一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法及应用，本发明专利技术基于对培养基的优化，将SP2/0细胞的培养方式从贴壁培养驯化为悬浮培养，不仅可降低培养基的血清浓度，以节约成本。还可将细胞初始接种密度降至0.1*10<supgt;5</supgt;/mL，培养72h后细胞密度提高至6.0‑8.0*10<supgt;5</supgt;/mL，细胞活率保持在93％左右。且简化了细胞传代的操作步骤，无需胰酶消化，降低人为污染风险。提高融合率至98％左右，缩短杂交瘤开发的工艺时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养，涉及悬浮高效培养方法，尤其涉及一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法及应用。

技术介绍

1、杂交瘤技术是目前最重要的单克隆抗体制备技术。自1975年被专利技术以来，一直广泛地应用于各种相关领域。杂交瘤技术的基本原理为将两种细胞融合并同时保持这两种细胞的主要特性，b细胞(b淋巴细胞)能够特异性分泌且只能分泌一种抗体，但不能在体外连续培养，而sp2/0细胞(小鼠骨髓瘤细胞)是一种瘤细胞，在一定的培养条件下具有无限扩增的能力，所以将b细胞和sp2/0细胞融合之后，并使用选择性培养基进行筛选，则能够得到同时具有无限扩增能力并能够分泌单一抗体的细胞克隆。近几年随着抗体药免疫治疗技术的不断发展，作为最重要的单克隆抗体制备技术之一，杂交瘤技术也需要持续地优化和完善。

2、而现有的sp2/0细胞培养方式仍较为传统，为提高杂交瘤制备过程中的细胞培养效率，可使用不同培养基或培养方式，对于这些不同的培养基或培养条件需要进行测试。

3、sp2/0细胞通常在flask培养瓶中培养，使用dmem(dulbecco's modified ea本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，步骤1)中，所述基础培养基为1640完全培养基。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，所述1640完全培养基中含有10％FBS和1％青霉素-链霉素双抗。

4.根据权利要求1所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，步骤1)中，所述血清为FBS，血清的加入量为10％，8％，6％或5％中的一种。

5.根据权利要求4所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培...

【技术特征摘要】

1.一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，步骤1)中，所述基础培养基为1640完全培养基。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，所述1640完全培养基中含有10％fbs和1％青霉素-链霉素双抗。

4.根据权利要求1所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，步骤1)中，所述血清为fbs，血清的加入量为10％，8％，6％或5％中的一种。

5.根据权利要求4所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，血清的加入量为5％fbs。

6.根据权利要求1所述的一种小鼠骨髓瘤细胞悬浮高效培养方法，其特征在于，步骤1)中，hepe...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴超超，陈庆，高强，
申请(专利权)人：杭州佰辰医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：