33