水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体及其重组酵母菌株与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E基因真核表达载体及其重组酵母菌株与应用，所述载体为如SEQ ID NO：1所示的水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E的基因全序列与pGAPZαA的连接体。本发明专利技术公开的毕赤酵母的表达系统中能够成功表达水痘‑带状疱疹病毒的糖蛋白E，为后续该蛋白免疫原性检测及在毕赤酵母中的高效表达以及水痘带状疱疹疫苗的研发奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体及其重组酵母菌株与应用
本专利技术涉及基因工程领域，具体说，是涉及一种可用于表达水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因的表达载体及其重组酵母菌与应用。
技术介绍
水痘-带状疱疹病毒(varicella-zostervirus，VZV)是疱疹病毒属(Herpesviridae)α疱疹病毒亚科成员，是一种直径150～200nm的DNA病毒，形态学上是由核酸内心、蛋白衣壳和包膜构成的同心圆状结构，表面由162各壳微粒组成的对称正二十面体，有嗜皮肤和神经的特征，在幼儿及老年人群中多发病的一种双链DNA病毒，是一种发病快、传染性高的疾病。它可引起水痘和带状疱疹两种常见病，还可引起脑炎、肺炎等严重并发症；而患者痊愈后少量残存的病毒潜伏于体内的神经细胞中，待机体免疫力低下时又会大量繁殖，从而导致疼痛性的疾病带状疱疹(herpeszoster)。在免疫受损的个体中，VZV感染的发病率和病死率都很高。VZV引起的疾病及其相关后遗症已逐渐成为重要的公共卫生问题，并日益受到人们的重视。VZV壳外有一层或多层的含脂蛋白的包膜，整个VZV基因组是一种包含有72个开放阅读框，约编码本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体，其特征在于：所述载体为如SEQ ID NO：1所示的水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E的基因全序列与pGAPZαA的连接体。

【技术特征摘要】
1.水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体，其特征在于：所述载体为如SEQIDNO：1所示的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的基因全序列与pGAPZαA的连接体。2.一种水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E基因表达载体，其特征在于，所述载体的构建方法包括如下步骤：步骤A、设计引物，根据gE基因序列和pGAPZαA上的多克隆位点序列分别设计引物，以实现在目的片段两端分别添加EcoRI和NotI酶切位点；步骤B、构建重组载体，将扩增后gE基因片段和pGAPZαA经双酶切后连接，将连接产物经培养挑选阳性克隆子经测序鉴定正确后即得。3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，步骤A引物设计为：F1引物5′端设有EcoRI酶切位点，R1引物5′端设有NotI酶切位点，且：F1：5′-GGAATTCATGTCCGTTTTGAGATACGACGAC-3′，R1：5′-CCGCTCGAGTTATCTGATCAATGGGGAAGTA-3′。4.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，步骤B的具体操作为：以gE基因片段为模板进行PCR扩增，反应后的PCR产物经胶回收试剂盒回收；将回收片段和pGAPZαA经限制性内切酶EcoRI和NotI进行双酶切完全后，胶回收酶切片段；将回收后gE片段与pGAPZαA混合经T4连接酶16℃连接过夜；再将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，涂布于含有...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖杨，王雨，高媛，刘昊智，毛普加，袁军，李津，吴克，
申请(专利权)人：武汉博沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42