一种人生长激素重组载体，表达菌株及构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种人生长激素重组载体，表达菌株及构建方法与应用，将如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列按照大肠杆菌密码子偏好性进行优化得到如SEQ ID NO.所示的核苷酸序列，对载体进行改造，插入TrxA片段，将密码子优化后得到如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的hGH基因序列插入改造后的载体的BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点之间构建而成。本发明专利技术将hGH的基因构建至改造过的pET‑32a(+)载体上，hGH基因顺序插入载体上的引入的TrxA之后，利用TrxA催化hGH蛋白二硫键的还原并辅助该蛋白正确折叠，最终表达纯化得到高度可溶的TrxA‑hGH融合蛋白，并将此蛋白作为标准品应用于ICP‑MS检测平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及表达菌株的构建及应用，尤其涉及一种人生长激素重组载体，表达菌株及构建方法与应用。

技术介绍

1、人生长激素(hgh)是由人下丘脑中垂体前叶嗜酸性细胞所分泌的的一种极为重要的非糖基化内源性激素，其作用主要为促进人体正常的生长发育与成熟，保持与维系各组织器官的功能，刺激软骨基质细胞增长、刺激成骨细胞分化，促进全身蛋白质、免疫球蛋白的合成，增强抗感染能力，是幼儿发育时期非常重要的激素。缺乏生长激素常造成儿童身材矮小或生长障碍。因此，hgh在治疗矮小症、儿童生长缓慢方面发挥着重要的作用。

2、但过量注射hgh可能导致一过性高血糖、甲状腺功能低下、肢端肥大症、巨人症等不良反应，造成严重后果，所以在进行hgh治疗前对人体内的hgh含量进行检测是必要的。电感耦合等离子体质谱(inductively coupled plasma mass spectrometry，icp-ms)是一种将icp的高温电离特性和四级杆质谱仪的快速、灵敏等优点相结合的元素与同位素分析技术。与其他检测平台相比，血清样品的基质效应对于icp-ms的影响极小，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种人生长激素重组载体，其特征在于，所述人生长激素重组载体是将如SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列按照大肠杆菌密码子偏好性进行优化得到如SEQ ID NO.所示的核苷酸序列，对载体进行改造，插入TrxA片段，将密码子优化后得到如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的hGH基因序列插入改造后的载体的BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点之间构建而成。

2.根据权利要求1所述的一种人生长激素重组载体，其特征在于，TrxA片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，载体为pET-32a(+)。

3.一种人生长激素高效表达菌株，其特征在于，由权利要求1所述的人生长激素重组...

【技术特征摘要】

1.一种人生长激素重组载体，其特征在于，所述人生长激素重组载体是将如seq idno.1所示的氨基酸序列按照大肠杆菌密码子偏好性进行优化得到如seq id no.所示的核苷酸序列，对载体进行改造，插入trxa片段，将密码子优化后得到如seq id no.4所示的核苷酸序列的hgh基因序列插入改造后的载体的bamhⅰ和xhoⅰ酶切位点之间构建而成。

2.根据权利要求1所述的一种人生长激素重组载体，其特征在于，trxa片段的氨基酸序列如seq id no.3所示，载体为pet-32a(+)。

3.一种人生长激素高效表达菌株，其特征在于，由权利要求1所述的人生长激素重组载体转化宿主菌制得。

4.根据权利要求3所述的人生长激素高效表达菌株，其特征在于，所述的宿主菌为大肠杆菌bl21...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴超超，韩涛，高强，
申请(专利权)人：杭州佰辰医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：