同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法技术

本发明专利技术公开了同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法，包括如下步骤：(1)恩替卡韦对照品溶液和恩替卡韦同位素内标溶液配制；(2)建立恩替卡韦标准曲线；(3)采集待测样品溶液的色谱图；(4)待测样品中恩替卡韦浓度的确定。采用同位素内标，可以有效减少基质效应，使检测结果更加准确，分析时间缩短至4.5min，适合高通量的样本检测，能满足临床样本检测的要求；采用直接蛋白沉淀法，采用有机溶剂直接蛋白沉淀，样本前处理简单快速，成本低，耗时短，适合大批量样本的处理和检测。

【技术实现步骤摘要】
同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法
本专利技术涉及同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法。
技术介绍
恩替卡韦持续出色的抗病毒能力和极低的耐药率，使之成为慢性乙型肝炎重要的一线治疗药物，可以长期保护患者远离耐药困扰，强效持久地控制病情。由于个体的差异性，患者服药后，患者在使用药物时需要严格把控用药浓度，药物浓度低了达不到药效，而药物浓度高了又会对机体产生副作用。另外，再加上个体的药物代谢差异大，针对每个个体的药物疗效也是不同的，而药物疗效对于患者来说十分重要。因此在患者服药后，患者血清中的药物活性代谢物浓度的准确监测，是实现精准医疗、个体精准用药的基础。目前检测血浆中恩替卡韦的方法是，经过SPE小柱纯化富集，采用SPE板，成本高，样本前处理处理耗时；且没有采用同位素内标，由于血浆基质复杂，干扰严重，严重影响检测结果的准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法，使用稳定同位素内标法，因稳定同位素内标与分析的物质具有几乎相同的物理化学性质，可以有效减少基质效应，使检测结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：配制恩替卡韦对照品溶液和恩替卡韦同位素内标溶液的步骤；用甲醇分别溶解恩替卡韦和恩替卡韦同位素内标，制成已知浓度的恩替卡韦对照品储备液和已知浓度的恩替卡韦同位素内标溶液；用甲醇水将恩替卡韦对照品储备液稀释成一系列具有不同已知浓度的恩替卡韦对照品溶液；S2：建立恩替卡韦标准曲线的步骤：分别吸取一定体积的具有不同已知浓度的恩替卡韦对照品溶液，分别加入1～10倍体积的空白血清或血浆，然后分别加入3～5倍体积的恩替卡韦同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，然后取一定体积的上清液，再离心，最后取一定体积的上清液，...

【技术特征摘要】
1.同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定血清或血浆中恩替卡韦的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：配制恩替卡韦对照品溶液和恩替卡韦同位素内标溶液的步骤；用甲醇分别溶解恩替卡韦和恩替卡韦同位素内标，制成已知浓度的恩替卡韦对照品储备液和已知浓度的恩替卡韦同位素内标溶液；用甲醇水将恩替卡韦对照品储备液稀释成一系列具有不同已知浓度的恩替卡韦对照品溶液；S2：建立恩替卡韦标准曲线的步骤：分别吸取一定体积的具有不同已知浓度的恩替卡韦对照品溶液，分别加入1～10倍体积的空白血清或血浆，然后分别加入3～5倍体积的恩替卡韦同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，然后取一定体积的上清液，再离心，最后取一定体积的上清液，得到一系列具有不同已知浓度的恩替卡韦标准曲线工作液；在相同的超高效液相色谱质谱条件下，将一定体积的具有不同已知浓度的恩替卡韦标准曲线工作液分别注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得一系列具有不同已知浓度的恩替卡韦标准曲线工作液的色谱图；以恩替卡韦标准曲线工作液的色谱图中恩替卡韦色谱峰峰面积与恩替卡韦同位素内标色谱峰峰面积的比值为纵坐标或横坐标，以相应的恩替卡韦标准曲线工作液的恩替卡韦浓度为横坐标或纵坐标，建立恩替卡韦标准曲线；S3：采集待测样品溶液的色谱图的步骤；吸取一定体积的血清或血浆作为待测样品，加入3～5倍体积的恩替卡韦同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，然后取一定体积的上清液，再离心，最后取一定体积的上清液作为待测样品溶液；在与S2步骤中相同的超高效液相色谱质谱条件下，取一定体积的待测样品溶液注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得待测样品溶液的色谱图；S4：计算待测样品中恩替卡韦浓度的步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤灵玲，陈从艳，彭军，吴超超，高强，
申请(专利权)人：杭州佰辰医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33